添加罗格列酮对小鼠卵母细胞氧化还原稳态的影响

【目的】探究在体外成熟培养基中添加罗格列酮(rosiglitazone,RSG)对小鼠卵母细胞体外成熟及胚胎发育的影响,为体外成熟培养系统的优化提供参考。【方法】通过在体外成熟培养基中添加0、10、20、50、100μmol/L RSG,统计第一极体(PBⅠ)排出率,确定RSG最适浓度。根据RSG最适浓度筛选结果分为对照组和罗格列酮组,通过免疫荧光染色法检测卵母细胞内活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)、组织蛋白酶B(CB)、线粒体膜电位水平(MMP)及囊胚内总细胞数(Hoechst 33342)和细胞凋亡比率(TUNNEL);使用实时荧光定量PCR检测囊胚内抗氧化相关基因(Sod-2、Gpx-3和Cat)和凋亡相关基因(Caspase-3、Bcl-2和Bcl-xl)转录水平。【结果】与对照组相比,添加20μmol/L RSG可显著提高小鼠卵母细胞第一极体排出率、卵裂率及囊胚率(P<0.05);卵母细胞内ROS和CB水平均显著降低,GSH和线粒体膜电位水平均显著提高(P<0.05);囊胚内总细胞数显著提高,细胞凋亡比率显著降低(P<0.05);抗氧化相关基因(Sod-2、Gpx-3和Cat)和抗凋亡相关基因(Bcl-2和Bcl-xl)转录水平显著提高,促凋亡基因Caspase-3转录水平显著降低(P<0.05)。【结论】在体外成熟培养基中添加RSG对卵母细胞内氧化还原稳态有积极作用,可改善线粒体功能,提高卵母细胞体外受精后发育能力,并降低卵母细胞内CB水平及囊胚内细胞凋亡的发生。

线粒体中活性氧的产生途径和测定方法

活性氧(ROS)是自然界普遍存在的含氧化合物的总称,对生物体的生理和细胞稳态的调节具有重要意义.但活性氧的测定方法仍然是生物研究领域的一个难点,本文综述了线粒体中活性氧的产生途径和测定方法.

活性氧对兔早期胚胎体外发育的影响

研究旨在探讨活性氧-过氧化氢(H2O2)对兔2-细胞期胚胎体外发育的影响。在添加不同浓度过氧化氢的含胎牛血清的TCM-199培养液中,培养兔2-细胞期胚胎的对照组、≤88μmol/L、94μmol/L、103μmol/L≥118μmol/L组的囊胚发育率分别为86%、75%、34%、26%和5%;不同发育时间添加H2O2时对兔2-细胞期胚胎体外发育的影响为第1天处理组(37.14%)、第2天处理组(54.29%)与对照组(91.42%)差异显著。不同发育时间停止H2O2处理对兔2-细胞期胚胎体外发育的影响为第1天不处理组(82.26%)与对照组(97.14%)无显著性差异,但与第2天不处理组(52.50%)和第3天不处理组(30.00%)有差异。可以抑制兔2-细胞期胚胎体外发育的最低过氧化氢浓度为94μmol/L。兔2-细胞胚胎体外发育过程中,16-细胞之前的胚胎对环境中的过氧化氢都敏感,尤其是8-细胞之前的胚胎对环境中的过氧化氢更为敏感。

体外受精温度、时间及卵子质量对延边黄牛受精卵体外发育的影响

本研究探讨了体外受精温度、时间及卵子质量对延边黄牛卵母细胞体外受精后体外发育的影响。试验结果表明 ,体外受精温度为 39℃、体外受精时间 12 h时 ,卵裂率、囊胚发育率及囊胚孵化率最佳 ;卵子的质量对受精卵体外发育的影响很大。

