PCB153对原代培养大鼠睾丸支持细胞SOD活性、DNA损伤及凋亡的影响

目的:探讨2,2′,4,4′,5-五氯联苯(2,2′,4,4′,5-hexachlorobiphenyl,PCB153)暴露对原代培养大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cells,SC)超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、DNA损伤、细胞凋亡的影响以及抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)的干预作用。方法:原代培养出生18～20d雄性SD大鼠的睾丸支持细胞,设PCB153不同浓度的染毒组(加入10、20、30μmol/L PCB153),NAC组(以300μmol/L NAC预处理1h后加入30μmol/L PCB153),和对照组(加入与PCB153最大染毒量等体积的DMSO),各组细胞经上述处理后继续培养24h,用SOD试剂盒测定各组细胞SOD活性,彗星实验测定DNA损伤程度,流式细胞术检测细胞凋亡,细胞荧光标记观察凋亡形态。结果:染毒24h后,大鼠睾丸支持细胞SOD活性随着PCB153染毒剂量的升高而降低,20、30μmol/L染毒组显著低于对照组(P<0.05),NAC预处理可提升SOD活性(P<0.05)。各PCB153处理组及NAC预处理组与对照组相比,DNA损伤间的差异均无统计学意义(P>0.05),细胞凋亡率则均显著增加(P<0.05),NAC预处理可降低PCB153所致的凋亡率(P<0.05)。结论:10～30μmol/L PCB153染毒24h可诱导的原代培养大鼠SCSOD活性降低,细胞凋亡增加,但并未引起DNA损伤,NAC预处理具有保护作用。

饮水暴露六价铬对SD大鼠外周血DNA损伤和氧化应激的影响

[目的]研究饮水摄入六价铬对大鼠外周血DNA损伤和血浆氧化应激的影响。[方法]取雌、雄SD大鼠各40只随机分为4组,每组10只,每笼2只,4组分别自由摄入饮用水(对照)及30、100、300mg/L重铬酸钾(K2Cr2O7)水溶液4周,每周3次记录每笼饮水量并更换现配的K2Cr2O7溶液。实验结束时测定体重及心、肝、肾、肺、胃、脾组织重量,计算脏器系数和大鼠平均每日饮水量,并测定外周血DNA损伤及血浆中8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxydeoxyguanosine,8-OHdG)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量。[结果]雌鼠300mg/L组的体重增加量低于对照组(P<0.05);雌鼠300mg/L组、雄鼠100mg/L和300mg/L组的平均每日饮水量均低于对照组(P<0.05,P<0.01)。300mg/L组雌、雄大鼠DNA损伤均加重(P<0.05)。雌鼠100mg/L和300mg/L组血浆中8-OHdG含量及雌鼠3个剂量组和雄鼠100、300mg/L组血浆中MDA含量均显著高于对照组(P<0.05,P<0.01)。[结论]饮水暴露Cr(VI)可致大鼠外周血DNA损伤加重,并使血浆中8-OHdG和MDA的含量升高。

原代培养大鼠睾丸支持细胞PCB153暴露后超氧化物歧化酶活力和丙二醛含量的时间变化特征

目的探讨PCB153染毒后原代培养大鼠睾丸支持细胞中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量的时间变化特征。方法原代培养18～20日龄清洁级雄性SD大鼠的睾丸支持细胞。分别加入0(溶剂对照,0.5%DMSO)、10、20、30、40、50μmol/L PCB153染毒24、48 h,同时,设立无细胞的空白对照,检测细胞存活率。分别加入0(溶剂对照,0.3%DMSO)、10、20、30μmol/L的PCB153溶液染毒6、12、24、36、48 h,测定MDA含量和SOD活力。结果 CCK-8试验结果表明,10、20、30μmol/L PCB153为测定原代培养大鼠睾丸支持细胞SOD活力和MDA含量的合适染毒剂量。与溶剂对照组比较,20、30μmol/L PCB153染毒24 h大鼠睾丸支持细胞中SOD活力下降(P<0.05),MDA含量升高(P<0.05),出现明显的剂量-效应关系。与同一剂量PCB153染毒组前一时间点比较,30μmol/L PCB153染毒12 h和20μmol/L PCB153染毒24 h睾丸支持细胞中SOD活力均升高,10、20μmol/L PCB153染毒36 h睾丸支持细胞中SOD活力均下降(P<0.05);30μmol/L PCB153染毒24 h和20μmol/LPCB153染毒36 h睾丸支持细胞中MDA含量均升高,20μmol/L PCB153染毒48 h睾丸支持细胞中MDA含量下降(P<0.05);两者在12、24、36 h时间点出现明显的时间-效应关系。结论 PCB153染毒后原代培养大鼠睾丸支持细胞中,SOD活力随染毒时间的延长呈先上升后下降,随染毒剂量的升高而降低;MDA含量随染毒时间的延长和染毒剂量的升高而升高;两者均在24 h出现明显的剂量-效应和时间-效应关系。

