PDX模型在肿瘤研究中的应用现状与展望

在我国,癌症的发病率呈现继续上升的趋势[1]。尽管过去几十年中,抗肿瘤药物的开发取得了爆炸式的发展,但大多数新疗法都不能顺利通过III期临床试验[2]。究其根源,缺乏合适的体内模型是主要障碍。患者来源的异种移植瘤(PDX)模型是指患者肿瘤组织或者细胞植入的免疫缺陷小鼠,被认为和原始肿瘤有很高的相似度,目前广泛应用于各类肿瘤的研究中。

肿瘤脑转移机制研究进展

脑转移瘤是临床上最常见的脑部肿瘤,也是大多数肿瘤患者晚期症状,其预后极差。对肿瘤脑转移发生、发展机制的深入研究对脑转移的诊疗具有重要意义。本文就肿瘤细胞与脑部微环境的相互作用、肿瘤细胞穿越血-脑脊液屏障及脑部克隆形成的机制研究进展做综述。

吉非替尼耐药的低分化肺癌细胞系的建立及其生物学特征分析

目的从1例中国女性肺癌患者的胸腔积液中分离建立原代低分化肺癌细胞系,并进行生物学特征分析。方法收集1例肺癌患者胸腔积液,取沉淀物,在含有10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素溶液和1%非必需氨基酸的DMEM/F12培养液中培养。待细胞长满后,使用胰蛋白酶梯度消化法传代使肿瘤纯度达>95%。进一步分析已建立细胞系(命名为ZLC-001)的核型、短串联重复序列(short tandem repeats,STR)、细胞增殖、肿瘤标志物检测和成瘤性等生物学特征。肿瘤原代细胞三维立体培养法药敏检测技术(collagen gel droplet-embedded culture drug sensitivity test,CD-DST)用于评估ZLC-001对吉非替尼、舒尼替尼、索拉非尼、拉帕替尼和伊马替尼的药物敏感性。结果成功建立来自低分化肺癌患者(女性,44岁,pStageⅣ)的原代细胞系ZLC-001。ZLC-001细胞可贴壁生长,并可稳定传代>30代。生物学特征分析中核型分析表明染色体数目主要分布在60~69。免疫组织化学结果显示,细胞角蛋白(cytokeratin,CK)和乳腺癌相关蛋白1(breast cancer associated protein 1,BRAP1)为阳性,波形蛋白、Wnt-1和钙结合蛋白(calretinin,CR)个别阳性,Napsin A、MOC-31、甲状腺转录因子1(thyroid transcription factor 1,TTF1)和D2-40均为阴性。ZLC-001细胞在裸鼠中成瘤能力强。ZLC-001对吉非替尼、舒尼替尼、索拉非尼和伊马替尼耐药,但对拉帕替尼中度敏感。结论成功建立来自中国患者的新型低分化肺癌细胞系。这种功能齐全的细胞系为开展肺癌生物学和药物反应研究提供理想的模型与工具。

纵隔上皮样血管内皮瘤误诊为畸胎瘤1例

患者女,22岁。发现左颈部肿物1年余,伴间断疼痛。体格检查:左侧锁骨上窝可触及肿块,边界较清,大小约4.0 cm×3.0 cm,质地偏硬,活动度稍差。实验室检查:糖类抗原19941.77 U/ml。胸部CT表现:左侧前纵隔可见巨大团状软组织影,沿纵隔纵向生长,向上达T_(1)椎体水平,向下达肺动脉分叉水平,最大横截面9.9 cm×6.6 cm。肿块占位效应明显,甲状腺、气管、食管及大血管受压移位,周围脂肪间隙模糊不清.

EB病毒相关淋巴上皮瘤样癌中肿瘤浸润淋巴细胞分布特征及其临床意义

目的探讨EB病毒相关淋巴上皮瘤样癌(LELC)中肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)亚群分布特征与不同病理亚型LELC之间的关系及临床意义。方法收集2006年1月至2018年10月就诊于浙江省肿瘤医院、有足够石蜡组织样本、临床资料完整、EB病毒编码RNA阳性LELC病例;免疫组织化学染色方法检测免疫细胞分型标志物(CD20、CD138、CD4、CD8、CD56和FOXP3)。两位病理医生对HE染色切片进行复核,并对免疫组织化学结果进行判读。相关性分析评估TIL的亚群分布与病理相关特征的关系,生存分析研究其与临床预后的关系。结果入组EB病毒相关LELC 102例,其中间质富于TIL的经典型LELC(c-LELC)46例,间质相对缺乏TIL的非经典型LELC(n-LELC)56例。TIL分析结果显示,c-LELC中各亚型TIL均较丰富,其中以B淋巴细胞为优势亚群,n-LELC中TIL数量相较于c-LELC少,其中优势亚群为T淋巴细胞为主。在这两组中浆细胞分布无明显差异。生存分析发现TIL总数量、CD20^(+)B细胞、CD4^(+)T细胞和表达FOXP3的调节性T(FOXP3^(+)Treg)细胞浸润情况对LELC的总生存期(P值分别为0.004、0.003、0.008、0.025)和无病生存期(P值分别为0.011、0.003、0.038、0.041)均有显著的正向影响。结论不同形态学亚型EB病毒相关LELC具有不同的肿瘤免疫特征。c-LELC间质中总的TIL数量显著较n-LELC多,在亚群分布方面,B淋巴细胞是c-LELC的优势TIL,T淋巴细胞是n-LELC的优势TIL;LELC中TIL、CD20^(+)B细胞、CD4^(+)T细胞和FOXP3^(+)Treg细胞浸润提示更好的预后。