卵巢保存温度、激素及体外培养时间对延边黄牛卵母细胞体外成熟的影响

本研究探讨卵巢保存温度、激素及体外培养时间对延边黄牛卵母细胞体外成熟的影响。研究结果表明 ,将卵巢分别保存在 2 5～ 2 9℃、30～ 35℃、36～ 4 0℃的生理盐水中运输时 ,卵母细胞体外成熟率分别为 5 5 .3%、70 .1%、6 0 .7% ,各组间无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ;当将卵母细胞分别培养在无激素的对照组 (TCM199+10 % FBS)、添加雌二醇 (estradiol) - 17β组、L H +雌二醇 - 17β组时 ,卵子的成熟率分别为 5 7.8%、6 4 .3%、70 .1% ,对照组与 L H+雌二醇 - 17β组差异显著 (P<0 .0 5 ) ;卵母细胞各自培养 2 2～ 2 5 h、2 6～ 30 h、31～ 34h时 ,卵子体外成熟率分别为 5 6 .3%、6 5 .4 %、6 8.4 % ,3组间无显著差异 (P>0 .0 5 )

活性氧(ROS)对小鼠早期胚胎胚细胞分裂的影响

在体外CZB培养的不同时期添加过氧化氢（2．1μmol／L），发育至囊胚阶段，制作胚胎标本，观察其囊胚发育率、胚细胞数和分裂相数。结果显示：0～12h组和0～72h组的胚胎发育率显著低于其他几组（P〈0．05）．对照组、12～24h组、24～36h组、36～48h组之间均差异不显著（P〉0．05）；各组之间的胚细胞数和分裂指数均无显著差异。说明胚胎在体外培养时，2-细胞期胚胎对外源性乩0，最敏感，也最容易发生发育阻滞。但是经H2O2处理之后，度过2-细胞期发育阻滞的胚胎能在以后的发育中发生补偿性生长，其胚细胞数和分裂指数都和体外正常发育的胚胎没有差异。

体外培养条件对延边黄牛受精卵体外发育的影响

从延边黄牛卵巢中采集未成熟的卵母细胞进行体外成熟培养、体外受精及受精卵体外培养。结果表明 :1将卵子用 2种不同的培养液进行体外成熟培养和受精卵体外培养 ,TCM199组的卵裂率 (5 6 .3% )极显著高于 D- PBS组(33.6 % ) (P<0 .0 1) ;TCM199组的囊胚发育率和孵化率 (15 .1%、13.7% )虽高于 D- PBS组 (10 .5 %、8.7% ) ,但 2个组之间无显著差异 (P>0 .0 5 )。2以 TCM199作为基础培养液 ,分别用含激素培养液和不含激素培养液进行成熟培养和受精卵体外培养 ,添加激素组的卵裂率、囊胚发育率及囊胚孵化率 (81.2 %、17.5 %、15 .3% )高于没有添加激素的对照组 (75 .8%、12 .1%、10 .5 % ) ,但 2个组之间无显著差异 (P>0 .0 5 )。 3体外受精卵与单层颗粒细胞共培养组的卵裂率、囊胚发育率及囊胚孵化率 (78.0 %、11.5 %、9.9% )显著高于非共培养组 (6 8.1%、5 .4 %、3.6 % ) (P<0 .0 5 )。

共培养对延边黄牛重组胚体外发育的影响

以新鲜的颗粒细胞作为供核细胞,以延边黄牛MⅡ期去核的卵母细胞作为受体进行体外培养.使用CR1aa培养液培养时卵裂率(83.7%)显著高于TCM-199液和mSOF液组(76.9%和77.4%),但在重组胚的早期发育各阶段都不存在统计学差异(p>0.05).以CR1aa和TCM-199为基础液时,输卵管上皮细胞和颗粒细胞共培养在卵裂率及重组胚的各阶段发育率都有显著提高(p<0.05).结果表明:CR1aa培养液适用于延边黄牛重组胚的体外培养,以CR1aa液+输卵管上皮细胞和TCM-199液+颗粒细胞共培养的形式效果更好(p<0.05).

