mIκBα基因转染肝癌细胞HepG2的放射增敏作用

目的探讨mIκBα基因是否增加肝癌细胞的放射敏感性。方法实验分3组:亲本细胞对照组、HepG2细胞转染Adv组、转染mIκBα基因的HepG2细胞-AdmIκBα组。在6GyX射线照射前后分别测定3组细胞下列指标:Westernblot检测肝癌细胞浆内IκBα值;电泳迁移率法测定肝癌细胞核内NF-κB活性;TUNEL染色法测定肝癌细胞凋亡指数。2Gy放射线照射后的肝癌细胞存活分数和用多靶单击模型确定的Do、Dq值判定肝癌细胞的放射敏感性。结果放射线照射前,Adv组与HepG2组细胞浆内IκBα呈低值,照射后更减低;而细胞核内NF-κB活性照射前为(+),照射后为(++),呈持续激活状态;细胞凋亡指数在照射前分别为1.4、1.6,照射后升高至8.9、11.7。AdmIκBα组在照射前、后细胞浆内IκBα均呈高值,均为Adv组的3倍;而细胞核内NF-κB活性在照射前、后均呈阴性;照射前细胞凋亡指数为18.2,照射后升高至88.3。3组中AdmIκBα组细胞存活分数最低,为0.301;而SER(放射增敏比)最大,为2.099;Do值最小,为1.468,Dq值最小,为0.709。结论用mIκBα基因转染肝癌细胞HepG2,可抑制肝癌细胞内NF-κB的抗凋亡活性,增强肝癌细胞的放射敏感性。

外源性mIκBα基因抑制肝癌细胞HepG2的生长

目的观察核转录因子的抑制基因mIκBα在肝癌细胞株HepG2的表达及对该细胞株生长的影响。方法将由293包装细胞产生的含mIκBα的Ad腺病毒上清(Ad-mIκBα)和含包装载体的腺病毒上清(Adv)感染HepG2细胞,观察感染后HepG2细胞的绿色荧光蛋白(GFP)表达和mIκBα蛋白表达,并观察细胞的平板集落形成数、软琼脂集落形成能力、细胞生长曲线、裸鼠成瘤实验。结果肝癌细胞感染腺病毒后GFP表达阳性,感染含mIκBαAd腺病毒的肝癌细胞有mIκBα蛋白表达;HepG2/Ad-mIκBα细胞形成的集落数明显比HepG2/Adv和HepG2细胞形成的集落数少(P<0.05);HepG2细胞、HepG2/Adv细胞在软琼脂内存活,并形成桑椹样细胞集落,而HepG2/Ad-mIκBα细胞在软琼脂上无生长;细胞生长曲线显示HepG2/Ad-mIκBα细胞生长速度较HepG2/Adv、HepG2亲本细胞有所减慢,但饱和密度无显著性差异。裸鼠接种4周后HepG2/Ad-mIκBα细胞成瘤率为80%,HepG2/Adv细胞成瘤率为100%,肿瘤形成率无显著性差异,HepG2/Ad-mIκBα细胞形成的肿瘤的体积比HepG2/Adv细胞形成的肿瘤的体积明显减小(P<0.05)。结论mIκBα基因可以抑制HepG2肝癌细胞的生长。

大肠杆菌内同源重组法构建含mIκBα基因的重组腺病毒及其在Hep G2细胞中的表达

目的通过在大肠杆菌内同源重组,快速、有效地制备含人mIκBα基因的腺病毒重组体的方法,并观察其在肝癌细胞株Hep G2细胞中的表达.方法首先将目的基因mIκBα克隆进结合有绿色荧光蛋白报告基因的穿梭质粒 -pAdTrack-CMV中,将新形成的质粒pAdTrack-CMV-mIκBα用限制性内切酶PmeI线性化后,再与腺病毒骨架质粒-pAdEasy-1一同转化进大肠杆菌株BJ5183细胞中.用对卡那霉素抗性挑选重组体质粒-pAd-mIκBα,并通过限制性内切酶分析,确认重组.最后将线性化后的重组体质粒转染进腺病毒包装细胞株293细胞.腺病毒重组体Ad-mIκBα在7～10 d内产生.借助GFP的表达,测定和观察在293细胞中重组腺病毒的滴度及其在HepG2细胞中的表达.结果经PCR检测提示重组体腺病毒含有mIκBα基因.Ad-mIκBα的滴度是2.7×109PFU/ml.当MOI等于10时,在HepG2细胞中,Ad-mIκBα病毒可有效和稳定地表达,其感染效率24 h为57%,48 h达100%.结论运用在大肠杆菌内同源重组法能有效和方便地构建含目的基因mIκBα的腺病毒重组体Ad-mIκBα.该重组体能在293细胞中扩增,并有效地感染Hep G2细胞.为进一步研究mIκBα基因的功能和该基因治疗肝癌提供了一个良好的基因转导载体.

