抑制HBV复制的小干扰RNA的重组腺病毒构建与鉴定

目的构建可同时表达绿荧光蛋白（GFP）和针对HBVS区基因的小干扰RNA（siRNA）的重组腺病毒，并研究该siRNA在体外对HBV的抑制作用。方法采用PCR技术自质粒pEGFP-C1中扩增含CMV启动子的GFP表达框，自质粒pAVU6＋4sh579中扩增含U6启动子的针对HBV S 区579-597位基因的siRNA表达框，分别将两个表达框克隆至穿梭载体质粒pShuttle内，与质粒pADEasy-1在大肠杆菌BJ5183内进行同源重组，将阳性重组体DNA转染至人胚肾细胞株HEK293细胞中进行包装、扩增，并在HepG2.2.15细胞中初步观察其对HBV复制的抑制疗效。结果构建了可同时表达GFP和siRNA的重组腺病毒，其可在HEK293细胞中进行包装、扩增，并在HepG2.2.15细胞中对HBV-DNA、HBsAg和HBeAg的表达具有抑制作用。结论成功构建了可同时表达GFP和针对HBV的siRNA的重组腺病毒，并在体外实验中证实了其对HBV复制具有抑制作用。

tRNA^(val)-shRNA表达框在筛选HBV C基因小干扰RNA靶位中的应用

目的:以tRNAval-shRNA表达框技术筛选高效的HBV C基因siRNA靶位。方法:针对HBV C基因序列设定5个siRNA靶位,以一步重叠延伸PCR技术生成含tRNAval启动子的shRNA表达框(SEC),分别与HBV C基因与EGFP融合表达质粒(pC-EGFP)共转染AD 293细胞,转染后48 h,流式细胞术检测融合基因荧光表达情况,半定量RT-PCR法检测HBV-C基因mRNA表达水平。以筛选的shRNA表达框转染hepG 2.2.15细胞,72 h后放免法检测细胞培养上清HbsA g、HbeA g水平,RT-PCR检测细胞HBV pgRNA水平。结果:共转染shRNA表达框能有效抑制融合表达质粒(pC-GFP)荧光强度和HBV C mRNA表达,其中SEC-492 i抑制效率最佳,而SEC-282 i相对较差。选定的492 i表达框(SEC-492 i)及282 ishRNA表达框(SEC-282 i),均呈剂量依赖性抑制hepG 2.2.15细胞HbeA g分泌和HBV pgRNA水平,其中SEC-492 i抑制HbeA g和HBV pgRNA水平明显优于SEC-282 i。结论:在选定的5个siRNA靶位中,以492 i靶位RNA i效率最高。tRNAval-shRNA表达框技术可用于抗HBV高效siRNA靶位的筛选,有进一步推广应用价值。

小干扰RNA体外抑制HBs-GFP融合基因的表达

目的利用增强型绿荧光蛋白(EGFP)和小发夹RNA(shRNA)表达载体技术,建立一种行之有效且相对经济的验证siRNA的方法。方法将HBVS基因融合到EGFP中,建立HBs-GFP融合基因表达载体;同时构建带U6+27RNA转录启动子的shRNA表达载体pAVU6+4sh357。二载体共转染HepG2细胞后,流式细胞仪检测HBs-GFP蛋白的荧光强度;同时RT-PCR和实时定量PCR法检测HBs-GFPmRNA水平的改变。结果小干扰RNA有效抑制目的基因的表达,共转染后第72h荧光蛋白抑制率为55.4%;HBs-GFP融合基因的RNA表达受到显著抑制,抑制率达到90%。结论载体法表达的小干扰RNA体外显著抑制HBs-GFP融合基因的表达。

芬太尼复合布比卡因用于颈丛阻滞的疗效观察

目的：探讨阿片类药物芬太尼的外周镇痛作用；方法：选择ＡＳＡ Ⅰ－Ⅱ级的择期甲状腺手术病人４４例，随机分为Ａ、Ｂ两组，Ａ组采用０．２％布比卡因，Ｂ组采用 含芬太尼的０．２％布比卡因作双侧颈深、浅丛阻滞，记录阻滞起效时间、完善作用时间、作 用持 续时间以及麻醉效果。数据结果作统计学处理；结果：Ａ、Ｂ两组在阻滞起效时间上无差异， Ｂ组完善作用时间明显缩短，作用持续时间明显延长，麻醉效果明显改善；结论：芬太尼复 合布比卡因能加强周围神经阻滞作用。