兔胚胎玻璃化冷冻的研究

探讨用玻璃化冷冻法保存兔胚胎的效果.结果表明,兔早期囊胚在0.5 M海藻糖(93.8%)溶液中的存活率显著高于0.5 M蔗糖组(70.0%,P<0.05).对照组与不同浓度甘油处理间兔胚胎存活率均差异不显著(P>0.05).分别用不同浓度乙二醇玻璃化冷冻兔胚胎,解冻回收后正常胚胎数和囊胚孵化率,对照组与10%,20%EG组之间均差异不显著(P>0.05),但对照组,10%,20%EG组均显著高于30%EG组(P<0.05).解冻回收后正常胚胎数体内胚胎组(79.4%)显著高于体外胚胎(54.1%,P<0.05),囊胚孵化率2组之间差异不显著(P>0.05).缓慢冷冻法与玻璃化冷冻法之间胚胎解冻回收后正常胚胎数和囊胚孵化率均差异不显著(P>0.05).

高3块气顶稠油油藏天然气采收率研究

气顶稠油油藏中稠油和天然气的流动性能相差悬殊，在采油过程中不可避免地会发生油井气窜。由于气窜气量难以准确劈分，目前国内该类油藏气采收率大多以类比法确定，其结果误差相对较大。该文通过对高３块油井气窜气量的准确劈分，把气顶稠油油藏中天然气分解为气顶和稠油溶解气两部分研究。并通过总结在开发过程中气顶总压降与累积产气量关系，得出了高３块稠油气顶气藏的开采特征类似弹性定容气驱气藏的结论，进而应用压降法、物质平衡法、产量统计规律法分别对高３块气顶气和稠油溶解气采收率进行了计算。经多种方法验证，结果较为准确。为今后制定开发技术政策提供了依据。

冷冻保护剂对延边黄牛体外受精卵的影响

对延边黄牛体外受精卵进行了毒性实验,结果表明,延边黄牛体外受精桑椹胚在0.5M海藻糖(7.6%)和0.5M蔗糖(3.2%)溶液中的存活率差异不显著,早期囊胚在0.5M海藻糖(58.3%)溶液中的存活率显著高于0.5M蔗糖(34.5%)组,在同一处理内早期囊胚的存活率显著高于桑椹胚(P<0.05).以0.5M海藻糖为基础液,分别用0.0(对照组),2.0,2.5,3.0,3.5M甘油处理延边黄牛体外受精早期囊胚,其存活率对照组与不同浓度甘油组之间差异均不显著.

教学研究型大学动物科学系教学实践基地建设探索

教学实践基地是帮助学生更好地掌握、运用所学知识的一个重要教学场所。该文从实践基地的基本情况、利用情况以及所存在的一些问题及需要改革的地方等进行了探讨。

动物科学专业复合型人才培养模式探讨

动物科学专业复合型人才培养是一个系统工程,本文探讨了动物科学专业复合型人才培养模式应在培养目标,课程设置,实践教学模式,人才评价体系,师资队伍方面进行改革,以培养出一专多能的动物科学专业复合型人才。

延边黄牛卵母细胞激活及孤雌发育

探讨了提高延边黄牛卵母细胞激活率及孤雌发育率的适宜方法。从屠宰场回收的卵巢中采集未成熟的卵母细胞 ,置于体外成熟培养液中 ,体外成熟培养 2 0～ 2 2 h。将体外成熟的卵母细胞 ,分别用不同浓度的乙醇或 Ca- ionophore进行单一激活处理。试验结果表明 ,用 5 %、7%、9%、1 1 %及 1 3 %乙醇激活卵子 ,激活率分别为 4 1 .2 %、4 7.2 %、5 3 .1 %、3 9.7%及 2 3 .4 %,7%和 9%乙醇处理组的卵子激活率显著高于其他组 (P<0 .0 5 ) ,但二者之间差异不显著 (P>0 .0 5 )。用 2 .5、5 .0、7.5μm ol/L Ca- ionophore激活卵子 ,激活率分别为 2 9.3 %、5 1 .8%、4 5 .4 %,5 .0、7.5μmol/L Ca- ionophore处理组的卵子激活率显著高于 2 .5 μmol/L 组 (P<0 .0 5 )。用 9%乙醇或 5 .0 μm ol/L Ca- ionophore分别与 1 0 m g/Lcyclohexim ide(CH)组合激活卵子 ,卵子的激活率分别为 77.3 %和 76 .8%,比单独用 9%乙醇 (48.8%)或 5 .0μmol/LCa- ionophore(43 .2 %)的激活率显著提高 (P<0 .0 5 ) ,二者卵子的卵裂率和发育到

