B/Yamagata系流感病毒血凝素(HA)蛋白疫苗的筛选研究

目的:筛选表达量高且具有血凝抑制活性的B/Yamagata系流感病毒血凝素(HA)重组蛋白。方法:以B/Singapore/INFTT-16-0610/2016的HA为基础,在HA胞外区C末端分别融合GCN4pLL三聚化基序、GCN4pLL-半胱氨酸及GCN4pLL-七鳃鳗可变淋巴细胞受体-B(VLR-B)抗体C端的肽段序列,分别获得HA突变体基因BY-T、BY-LLc及BY-PLc;分别插入pFastBac1,采用杆状病毒昆虫细胞表达系统进行表达。表达鉴定后,Strep-Tactin亲和层析纯化,然后鉴定纯化突变体蛋白的寡聚程度及血凝活性。突变体蛋白免疫小鼠,检测免疫血清HA特异性Ig G抗体和血凝抑制(HAI)抗体水平。结果:各HA突变体均能够有效表达,BY-T突变体表达水平最高,易于纯化,纯度好,呈多聚化形式存在;BY-LLc及BY-PLc表达水平次之,呈高聚化形式存在。三种HA突变体蛋白的血凝活性相当,均可有效诱发的HA特异性结合的Ig G抗体和HAI抗体。结论:HA蛋白胞外区C端融合寡聚化基序GCN4pLL的突变体易于纯化,具有血凝活性,可诱发小鼠产生HA特异性抗体和HAI抗体。研究为B/Yamagata系流感病毒重组蛋白疫苗的研发策略提供了参考。