山楂原花色素的抗氧化作用研究

本文用比色法测定山楂原花色素 (Proanthocyanidinsfromthefruitsofhawthorn ,HPA)的抗氧化作用 ,即对羟自由基、超氧负离子的清除作用以及抗脂质过氧化的作用 ;并且通过细胞学实验验证其对上皮细胞的抗氧化损伤的保护作用。试验表明 :山楂原花色素有很强的抗氧化作用 ,其作用在浓度为 0 .1mg/ml～ 1.0mg/ml之间随着浓度的增大而增强 ,对超氧负离子的清除和抗脂质过氧化作用尤为明显。在浓度为 1mg/ml时 ,对羟自由基和超氧负离子的清除率分别为 5 9 8%和 90 0 % ,对细胞氧化损伤的保护率为 41 96 % ;浓度为 0 5mg/ml时对脂质过氧化的抑制率就达 91 9%。试验同时还比较了葡萄籽原花色素 (Proanthocyanidinsfromthefruitsofgrape,GPA)和VC 的抗氧化作用 ,结果表明 :山楂原花色素与葡萄籽原花色素效应相当 ,并远远高于VC 的效应。

一种具有刺激红系细胞集落生成的螺旋藻（Spirulina platensis）蛋白

从螺旋藻体中通过ＤＥＡＥ纤维素层析、硫酸铵分部沉淀和葡聚糖Ｇ７５凝胶过滤得到一种具有离体情况下刺激红系细胞集落生成的功能蛋白质．ＳＤＳ—ＰＡＧＥ测分子量为１５０００道尔顿，等电点为４．８，含有藻蓝胆素．该蛋白命名为螺旋藻１５０００蛋白（Ｓｐｉｒｕｌｉａｐｌａｔｅｎｓｉｓ１５０００，ＳＰ—１５０００）．

小牛胸腺末端脱氧核苷酰转移酶的分离纯化

目的：利用蛋白质分离纯化技术提取末端脱氧核苷酰转移酶（ＴｄＴ），以研究其分子组成、理化性质，探讨其与白血病之间的联系。方法：用匀浆、ＤＥＡＥ纤维素柱层析、磷酸纤维素柱层析、（ＮＨ４）２ＳＯ４分段盐析、Ｓｅｐｈａｄｅｘ柱层析、羟磷灰石柱层析等方法，从小牛胸腺中分离纯化ＴｄＴ。每步均留样，测蛋白质含量和酶活力。结果：经一系列分离步骤，纯化ＴｄＴ，酶的活力增加２６．４倍，并发现在羟磷灰石柱层析的穿过峰部分，存在一个对ＴｄＴ有抑制作用的组份。结论：本研究成功地纯化ＴｄＴ，为进一步研究其理化性质及其临床应用奠定基础。

促红细胞生成素对实验性肾性贫血的作用

促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)是由肾细胞分泌的一种糖蛋白激素。从人胚肾细胞中诱导,经生物化学方法分离、提纯得到此品。本试验用5/6肾切除的方法造成大鼠慢性肾衰性(CRF)贫血,研究不同剂量EPO对CRF贫血的作用。结果表明EPO有显著的促进红细胞生成,改善CRF贫血状态,使其接近或达到正常水平,最佳剂量为1000 U/kg,并可预防实验性贫血,对正常鼠未见明显作用。

大鼠舌表皮细胞培养及其在表皮细胞抑素测活中的应用

利用成年大鼠舌腹膜表皮细胞 (RTE cell)体外培养 ,以及 MTT快速比色分析法建立了表皮细胞抑素的体外测活模型 ,不仅为抑素的分离纯化及性质研究打好基础 ,也可广泛用于研究其它各种物质对表皮细胞生长的影响。本文探讨了 RTE细胞原代培养及传代培养的方法和条件 ,以 MTT法替代传统的 3 H掺入法 ,建立了一个方便、快捷、直观的表皮细胞测活体系 ,并初步测定了抑素对表皮细胞生长的影响。

胸腺抑肽对大鼠异基因心肺联合移植的影响

胸腺抑肽是从牛胸腺中提取的具有免疫抑制作用的多肽，为了进一步探讨其免疫抑制机理及应用于临床治疗移植排斥反应的可能性，我们采用了大鼠心肺联合移植术，研究了其抗移植排斥反应的作用和可能机理，现报告如下。１材料与方法１．１药物和试剂胸腺抑肽２．６ｍｇ／ｍｌ...

