东方粘虫中肠V-ATP酶a亚基的克隆及原核表达

对东方粘虫[Mythimna separata(Walker)]中肠V-ATPase a亚基(MS-VATPa)cDNA全长序列进行克隆、原核表达及纯化研究。采用RT-PCR和RACE技术克隆MS-VATPa基因,再亚克隆于原核表达载体pET-22b(+)以构建重组载体pET22b-MS-VATPa,将鉴定正确的重组质粒转入E.coli BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,采用Ni-NTA柱亲和层析法纯化目标蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blot验证。结果表明:成功克隆东方粘虫中肠MS-VATPa基因的cDNA全长序列,并实现MS-VATPa基因在大肠杆菌原核表达系统中的可溶性表达。

生物农药:使有害生物综合治理(IPM)切实服务于农民和种植者

在SCI生物资源团队的帮助下，欧洲有害生物综合治理中心（EUCIPM）、天然源物质研究中心（NRI）和欧洲网络企业（EEN）于2014年4月10日在格林威治大学共同举办了关于生物农药的第2次会议，其中92名代表参加了本次会议。本次会议与去年召开的第一次会议的模式一样，都是在早上进行，并致力于3个主题，紧接着是来自于寻求相互合作机遇的其他组织12名代表的演讲。下午安排了这些组织的见面会，为推进他们之间的合作提供机会。

拟除虫菊酯类农药单链可变区抗体的制备、鉴定及其特异性分析

目的制备拟除虫菊酯类农药可溶性单链可变区(single-chain fragment variable,scFv)抗体,鉴定其免疫活性并对其特异性进行分析。方法构建表达载体pET28a(+)-scFv和pET42a(+)-scFv并转化BL21(DE3),重组菌经诱导后通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定目的蛋白的表达。可溶性融合蛋白scFv/GST经Glutathione Sepharose 4B纯化后用FactorXa切除GST标签获得scFv,然后采用Western blotting法对其进行鉴定。scFv对7种拟除虫菊酯类农药的特异性采用间接竞争酶联免疫法进行分析。结果经0.1mmol/LIPTG诱导后,重组菌BL21(DE3)-p ET28a(+)-scFv和BL21(DE3)-pET42a(+)-scFv表达的目标蛋白分别为包涵体抗体和部分可溶性抗体。经鉴定,可溶性scFv相对分子量约为30k Da,效价为1:25600。同源半抗原Hap1对单链抗体sc Fv的IC50为2.43μg/mL,检出限为0.045μg/mL;scFv抗体对氯菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯均有较高特异性,IC50分别为3.29、4.72和5.55μg/mL。结论本研究成功获得了拟除虫菊酯类农药的可溶性单链可变区抗体,该抗体对3种拟除虫菊酯农药具有很强的特异性,该研究可为拟除虫菊酯类农药多残留免疫分析提供依据。

我国对外贸易与碳排放现状及相关性研究

在介绍我国对外贸易和二氧化碳排放现状的基础上,实证分析我国对外贸易与碳排放的相关关系。结果表明,改革开放三十多年来我国进出口贸易额和碳排放量总体上呈明显上升趋势,特别是在我国加入WTO后,增长明显加快,并且二者呈现出同步变化趋势;进出口贸易额的增加导致碳排放量的增加,两者存在长期稳定的关系。提出我国应加快改变经济发展方式、进一步优化贸易结构和贸易方式、征收碳税等建议,以处理好进出口贸易和环境保护之间的关系,促进我国对外贸易和环境的健康可持续发展。

东方粘虫U6启动子的克隆及功能验证

为了持续获得大量短片段干扰RNA(short interference RNA,siRNA),通过染色体步移技术克隆得到东方粘虫U6snRNA基因5′-端侧翼启动子序列1 426bp。经生物信息学分析,该序列含SPH元件、八聚体序列(OCT)、远端序列元件(DSE)、近端序列元件(PSE)及TATA box等RNA聚合酶Ⅲ(RNA polymeraseⅢ,RNA PolⅢ)U6启动子的特征元件。通过构建RNA干扰(RNA interference,RNAi)载体的方式,对增强型绿色荧光蛋白EGFP基因进行RNAi,证明克隆得到的东方粘虫U6启动子可成功驱动shEGFP表达,具有U6启动子功能。为后续构建以东方粘虫V-ATP酶H亚基为靶基因的沉默载体奠定基础。

基于用户兴趣度的协同过滤算法

随着互联网信息的急剧膨胀,个性化推荐技术应运而生,其中基于协同过滤的推荐技术被广泛使用,但其未解决数据稀疏问题,未提供准确的推荐服务。该文结合用户兴趣度思想,提出了基于用户兴趣度的协同过滤算法。通过实验分析,证明该算法能够提供准确的推荐服务。

高职《国际贸易实务》课程教学改革浅析

文章基于高职教育的特点和课程的性质,结合自身外贸企业实践经历和所在院校情况,反观课堂教学,从教学内容、教学方式和手段、教学实践环节、学生英语掌握程度等方面来分析目前高职国际贸易实务课程的教学现状和存在的问题,并针对目前的教学现状和存在问题,从教学内容应多贴近企业实际、转变以教师为中心的教学理念、加强"双师型"教师队伍、加强实践教学和加强双语教学等六个方面提出教学改进建议,使高职《国际贸易实务》课程教学能真正满足当代外贸行业实际需要,培养出适合行业发展的高质量的外贸从业人员。

浅析微课在小学语文课堂教学中的作用

微课成为一种流行的授课方式,是碎片化学习的顶级方法。将微课应用于小学语文教学课堂中,是非常有益的。微课本身就是创作自由的,并不是千人一面的东西。它不像其他新生事物一样,奖项等级的高低变化决定着价值。微课最大的作用在于受众,也可以说学生的点击率决定着它的价值。微课的制作虽然没有顶级的技术,但它是专门为学生量身打造的。

拟除虫菊酯类农药多残留酶联免疫分析方法的条件优化

[目的]优化拟除虫菊酯类农药多残留检测条件,建立适用于多种菊酯类农药的酶联免疫分析方法。[方法]优化多残留酶联免疫检测方法,建立半抗原对单链抗体的标准抑制曲线。对7种拟除虫菊酯类农药进行交叉反应,计算交叉反应率。[结果]最佳检测条件:包被抗原以质量浓度5 mg/L于37℃包被微孔2 h、单链抗体稀释640倍、稀释液中甲醇体积分数为10%、竞争时间为80 min、HRP/Anti-His酶标二抗稀释质量浓度为1/7000 g/L、显色20 min。该方法对氯菊酯、氯氰菊酯和溴氰菊酯有较强交叉反应,交叉率分别为62.31%、43.43%、36.93%。[结论]成功建立可检测多种拟除虫菊酯类农药的酶联免疫分析方法,为免疫分析试剂盒的研发奠定基础。

真假离婚：都是金钱惹的祸

为了得到20万元的货币分房款，余芹和丈夫晓峰经过周密协商决定“假离婚”，等钱到手后再悄悄复婚。可是变化永远比计划快，当时的约定成为了背弃的理由，恩爱夫妻演变成陌路。余芹在笔者面前痛哭流涕，“要知道闹成今天这惨局，我打死也不会跟他离婚！”