109例高血压性脑出血患者急诊手术的麻醉

目的 提高脑出血患者急诊手术的麻醉技术 ,减少与麻醉相关的并发症的发生率。方法 在 10 9例高血压性脑出血患者急诊手术中 ,采用快速静脉诱导气管内插管 ,异氟醚吸入加用异丙酚微泵静注复合全麻 ;甘露醇及控制PETCO2 降低颅内压 ;对血压≥ 180 /10 0mmHg和 /或血糖 >2 5 0mg/dl者作适当处理。 结果 10 9例患者术后 1周内无 1例死亡。并发肺部感染 5 0例 (45 8% )、急性肾功能衰竭 15例 (13 8% )、消化道出血19例 (17 4 % ) ,同时患有其中两个并发症者 5例 (4 6 % ) ,死于并发症者 17例 (15 6 % )。结论 急诊手术可降低高血压性脑出血患者死亡率和多器官功能衰竭的发生率 。

腺病毒载体在抗HBV基因治疗中的应用

HBV持续感染是导致慢性肝炎后肝硬化、肝细胞癌等疾病的重要原因,尚缺乏能彻底治疗的手段。基因治疗是近年迅速发展的一种治疗HBV感染的方法。理想的基因治疗载体是基因治疗的一个重要方面。腺病毒载体由于其特有的一些优点在抗HBV的基因治疗中受到重视。文中就腺病毒载体在抗HBV基因治疗中的应用作了综述。

载体法筛选乙型肝炎病毒S基因小干扰RNA靶位体系的建立

目的 构建4个针对乙型肝炎病毒(HBV)S基因序列的小发夹RNA(shRNA)表达载体,作用于增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和HBV S基因融合表达载体,观察shRNA对融合蛋白的抑制作用,筛选出有效靶位。 方法 利用pAVU6+27质粒,设计并构建4个shRNA表达载体,与融合表达载体共转染AD293细胞,荧光显微镜下观察融合蛋白的荧光表达情况并通过流式细胞仪分析shRNA对融合蛋白的抑制作用。同时,逆转录聚合酶链反应法验证其筛选的有效性。 结果 成功构建shRNA表达载体和HBs-EGFP融合表达载体;4组shRNA表达载体均可不同程度抑制融合基因的表达,其中以579位点最有效,荧光表达抑制率为69.8％,RNA水平抑制率为74.6％。 结论 筛选出有效抑制HBV S基因的siRNA靶位。

一起大学校园内诺如病毒GⅡ型胃肠炎暴发的流行病学调查

为了解杭州市某大学急性胃肠炎暴发疫情波及范围,并确定疾病暴发的病原学病因以及流行病学病因。根据病例定义开展病例搜索,进行个案流行病学调查。采用描述性流行病学和病例对照研究方法分析病例发病的危险因素。样本采用RT-PCR检测诺如病毒(norwalk viruses,NV)核酸。结果显示,2014年11月26日~12月5日西湖区某校共发生诺如病毒胃肠炎病例82例,罹患率为1.11%;病例主要集中在12月1~3日,占总病例数的80.72%;病例以学三楼和学二楼为主,占59.04%;病例临床表现以呕吐(61例,74.39%)和腹泻(44例,53.66%)为主。生活用水使用井水的罹患率(1.64%)是使用市政自来水的罹患率(0.23%)的7.13倍。病例对照研究结果显示同宿舍或同伴中有同学出现呕吐症状是独立危险因素(OR=5.01,95%CI=1.44~17.45,P=0.011)。实验室检测结果发现9份患者肛拭子诺如病毒核酸阳性。根据病例临床表现、流行病学调查以及实验室检测结果判断该起疫情为诺如病毒GⅡ型引起的急性胃肠炎暴发,暴发的主要原因可能为食用受污染的井水,同时,接触传播也是主要的传播途径。

浙江省杭州市肺结核患者耐药监测结果分析

目的了解杭州市耐药结核病疫情现状及特点,为及时调整杭州市结核病控制策略提供依据。方法收集2011年杭州市登记所有涂阳患者痰标本,采用传统生化反应法进行菌型鉴定,采用世界卫生组织推荐的改良罗氏培养基比例法,进行异烟肼(Isoniazid,H)、利福平(Rifampicin,R)、乙胺丁醇(Ethambutol,E)、链霉素(Streptomycin,S)、氧氟沙星(Ofloxacin,O)和卡那霉素(Kanamycin,KM)的药物敏感性试验。利用结核病管理信息系统,收集患者人口学资料。结果全年共报告1845例涂阳患者,开展痰培养并培养阳性1394例,其中菌群鉴定为结核分枝杆菌并有药敏试验结果者1184例。1184例患者中对4种一线抗结核药物(H、E、R、S)的总耐药率为31.33%,总耐多药率为11.57%。广泛耐药率为0.90%,其中耐多药患者中,耐氧氟沙星者占29.93%,耐卡那霉素者占3.65%。一线药物耐药率由高到低依次为H(19.51%)、S(17.15%)、R(16.98%)和E(5.07%),复治患者耐药率明显高于初治患者。结论杭州市耐药结核病疫情相对较重,需进一步研究耐药病例合理的化疗方案,重点加强对初、复治患者的管理,从源头上减少耐多药甚至广泛耐药的发生。