数种因子对人胎肺细胞分泌t─PA的影响

原代人胎肺细胞培养２０ｄ后，更换１％ＢＳ培养基，细胞生长停止，ｔ－ＰＡ分泌量低；在１％ＢＳ培养基中使Ｃａ２＋浓度增加到３．５ｍｍｏｌ／Ｌ，ＬＨ浓度增加到１％，细胞表现较高ｔ－ＰＡ分泌活性，与１％ＢＳ组差异显著。以此配方为基础培养基，再分别补充以下因子：５μｇ／ｍｌ转铁蛋白，５ｍｇ／ｍｌ白蛋白，２．５ｍｇ／ｍｌ葡萄糖，１ｍｇ／ｍｌ甘露糖，１μｇ／ｍｌ氢化可的松，２Ｕ／ｍｌ胰岛素，２ｍｍｏｌ／Ｌ谷氨酰胺，２０ｎｍｏｌ／Ｌ亚硒酸钠。除谷氨酰胺和甘露糖外，其他因子均显著提高肺细胞的ｔ－ＰＡ分泌活性（Ｐ＜０．０５）

人源性TPO单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用人源性ＴＰＯ（ｈｕＴＰＯ）皮下免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与ＳＰ２／０实体瘤细胞融合，建立了２株稳定分泌抗ＴＰＯ单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为１９Ｄ１２和４９Ａ５，并对其进行了初步鉴定，采用简易正辛酸法从腹水中纯化单克隆抗体。结果：细胞融合率为８２％，杂交瘤细胞染色体数目正常，分泌的抗体为ＩｇＧ，腹水抗体效价为０．６～１．２×１０－５，与ＥＰＯ、ＧＭ－ＣＳＦ无交叉反应，连续培养生物性状稳定。抗ＴＰＯ单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立。

人胎肺细胞培养液中类血小板生成素的初步研究

人正常胎肺细胞用含１０％小牛血清的ＭＥＭ培养液原代培养，后用无血清的１９９培养液继续培养．硝酸纤维膜的斑点酶联免疫印迹法测定显示所收集的无血清培养液中含有能与人重组血小板生成素单抗结合的蛋白质．免疫细胞化学检测发现培养的肺细胞与血小板生成素单抗有明显阳性反应．用小鼠骨髓乙酰胆碱酯酶阳性细胞法测定肺细胞在不同培养时间所收集的培养液促血小板生成活性的大小，结果显示收集的培养液有明显刺激活性并且其活性与肺细胞的密度有相关性．

促红细胞生成素在小鼠体内的分布和代谢

促红细胞生成素用氯胺T法进行^(125)I标记,分别给小鼠ip高、中、低剂量(2μg、1μg、0.3μg/鼠)后,血和大多数器官放射性强度在1～2h内达到峰值4～12h降到一半,72h后仅少量残留。在主要器官中无明显积累,主要从尿中排出。

小牛胸腺末端脱氧核苷酰转移酶理化分析

目的：研究已分离纯化的末端脱氧核苷酰转移酶（ＴｄＴ）的理化性质及其抑制因子的化学本质。方法：用一系列电泳方法分析ＴｄＴ及抑制因子的化学组成、等电点及分子量，并自行设计一组酶活力检测实验，以分析判断抑制因子的化学本质。结果：等电聚焦电泳表明ＴｄＴ有３个条带，ｐＩ分别为５．８、６．３、６．９，抑制因子有４个条带，ｐＩ分别为５．３、６．４、６．８、７．０。ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示ＴｄＴ有５个条带，分子量分别为３８０００、４６０００、５２０００、６６０００、８７０００，抑制因子有２个条带，分子量为２００００和２４０００。抑制因子是一种脱氧核糖核苷酸酶。结论：抑制因子与ＴｄＴ紧密伴随，参与生物体内ＴｄＴ活力的调节。

人胰腺细胞培养及胰岛素的分泌

人胰腺细胞培养及胰岛素的分泌王石泉，汤国枝，张鹤云，李敏意，金以丰（南京大学生物化学系，南京２１００９３）胰岛β细胞的体外培养获得胰岛素已有报道，但大多采用新生大鼠胰腺，且β细胞成活率低，分泌量少，还处在研究阶段［１－４］．本实验采用人胰腺细胞做较大...

人红细胞生成素单克隆抗体的制备、鉴定及应用研究

用rhEPO作为抗原,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与X63Ag8.653小鼠骨髓瘤细胞融合,用碱性PAGE方法进一步分离并纯化的rhEPO,包被PVC板,对杂交瘤用ELISA方法进行筛选,获得两株稳定分泌抗hEPO单抗的杂交瘤细胞株。经鉴定分别属于IgG_1、IgG_(2b),轻链均为k链,K_d分别为5.53×10^(-10)mol/L和1.34×10^(-10)mol/L。用Western blot方法证明两者对hEPO具有高度的专一性,能特异地识别rhEPO和尿源hEPO。所制备单抗可作为亲和层析的配体,用于再生障碍性贫血病人尿中EPO及哺乳类工程细胞所表达的hEPO的分离、纯化,并可用于hEPO的定量检测。

胸腺淋巴细胞抑裂素的分离及其性质的研究

从猪胸腺分离到一种低分子量Ｔ淋巴细胞抑裂素，经凝胶过滤测定分子量约为１２００；等电聚焦显示二条带，等电点分别为６．６和７．２，此抑制素不是多胺类物质；蛋白酶处理可使之丧失抑制活性，核糖核酸酶处理不影响活性，证明为多肽物质；抑裂素在体外具有抑制淋巴细胞转化及刺激白介素－２产生的能力；这种抑制作用证明不是由于细胞毒所引起的；抑制是可逆的．体内试验此抑裂素可以抑制多种免疫反应。