活性氧(ROS)对小鼠早期胚胎染色体相对长度的影响

通过对小鼠体内发育的囊胚、扩张囊胚和从1-细胞期取出在CZB培养液中培养的囊胚、扩张囊胚的染色体相对长度进行统计分析,在各号染色体相对长度出现显著性差异的同时,发现体外培养的比体内发育的染色体相对长度短;体外CZB培养的不同时期添加外源性过氧化氢,发育至囊胚、扩张囊胚阶段,制作胚胎标本,观察胚胎的染色体相对长度。结果表明:不同时期添加外源性过氧化氢组比对照组的染色体相对长度短。说明经过氧化氢处理之后存活下来的胚胎染色体相对长度发生了变化。

活性氧(ROS)对小鼠胚胎分裂指数的影响

小鼠体内发育的桑椹胚、早期囊胚、囊胚、扩张囊胚和从1-细胞期取出在CZB培养液中培养的桑椹胚、早期囊胚、囊胚、扩张囊胚的分裂指数分别为5．85，4．64，2．16，4．96和6．25，508，2．77，3．03．经统计分析，体内与体外CZB培养的胚胎分裂指数无显著差异，说明体内发育的胚胎和体外CZB培养胚胎的有丝分裂增殖能力没有差异．体外CZB培养的不同时期添加H2O2的胚胎，发育至桑椹胚、早期囊胚、扩张囊胚阶段，制作胚胎标本，胚胎的分裂指数显示：扩张囊胚的0～72h组的分裂指数与0～12h，24～36h组有显著差异（P〈0．05），而与其它各发育阶段的各组分裂指数均无差异，说明经H2O2处理之后存活下来的胚胎与正常体外发育胚胎的有丝分裂增殖能力没有差异．

农学类研究生用英文原著学习细胞生物学的几点体会

总结农学类研究生用英文原著学习细胞生物学的体会。探讨能够切实加强研究生创新意识和创新能力的培养,应用英文原著教学模式学习基础专业知识带动研究生教育改革,推进研究生教育进程。

Psammaplin A对牛老化卵母细胞体外发育的影响

为探讨组蛋白去乙酰化抑制剂Psammaplin A(PsA)对牛老化卵母细胞体外发育的影响,本试验将卵母细胞随机分为对照组、老化组和50mmol/L PsA处理的老化组(PsA组)。应用免疫荧光染色和JC-1检测牛卵母细胞孤雌激活后的囊胚率、囊胚中的细胞数、细胞凋亡、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)和胚胎线粒体膜电位强度。结果显示,老化组囊胚率显著低于PsA组及对照组(P<0.05),PsA组囊胚率与对照组间无显著差异(P>0.05)。对照组及PsA组囊胚内细胞数显著高于老化组(P<0.05),PsA组囊胚内细胞数与对照组间无显著差异(P>0.05);老化组细胞凋亡率显著高于对照组及PsA组(P<0.05),PsA组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05)。老化组MⅡ期卵母细胞的GSH水平显著低于对照组与PsA组(P<0.05),对照组与PsA组的GSH水平无显著差异(P>0.05)。老化组1细胞期胚胎ROS水平显著高于对照组和PsA组(P<0.05),PsA组ROS水平显著高于对照组(P<0.05)。老化组4-8细胞早期胚胎的线粒体膜电位强度显著低于对照组和PsA组(P<0.05),对照组线粒体膜电位强度显著高于PsA组(P<0.05)。综上所述,PsA可有效延缓牛卵母细胞的老化并提高卵母细胞和胚胎质量。

哺乳动物卵巢细胞凋亡的研究进展

近几年,细胞凋亡成为细胞生物学研究的热点,卵巢细胞凋亡的研究也取得了很大的进展。在哺乳动物中,凋亡不单单直接和卵原细胞、原始生殖细胞以及分化的卵母细胞有关系,还与卵泡的闭锁和黄体退化有关。本文对卵巢中的卵泡闭锁和黄体退化中细胞凋亡的特征进行了一些阐述,并简要介绍了几种细胞凋亡的信号通路及分子机制。