PCB153对人B淋巴母细胞基因表达谱的影响

目的研究2,2’,4,4’,5,5’-六氯联苯(2,2’,4,4’,5,5’-hexachlorobiphenyl,PCB153)对人B淋巴母细胞基因表达谱的影响。方法采用0(对照)和25、100、200μmol/L的PCB153分别处理人B淋巴母细胞2、24、48 h,收集细胞后提取总RNA。PCB153处理24 h的RNA样本用Illumina人HT-12 v4全基因组表达谱芯片筛测差异表达基因,并对差异基因进行基因本体论(gene ontology,GO)分类分析。在PCB153处理2、24、48 h样本中用实时定量PCR对候选差异基因进行验证。结果芯片结果显示,各剂量PCB153处理样本中分别发现161、191、1 006个差异基因,三个剂量组重叠差异基因数为15个,其中,上调基因4个、下调基因11个。选取6个差异基因用定量PCR进行验证,发现2个上调基因(CCDC92和TMEM175)及3个下调基因(CCL22、STK38L和GZMK)的表达改变与芯片结果一致。基因CCDC92、CCL22、GZMK和TMEM175等可影响多种淋巴细胞功能,基因STK38L可作用于细胞周期和细胞凋亡等,基因CCL22和MTDH的异常表达则与多种癌症密切相关。结论体外急性染毒PCB153干扰了人B淋巴母细胞某些重要功能基因的表达,为多氯联苯毒性的分子作用机制提供了依据。

多氯联苯高污染地区人群相关基因表达改变的研究

目的研究多氯联苯暴露人群外周血相关基因表达改变。方法采集32例电子垃圾拆解地居民和48例对照人群外周血样，分离提取总RNA，用实时荧光定量PCR检测CCDC92、CCL22、GZMK、MTDH、STK38L、TMEM175等6个基因的mRNA表达水平。结果根据双标准曲线法，拆解地居民CCL22基因的表达水平为（4．51±2．37）％，低于对照组的（6．764-4．82）％（t=2．451，P〈0．05）。根据2-△△ct法，两者的表达水平分别为（0．54±0．28）倍和（0．81±0．58）倍（t=2．480，P〈0．05）。根据双标准曲线法，GZMK和MTDH基因的表达水平高于对照组（t=-2．036、-2．228，P〈0．05）。根据。幽。法，两者的表达水平也高于对照组（t=-2．035、-2．223，P〈0．05）。两种定量方法存在较好的相关性（r=1．000，P〈0．01）。结论CCL22、GZMK和MTDH三个基因在多氯联苯暴露人群中表达异常，可用作多氯联苯暴露人群的效应标志物。

电焊工血液重金属含量与外周血DNA损伤的相关性

目的研究电焊工血液中重金属含量及其与DNA损伤之间的关系。方法抽取22名来自医疗器械制造企业（A组）、25名来自船舶制造企业（B组）的电焊工以及22名管理人员（对照组）的外周静脉血，用电感耦合等离子体质谱仪（ICP-MS）检测血液中铬（Cr）、锌（Zn）、镉（Cd）、铅（Pb）、钻（Co）、镍（Ni）、锰（Mn）的含量，并用彗星试验检测外周血DNA损伤。用多元线性回归法及相关性分析法分析重金属含量与DNA损伤之间的关系。结果与对照组相比，A，B组电焊工血液中Pb和Mn含量均明显增高，差异有统计学意义（A组：Upb=136．0，tMn=-6．2；B组：Ueb=78．5，tMn=．7．6，P〈0．01），A组电焊工血液中Cr、Ni含量较高，差异有统计学意义（Ucr=64．0，tNi=-4．4，P〈0．01）；B组电焊工血液中Cd含量较高，差异有统计学意义（U=260．0，P〈0．01）。多元线性回归分析显示，控制B组与对照组饮酒史的差异因素后，B组电焊工外周血DNA损伤仍显著高于对照（β=3．9，SE=0．9，t=4．3，P〈0．01）。但相关性分析显示，两组电焊工血液中各重金属含量与外周血DNA损伤均无显著相关性（P〉0．05）。结论电焊工血液中的重金属负荷种类可能与电焊丝的材料有关，但本研究并未发现单一重金属负荷与外周血DNA损伤存在相关性。B企业外周血DNA损伤可能与其他未明因素有关。