小牛类表皮生长因子活性肽的高分子复合物质

小牛颌下腺通过中性抽提，硫酸按沉淀，ＣＭ５２和ＤＥ５２负吸附，ＳｏｐｈａｄｃＸＧ７５凝胶过滤得到一个具有类表皮生长因子活性的大分子多肽，该分子可在ＰＨ７．习，ＤＥ５２层析盐梯度洗脱分开成２７ＫＤ无活性的结合蛋白和６ＫＤ的具有表皮生长因子活性小肽。通过计算，该大分子为结合蛋白和类表皮生长因子活性肽１：１结合的三聚体，大分子复合物比类表皮生长因子小肽显示更高的生物活性。

小牛HSS中有效成分分离及其生物活性的初步研究

新生小牛肝细胞刺激物质（ｃＨＳＳ）经超滤、乙醇沉淀、离子交换层析、分子筛层析等步骤分离，获得肝细胞生长正调控因子（ｃＨＳＳα），负调控因子（ｃＨＳＳβ），并观察了它们对肝癌细胞、原代肝细胞的影响。结果表明：ｃＨＳＳα能促进这两种肝细胞的ＤＮＡ合成，其半数有效剂量ＥＤ５０值为３０ｎｇ／ｍｌ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳显示其分子量为１３０００；而ｃＨＳＳβ明显抑制肝癌细胞的ＤＮＡ合成，其半数抑制剂量ＩＤ５０值为１３０ｎｇ／ｍｌ。

一种新的红细胞生成调控因子P59蛋白质的分离纯化和性质研究

以正常人尿为原料，经过ＤＥＡＥ纤维素离子交换层析、硫酸铵沉淀、凝胶过滤、碱性制备电泳等纯化步骤得到一个分子量为５９ｋＤａ的蛋白质，称为Ｐ５９蛋白．该蛋白质在体外可以促进１３ｄ胎鼠肝细胞红系集落的形成，在体内可以刺激小鼠网织红细胞的生成，促使５／６肾切除大鼠贫血症状和Ｈｙｍａｎｎ肾炎大鼠贫血症状的改善，对尿毒症病人的贫血症有明显疗效．

淋巴细胞抑裂素的理化性质及生物活性研究

本文以猪胸腺为原料 ,经超滤、Biogel p- 4凝胶过滤、DEAE- Sephadex A- 2 5离子交换层析、Sephadex G- 10过滤、HPLC分离等步骤 ,得到分子量小于 30 0 0的多个组分 ,对其中二个组分测定了 N端序列。该抑裂素除可抑制 Con A刺激的淋巴细胞对 3H- Td R的掺入之外 ,体内可抑制机体对异源蛋白的免疫应答反应 ,延迟异体移植皮肤的存活时间 ,还可抑制大鼠同种异体心肺联合移植引起的排斥反应。鉴于抑裂素具有种族非专一性 ,组织专一性 ,非细胞毒和作用可逆性等特点 ,用于治疗自身免疫性疾病 。

人胎肺细胞的条件化培养液中两种类型纤溶酶原活化物的分离

用正常人胎肺细胞体外培养，从其培养液中分离纤溶酶原活化物（ＰＡ），通过ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－５０层析，硫酸铵沉淀和Ｆｉｂｒｉｎ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，Ｌｙｓｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０凝胶过滤等步骤，从１０．５ｌ条件培养液中分离纯化得到两种类型的纤溶酶原活化物，ｔ－ＰＡ９０μｇ，ｕ－ＰＡ８００μｇ．在还原条件下ＳＤＳ－ＰＡＧＥ均显示单带，分子量ｔ－ＰＡ为７２ｋＤ，ｕ－ＰＡ为５４ｋＤ，纤溶比活分别为１５６０００ＩＵ／ｍｇ蛋白和１０６０００ＩＵ／ｍｇ蛋白．

慢性肾衰血浆中红细胞生成抑制蛋白的分离纯化

本文采用慢性肾功能衰竭（ＣＲＰ）病人血浆为材料，通过硫酸铵分步沉淀，ＤＥＡＥＤＥ－５２纤维素离子交换层析、ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－１００凝胶层析及高效液相凝胶层析（ＨＰＬＣ），从中分离出一种蛋白质．经体外红系集落（ＣＷ－Ｅ）实验证明对ＣＦＵ－Ｅ有明显的抑制作用．该蛋白的分子量为５７０００，等电点（ＰＩ）为４．２，我们称这种蛋白为红细胞生长抑制蛋白（Ｅｔｙｔｈｒｏｒｏｉｅｓｉｓｉｎｈｉｔｏｒｒａｃｔｉｖｔｙｐｒｏｔｉｎ）．