EB病毒相关性胃癌的病理学特征及手术治疗对其临床预后的影响

目的探讨EB病毒(EBV)相关性胃癌的病理学特征及手术治疗对临床预后的影响。方法收集浙江省肿瘤医院2015年1月1日至2017年12月31日期间明确诊断EBV相关性胃癌的21例住院患者病理样本,研究其病理形态学特征,并分析手术治疗及术后辅助治疗与其临床预后的相关性。应用GraphPad Prism 8统计软件分析,采取Log-rank检验及单因素Cox风险模型分析,应用SPSS 19.0统计软件对各种因素进行之间的相关性进行Spearman相关分析。结果形态学上21例患者中12例患者肿瘤间质内大量的淋巴细胞浸润,9例患者缺乏丰富的淋巴细胞浸润。6例死亡,总生存率为71.43%。生存分析发现间质富于淋巴细胞的EBV相关性胃癌患者预后显著优于间质无显著淋巴细胞浸润者,差异有统计学意义(P<0.01);5例患者存在神经累犯,有神经侵犯者较无神经侵犯者预后明显差,差异有统计学意义(P<0.05);20例患者接受胃癌根治术,1例接受内窥镜下肿瘤切除,9例接受术后化疗,4例患者接受术后局部调强放疗;生存分析提示术后辅助放疗、化疗对临床预后无明显改善。结论间质富于淋巴细胞是EBV相关性胃癌的良好预后因素,肿瘤侵犯神经提示不良预后。根治性手术切除是EBV相关胃癌的主要治疗手段,术后辅助放化疗未明显改善其临床预后。

肿瘤经典信号通路驱动基因变异与免疫检查点抑制剂疗效预测研究进展

免疫检查点抑制剂(ICI)在肿瘤治疗中日趋重要,ICI疗效预测分子标志物备受关注。程序性死亡受体1及其配体1(PD-L1)表达、微卫星不稳定(MSI)和肿瘤突变负荷(TMB)作为目前最常见的ICI疗效预测标志物广泛应用于临床实践。此外,越来越多的研究发现维系肿瘤恶性生物学表型的经典信号通路驱动基因变异与ICI疗效密切相关。本文围绕RTK/RAS/MAPK、PI3K/AKT/mTOR、Nrf2、p53、细胞周期、β-catenin/Wnt、Hippo、Notch等典型癌症信号通路,循序介绍经典肿瘤信号通路中驱动基因变异在介导ICI疗效中的作用和可能的机制。

淋巴上皮瘤样癌肿瘤免疫相关的形态学特点与外周血淋巴细胞分型的关系

目的探讨淋巴上皮瘤样癌(LELC)肿瘤免疫相关的形态学特点与外周血淋巴细胞分型的关系及其临床意义。方法收集2006—2018年就诊于中国科学院大学附属肿瘤医院的117例LELC患者病理及临床资料。按形态学分型方法对组织学进行分组。分析LELC中淋巴滤泡形成及间质纤维组织增生等肿瘤免疫相关的形态学特点,结合患者外周血淋巴细胞分型以及预后信息,分析诸因素之间相互关系及对预后的影响。结果117例患者,男性56例,女性61例,男女比例0.9∶1.0,发病年龄24~89岁,中位年龄52岁。原发部位:位于头颈部68例、肺部26例、胃部15例、其他少见部位8例。形态学Ⅰ型54例,Ⅱ型62例,1例无法分组。LELC肿瘤免疫相关形态学表现呈现连续的谱系性变化,间质肿瘤浸润淋巴细胞从局灶可见到弥漫分布,间质纤维组织从不可见到硬化明显;42例患者间质内见明显的淋巴滤泡形成,31例间质有明显的纤维化。73例进行了外周血淋巴细胞分型流式细胞学检测,包括CD3^(+)总T细胞、CD3^(+)CD4^(+)辅助T细胞、CD3^(+)CD8^(+)细胞毒性T细胞、CD3-CD56^(+)NK细胞、CD3-CD19^(+)B细胞、CD4^(+)CD45RA-T辅助诱导亚群、CD4^(+)CD45RA^(+)T抑制诱导亚群、CD4^(+)CD45RO^(+)记忆T细胞亚群、CD45RA^(+)CD45RO^(+)活化T细胞亚群、CD8^(+)CD38^(+)活化细胞毒性T细胞,另有CD25^(+)淋巴细胞及CD44^(+)淋巴细胞的检测结果。各亚型淋巴细胞在大部分患者中比例正常,但有61例(83.6%)患者CD44^(+)淋巴细胞比例上升,有53例(72.6%)T细胞抑制诱导亚群比例下降。相关性分析发现,临床分期和NK细胞之间呈显著相关性(P=0.023);肿瘤组织学分型和细胞毒性T细胞呈显著正相关(P=0.012);而肿瘤细胞形态分化与总T细胞(P=0.003)及NK细胞(P=0.026)显著相关;间质淋巴滤泡形成与记忆T细胞亚群呈正相关(P=0.025);肿瘤间质纤维化与T抑制诱导亚群显著正相关(P=0.004),与总T细胞(P=0.023)及与CD44黏附分子表达显著负相关(P=0.003)。生存分析发现,淋巴滤泡形成是LELC良性预后因素(P=0.001)。结论LELC肿瘤免疫相关形态学表现呈现连续的谱系性变化;肿瘤的临床病理特征及肿瘤免疫相关特征与外周血T淋巴亚型关系密切,间质淋巴滤泡形成是LELC的良性预后因素。

