乳腺癌中线粒体DNA拷贝量变化的意义

目的通过分析mtDNA拷贝量在乳腺癌组织和癌旁正常组织中的变化，探讨其在乳腺癌发生和发展中的作用。方法采用PCR反应分别扩增20例乳腺浸润性导管癌组织和相对应的20例癌旁正常组织的mtDNAD．100p两个高突变区HV1和HV2，并以核基因组G．actin作为定量标准物，经过聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）并利用Gel-ProExpress图像分析系统进行核酸定量分析，比较mtDNA拷贝量在癌组织和癌旁组织间的差异。结果在乳腺癌组织中HV1和HV2的条带的吸光度均较癌旁正常组织弱，其中HVl在两者比较中有统计学差异（P〈0．05）；HV2在两者比较中有明显统计学差异（P〈0．01）；统计学分析发现，HV1和HV2呈明显正相关（P〈0．01），且mtDNA的拷贝量与年龄、肿瘤大小均无统计学意义，而与淋巴结转移和肿瘤分期有统计学意义（均为P〈0．05）。结论乳腺浸润性导管癌组织mtDNA拷贝量减少，与乳腺癌的发生和发展有密切关系，并可能成为一种新的乳腺癌标志物。

线粒体DNA Cyt-b和血管内皮生长因子mRNA在乳腺癌中的表达及意义

目的探讨线粒体DNA(mtDNA)Cyt-b和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达在乳腺癌发生、发展过程中的意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),分别对19位乳腺癌患者的19例乳腺癌组织标本和19例癌旁组织标本的mtDNA Cyt-b、VEGF mRNA的表达进行检测(β-actin作为定量标准物),观察它们在乳腺癌组织和癌旁正常组织中的表达差异以及与临床病理参数的关系。结果19位乳腺癌患者中,乳腺癌组织mtDNACyt-b和VEGF mRNA的表达均高于癌旁组织,两组比较均有明显差异(P<0.01),而乳腺癌组织中VEGF的两个异构体VEGF145和VEGF189的mRNA表达高于癌旁组织,两组比较均有差异(P<0.05),并且mtDNA Cyt-b与VEGFmRNA的表达呈正相关性(P<0.01),与VEGF145、VEGF189的mRNA表达均呈正相关性(P<0.05);淋巴结转移组mtDNA Cyt-b和VEGF mRNA的表达较无淋巴结转移组高,两组比较均有差异(P<0.05);TNM分期Ⅰ期mtDNA Cyt-b和VEGF mRNA的表达较Ⅱ期低,两组比较均有差异(P<0.05);Ⅰ期与Ⅲ期比较两组mtDNA Cyt-b mRNA的表达有明显差异(P<0.01),而VEGF mRNA的表达有差异(P<0.05)。结论乳腺癌中mtDNA Cyt-b和VEGF mRNA的表达上调,并且在肿瘤的能量传递过程起着一定作用。

mtDNA Cyt-b、ATPase6在浸润性乳腺癌中的突变及意义

目的检测线粒体DNA(mtDNA)Cyt-b、ATPase6在浸润性乳腺癌组织和癌旁组织的突变情况,寻找特异性位点。方法采用PCR结合基因测序方法,对延边朝鲜族地区浸润性乳腺癌患者(30例)的癌组织及癌旁组织进行mtDNA Cyt-b、ATPase6基因测序,对照人线粒体DNA剑桥修定序列,分析其突变情况。结果在研究对象的乳腺癌mtDNA中共发现Cyt-b基因区有6个高突变发生率位点,即A15326G、C14766T、G15301A、G15043A、T14783C、C15402T,其中A15326G、C14766T突变率最高;而ATPase6基因区共发现3个高突变发生率位点,即C8673T、A8729G、T8955C,其中C8673T、A8729G突变率最高。结论 mtDNA Cyt-b、mtDNA ATPase6高突变发生位点可为浸润性乳腺癌的诊断及乳腺癌细胞线粒体功能评价提供有价值的参考。

慢病毒肌肉注射介导人FⅧ基因在大鼠体内的表达

近来的研究表明，以HIV-1为基础构建的慢病毒（Lentivirus）载体因具有可感染非分裂细胞、转移基因片段容量较大、转染所需的病毒滴度可达10^7-10^8IU／ml、目的基因表达时间长、不易诱发宿主免疫反应等优点而受到人们关注。我们利用慢病毒制备含人凝血因子Ⅷ（hFW）基因的重组慢病毒，注射到正常大鼠大腿骨骼肌，测定大鼠血清中hFⅧ抗原和hFⅧ抗体水平，用PCR检测确认目的基因的存在，在正常大鼠体内构建慢病毒载体系统，探讨在动物模型中慢病毒介导肌肉注射基因治疗的可行性。