外源性mIκBα基因在肝癌细胞Hep G2中的表达及对其生长的影响

目的观察mIκBα基因对肝癌细胞生长的影响。方法同源重组法构建含mIκBα基因的重组腺病毒质粒,经293细胞包装成含mIκBα的重组腺病毒。用此腺病毒感染肝癌细胞Hep G2,测定感染效率。通过集落形成实验、细胞生长曲线等方法观察目的基因对肝癌细胞生长的影响。结果重组腺病毒含有mIκBα基因。重组腺病毒可在肝癌细胞中稳定地表达,感染的肝癌细胞形成的集落数明显少于对照组(p<0.01);重组腺病毒感染的肝癌细胞在软琼脂内存活,对照组细胞则无法存活;重组腺病毒感染的肝癌细胞生长速度减慢。结论含目的基因mIκBα的腺病毒重组体在293细胞中扩增并有效地转染Hep G2细胞;外源性mIκBα基因可以抑制肝癌细胞Hep G2的生长。

三维适形放疗后放射性肝损伤的MRI表现

目的分析放射性肝损伤的MRI表现。方法回顾性分析2001年9月至2005年10月我科的20例放射性肝损伤的MRI资料,20例患者均因肝脏肿瘤接受过1￣2疗程的三维适形放疗,MRI资料包括平扫与增强扫描,4例因疑肿瘤复发而经穿刺确诊为放射性肝损伤。结果急性放射性肝损伤表现为与受照射区形态相似大片状肝水肿,T1WI上为低信号,T2WI为高信号,Gd-DTPA增强后动脉期无强化。慢性放射性肝损伤平扫T1WI为不规则片状稍低信号,T2WI为稍高信号,Gd-DTPA增强后动脉期强化不明显,静脉期及延迟期强化明显。结论放射性肝损伤MRI表现有一定的特征性;MRI平扫与动态增强扫描有较高的诊断价值。

放射性脑损伤的MRI诊断

目的分析放射性脑损伤的MRI表现。方法回顾性分析2000年9月～2005年5月就诊于该科的15例放射性脑病的MRI资料,10患者均因头颈部肿瘤接受过1、2疗程的放疗,MRI资料包括平扫与增强扫描,3例因疑肿瘤复发而经手术确诊为放射性脑损伤。结果急性放射性脑损伤表现为大片状水肿,T1WI上为低信号,T2WWI为高信号,增强后无异常强化。慢性期表现平扫T1WI为大片状低信号,T2WI为大片状高信号,增强后表现为珊瑚状、地图状和环状等不规则形。结论放射性脑损伤表现为水肿与占位效应,慢性期除水肿外,增强T1WI表现为特殊形态的强化。

Fascin-1在鼻咽癌中的表达及其临床意义

目的探讨Fascin-1在鼻咽癌患者中的表达水平并评价其与鼻咽癌预后的关系。方法采用免疫组织化学方法回顾性地检测194例鼻咽癌组织标本和33例鼻咽慢性炎症组织Fascin-1蛋白的表达。采用Western blotting检测Fascin-1蛋白在鼻咽癌细胞株中的表达情况。Fascin-1表达与临床病理学参数统计方法采用非参数Kruskal-Wallis H检验;生存分析采用Kaplan-Meier方法;Fascin-1与鼻咽癌预后的临床意义采用Cox回归方法。结果194例鼻咽癌患者中149例(77%)为男性,45例(23%)为女性;178例成功进行了IHC检测。154例(87%)阳性表达,Fascin-1强阳性表达于侵袭的边缘部位,而在肿瘤的内部呈弱阳性表达。晚期鼻咽癌患者(Ⅲ期和Ⅳ期)Fascin-1表达水平高于早期鼻咽癌患者(Ⅰ期和Ⅱ期)(P<0.05)。Fascin-1表达与鼻咽癌分期(P=0.003)和T分期(P=0.014)相关,而与患者年龄、性别、淋巴结转移及远处转移无相关。Kaplan-Meier生存分析统计结果显示,Fascin-1表达与鼻咽癌患者存活率呈负相关(P=0.001)。利用多因素Cox回归模型,在早期鼻咽癌患者中,Fascin-1是一个独立的预后因素(P=0.043,HR6.06)。结论Fascin-1是鼻咽癌进展和预后的标志物,可以作为早期鼻咽癌的独立预后因素。