GPX4对肾透明细胞癌增殖转移能力的影响及其与IGF-1R、COX-2表达的关系

目的 探究人谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)对肾透明细胞癌增殖转移能力的影响及其与IGF-1R、COX-2表达的关系.方法 体外培养人正常肾小管细胞系HK-2及人肾透明细胞癌细胞Caki-1、A498、Caki-2、786-o,即时荧光定量PCR技术(RT-PCR)及蛋白免疫印迹实验(Western blot)检测不同细胞系中GPX4 mRNA及蛋白表达,通过慢病毒转染法构建过表达GPX4细胞系,包括:空白载体组及GPX4过表达组,及干扰GPX4肾透明细胞癌细胞系,包括:对照序列组、GPX4干扰1组及GPX4干扰2组,RT-PCR检测各组细胞GPX4、IGF-1R及COX-2 mRNA表达水平,Western blot检测各组细胞GPX4、IGF-1R及COX-2蛋白表达水平,CCK-8实验检测各组细胞0、24、48、72及96 h相对增殖能力,Transwell侵袭及迁移实验检测各组细胞侵袭及迁移能力.结果 相比人正常肾小管细胞系, GPX4在肾透明细胞癌细胞系中高表达;GPX4过表达组细胞相比空白载体组细胞GPX4、IGF-1R及COX-2 mRNA及蛋白表达显著增高,GPX4干扰1组及GPX4干扰2组细胞相比对照序列组细胞GPX4、IGF-1R及COX-2 mRNA及蛋白表达显著降低;GPX4过表达组细胞相比空白载体组细胞72及96 h增殖能力显著增高,GPX4干扰1组及GPX4干扰2组细胞相比对照序列组细胞72及96 h增殖能力显著降低;GPX4过表达组细胞侵袭及迁移细胞数显著高于空白载体组细胞,GPX4干扰1组、GPX4干扰2组细胞侵袭及迁移细胞数显著低于对照序列组细胞.结论 GPX4在肾透明细胞癌细胞中高表达,与IGF-1R及COX-2的表达正相关,并可促进细胞体外增殖及转移能力.

卵巢原发性鳞状细胞癌15例临床病理学特征及预后分析

目的探讨卵巢原发性鳞状细胞癌(POSCC)的临床病理学特征及预后。方法收集2009年1月至2018年12月中国科学院大学附属肿瘤医院诊治的15例卵巢原发性鳞状细胞癌,通过免疫组织化学法检测p16、hMLH1、hMSH2、hMSH6、PMS2在POSCC中的表达,RNAscope原位杂交技术检测POSCC中18种高危型人乳头状瘤病毒(HPV)。结果15例病例中可见不同分化程度的鳞状细胞癌,包括高分化3例,中-低分化12例。肿瘤周围4例可见原位鳞状细胞癌,4例可见畸胎瘤成分,1例可见子宫内膜样癌/不典型增生成分,1例可见子宫内膜异位腺体。5例(5/15)p16表达阳性且原位杂交证实有高危型HPV感染,其余10例p16阴性病例原位杂交均未检测到高危型HPV感染。所有病例均无错配修复蛋白缺失。与无感染HPV患者相比,伴有高危型HPV感染患者的总生存时间(P=0.038)及无进展生存时间(P=0.045)较长。结论POSCC多见于绝经后女性,常为单侧发生,血清学指标CA125及鳞状细胞癌抗原(SCC)上升最常见。形态学上肿瘤呈现不同的分化程度,但目前的数据表明分化程度并不能作为患者的独立预后指标。高危型HPV感染可能与POSCC的发生相关,而且伴有高危型HPV感染的POSCC患者预后优于无感染的患者。