叶酸通过改善内皮型一氧化氮合酶解偶联抑制腹主动脉瘤发展研究

目的探讨叶酸(FA)治疗对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)联合延胡索酸-3-氨基丙腈(BAPN)诱导腹主动脉瘤(AAA)小鼠的预防作用及其可能机制。方法于2022年7—10月在武汉大学人民医院中心实验室进行实验。将30只C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为正常对照组、腹主动脉瘤组(AAA组)和FA干预组(AAA+FA组),每组10只。AAA组:小鼠皮下植入微量渗透泵持续泵入AngⅡ(1μg·kg^(-1)·min^(-1))28 d,同时饲喂含0.25%BAPN饲料28 d。AAA+FA组:同AAA组方法造模,并以FA(15 mg·kg^(-1)·d^(-1))灌胃28 d。正常对照组:实验全程用普通饲料喂养小鼠,自由进水。动脉瘤破裂死亡小鼠立即取材,第29天仍存活小鼠处死取材。取材后,测量小鼠腹主动脉直径,冰冻切片进行活性氧(ROS)染色,石蜡切片进行弹性纤维染色,Western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、二氢叶酸还原酶(DHFR)表达。结果AAA组发生腹主动脉瘤8只(其中1只于21 d死亡),AAA+FA组发生4只,AAA+FA组小鼠腹主动脉瘤发生率显著低于AAA组(40.0%vs.80.0%,χ^(2)/P=1.667/0.170),AAA+FA组腹主动脉直径明显小于AAA组[(1.44±0.19)mm vs.(2.08±0.50)mm,t/P=3.598/0.005]。AAA+FA组腹主动脉弹性纤维结构较AAA组完整,且无明显断裂纤维。AAA+FA组ROS含量及MMP-2、MMP-9表达明显低于AAA组(t/P=4.206/0.048、5.267/0.006),eNOS、DHFR表达高于AAA组(t/P=4.511/0.011、2.914/0.044)。结论FA可改善AngⅡ联合BAPN诱导的腹主动脉瘤,可能是通过上调DHFR的表达从而恢复eNOS偶联状态,减少ROS,并减轻以内侧弹性纤维分解、MMP-2、MMP-9升高为特征的血管重塑。