阿霉素诱导肺癌细胞凋亡的实验研究

目的：建立培养肺癌细胞凋亡模型。方法：人肺癌细胞Ａ５４９在含２０μｍｏｌ／Ｌ阿霉素培养液中培养４ｈ，换用普通培养液培养，在不同时间点收集漂浮细胞，检测漂浮细胞计数，锥虫蓝排斥实验，吖啶橙染色，电镜观察，ＤＮＡ电泳，流式细胞仪分析。结果：处理的Ａ５４９细胞形态学表现为锥虫蓝拒染，细胞皱缩变形，细胞膜完整，部分呈泡状突起，细胞核染色质浓聚、边集或碎裂，凋亡小体形成。细胞ＤＮＡ电泳见梯状电泳带，流式细胞仪检测发现凋亡峰出现，符合凋亡细胞特征。凋亡细胞主要存在于漂浮细胞中，最多出现于改用普通培养液培养１０～１２ｈ。结论：阿霉素可以诱导Ａ５４９肺癌细胞发生凋亡。

PET-CT和MRI与螺旋CT对原发性肝癌病灶检出的对比观察

目的:比较PET-CT、MRI与螺旋CT对肝癌病灶的检出差异,为肝癌放疗时确定靶区病灶积累影像学的比较资料。方法:回顾性分析诊断为原发性肝癌且治疗前进行了PET-CT、MRI与螺旋CT检查的病例共43例,比较3种检查方法对肝内及肝外病灶的检出情况。结果:在43例患者中,PET-CT检出了40例患者的127个肝内病灶及22例患者的137个肝外病灶;MRI检出了39例患者的114个肝内病灶及20例患者的103个肝外病灶;螺旋CT检出了35例患者的92个肝内病灶及14例患者的60个肝外病灶。其中PET-CT与螺旋CT比较,总病灶检出数(P<0.05)及肝内肝外病灶检出数(P均<0.001)差异有统计学意义;MRI与螺旋CT比较肝内外病灶检出数差异有统计学意义,P均<0.001;PET-CT与MRI比较中仅肝外病灶的检出数,差异有统计学意义,P<0.001。结论:对肝内外病灶的检出PET-CT与MRI均优于螺旋CT;PET-CT对转移灶的检出较有优势,对高分化肝细胞癌则MRI优于PET-CT;以CT模拟定位确定靶区制定放疗计划时,有针对性的运用MRI和PET-CT的影像资料,具有重要的参考价值。

细胞凋亡研究拓宽了对恶性肿瘤的认识

关于恶性肿瘤发生机制的经典内容是细胞分化与增殖紊乱。近年来，人们改变了研究恶性肿瘤的角度，更注重对细胞凋亡机制的研究。目前的研究结果表明：恶性肿瘤的发生及特征不仅与细胞分化增殖机制紊乱有关，而且与细胞凋亡机制也有密切关系。从认识论的角度看，细胞增殖分化机制与细胞死亡机制这两个相互矛盾的方面构成了恶性肿瘤发生机制的对立统一体。细胞凋亡研究将从一个全新的角度更进一步加深人们对恶性肿瘤发生机制的认识。

肺减容术治疗重度肺气肿的进展

肺减容术是50年代提出的治疗重度肺气肿的手术方法,近年已开始应用于临床。本文介绍该手术的治疗原理、手术适应症、手术方法、并发症、围术期处理及疗效,并对其存在问题及应用前景简要介绍。

单纯放射治疗脑干肿瘤22例疗效分析

发生于脑干的肿瘤,手术难以切除,放射治疗占有重要地位。现将我科自1987年6月～1992年4月间单纯放射治疗22例脑干肿瘤疗效分析如下。材料与方法本组22例中,男10例,女12例。年龄6～56岁。开颅探查术5例,病理报告为胶质细胞瘤Ⅰ～Ⅲ级3例(其中1例伴有出血),血管网织细胞瘤和间变性星形细胞瘤各1例;其余17例均未手术,由 CT 扫描确诊9例.MRI 确诊8例。全组病例均采用医用电子直线加速器10MVX线外照射。在 CT、MRI 片或模拟定位机下定位设野,照射野范围包括病变外0.5cm,设脑干左。

晚期肺鳞癌瘤体注药的放射治疗——附31例远期观察

晚期肺鳞癌确诊时多已不能手术切除,但病变发展较慢,如能充分控制局部肿瘤,亦可取得一定疗效。我院从1983年2月至1984年4月对晚期肺鳞癌患者,采用瘤体注射氟脲嘧啶合并放射治疗,疗效满意,报告如下。