杭州市西湖区1例人感染H7N9禽流感死亡病例的调查分析

2015年3月16日,接杭州市疾病预防控制中心反馈,来自杭州市西湖区就诊的1例重症肺炎病例,经杭州市疾病预防控制中心国家流感监测网络实验室复核,患者咽拭子样本采用实时荧光定量PCR检测H7N9禽流感病毒核酸呈阳性。现报道如下。1临床资料1.1发病就诊情况患者,女,59岁,退休人员。

基于地理信息系统社区结核病规范管理研究

目的:利用结核病地理信息系统为社区卫生服务设计标准化的结核病网络管理程序,实现社区结核病管理规范化。方法:应用地理信息和网络技术,按结核病防治管理规范建立信息系统,实施社区网络联动的结核病重点人群预警、转诊、追踪、督导服药、访视、密切接触者筛查、质量控制和分析评估。结果:信息系统2009-2011年中发出社区结核病预警1 148起,重点人群预警1 114起,发现聚集性事件4起;社区卫生服务中心报告疑似肺结核1 613例,转诊率为99.81%,辖区内患者追踪到位率91.88%;发现涂阳肺结核患者5 559例,筛查密切接触者21 217例,筛查率为98.74%,筛查发现有肺结核可疑症状者236例,患者62例;2008-2010年新发涂阳肺结核患者5 020例,治愈率为91.89%,系统管理率为98.90%。社区信息质量控制结果通过软件生成数据报表和图表。结论:结核病地理信息网络系统应用对社区结核病规范化、智能化和科学化的实时管理提供了有效的支持。

杭州西湖区1158人传染病相关知识和行为调查分析

目的：了解西湖区居民传染病相关知识知晓及行为情况,为西湖区开展传染病健康教育提供科学依据。方法：采用分层随机抽样的方法,对年龄在18~69岁的西湖区常住居民开展抽样调查。采用调查对象自行填写和调查员询问两种方式。调查内容主要为传染病防治相关知识和行为。结果：共获得有效调查问卷1 158份,传染病相关知识知晓率为95.22%。其中不同年龄组人群和不同地域人群的知晓率差别有统计学意义（χ2=15.637,P=0.004,χ2=40.129,P=0.000）。相关行为情况中,定期进行健康体检的占92.06%,不同年龄组之间的差异有统计学意义（χ2=20.701,P=0.000）;其他卫生行为习惯最多的是饭前便后洗手（91.62%）,最低的是发现传染病疫情向疾控中心报告（83.94%）。结论：西湖区居民传染病相关知识知晓率较高,但也存在不足,应进一步加强健康教育,促进居民健康行为的形成。

人感染H7N9禽流感1例报告

目的调查1例人感染H7N9禽流感病例,总结疫情防控工作经验。方法对病例和密切接触者进行个案调查与分析,采用实时荧光定量PCR检测病例咽拭子H7N9禽流感病毒核酸作确诊。结果患者以发热为首发症状,继而出现咳嗽、咳痰和左下肺炎,伴有高血压、糖尿病等基础性疾病,实时荧光定量PCR检测病例咽拭子H7N9禽流感病毒核酸阳性。经达菲等抗病毒治疗,康复出院。患者发病前7 d内曾去过农贸市场。密切接触者50人,均未出现流感样症状,血清H7N9禽流感HI抗体均为阴性。结论该病例以发热肺炎为主要临床特征,感染来源未明,不能排除农贸市场禽类区暴露的可能,未发现人传人情况。

杭州市西湖区3例人感染H7N9禽流感患者流行病学调查

2013年3—4月开始我国安徽、江苏、浙江、上海等省（市）陆续报告了人感染H7N9禽流感病例，这是全球首次发现人类感染这一亚型的禽流感病毒，引起了世界性广泛关注。为总结在人感染H7N9禽流感防控中的经验教训，现将杭州市西湖区3例人感染H7N9禽流感病例流行病学调查情况报告如下。

179株结核分枝杆菌药敏试验结果分析

目的:了解杭州地区肺结核病人的耐药情况。方法:采用比例法对191株痰培养阳性菌株进行4种一线抗结核药的敏感性试验和菌型鉴定。结果:179株结核分枝杆菌共检出耐药菌96株(53.63%),其中耐多药菌67株(37.43%),12株为非结核分枝杆菌。结论:杭州地区肺结核病人的耐药情况比较严重,应采取有效措施进行控制。