MuSK-mCherry融合荧光蛋白的构建及对重症肌无力患者MuSK抗体的检测

目的:构建肌肉特异性激酶(MuSK)与红色荧光蛋白(mCherry)的重组融合蛋白(MuSK-mCherry),并作为抗原用于重症肌无力(MG)患者血清中的MuSK抗体(MuSKAb)的检测。方法:应用PCR技术,从含有mCherry基因的载体pRSET-B扩增mCherry基因,经T载体(pGEM-T Easy Vector)克隆至含有MuSK细胞外区第22-452位氨基酸肽段基因的载体pMT/BiP/V5-His(MuSK)上,构建MuSK-mCherry融合荧光蛋白基因。将重组载体转染果蝇S2细胞,表达产物以共聚焦显微镜检查。以MuSK-mCherry融合蛋白作为抗原,应用荧光免疫沉淀试验检测MG患者MuSKAb。结果:成功地构建了MuSKmCherry融合蛋白基因,并得到了表达。经对已知MuSKAb阳性的MG患者血清中的MuSKAb的检测证实,构建的MuSKmCherry融合蛋白在荧光免疫沉淀试验中可以检测到MuSKAb。结论:以MuSK细胞外肽段与mCherry构建的融合荧光蛋白作为抗原,可以用于MG患者血清中的MuSKAb的检测。

咪喹莫特诱导的小鼠银屑病模型的建立

[目的]建立银屑病动物模型.[方法]将5%(质量分数)咪喹莫特(IMQ)软膏连续涂抹于小鼠背部皮肤7d,构建银屑病小鼠动物模型.对照组给予同等剂量的凡士林软膏.采用临床症状评分PASI及病理学变化进行评价,确定建立模型成功.[结果]涂抹5%(质量分数)IMQ软膏的小鼠皮肤出现红斑、鳞屑,皮肤明显变厚.HE染色结果可见,颗粒层明显减少或消失,角化不全,表皮皮肤向下延伸呈钉突状;真皮可见毛细血管扩张充血,炎性细胞浸润.[结论]IMQ诱导的银屑病小鼠模型再现了人类银屑病的典型临床症状及病理特征,是研究银屑病可行的动物模型.

重症肌无力特异性免疫吸附剂的制备及对患者血清的动态吸附实验

[目的]制备对重症肌无力致病性抗乙酰胆碱受体抗体具有特异性吸附作用的免疫吸附剂.[方法]采用悬浮再生法合成纤维素，以环氧氯丙烷对其进行活化，将人工合成的人乙酰胆碱受体α亚单位67-76位氨基酸为配基，固定于环氧氯丙烷活化后的球型纤维素上，制备出重症肌无力特异性免疫吸附剂，并与乙酰胆碱受体抗体阳性患者的血清进行动态吸附实验，应用酶联免疫吸附法检测反应前后抗体的吸光度，计算抗体吸附率.[结果]以球型纤维素为载体及多肽为配基制备的免疫吸附剂在血清动态吸附实验中对血清中致病性乙酰胆碱受体抗体的吸附率随吸附时间延长而上升，并在吸附开始后2 h时达到高峰，吸附率为26.59%.[结论]以球型纤维素为载体及多肽为配基制备的免疫吸附剂与致病性乙酰胆碱受体抗体吸附性较好，是治疗重症肌无力较理想的免疫吸附剂.

微课在免疫学教学中的应用及问题分析

免疫学作为医学专业的基础理论课程,其中很多概念、机制比较抽象,传统教学方法的效果不尽如人意,微课作为顺应互联网时代特点的新型教学手段,能够很好地弥补传统教学所欠缺的地方,越来越受到教育工作者的重视和认可。本文分析了在免疫学课程中微课的应用基础及问题,为免疫学课程改革探索提供了方向。

微课在高校教育中的应用及对策分析

随着互联网时代的到来,微课作为符合互联网时代特点的新型教学手段应运而生,本文分析了高校教育中微课的应用基础并对其在高校推广中产生的主要问题进行了阐述,并分析了其对策。

rapsyn基因外显子区多态性与重症肌无力相关性研究

目的:探讨突触受体相关蛋白(rapsyn)基因单核苷酸多态性(SNPs)与重症肌无力(MG)的相关性。方法:从132例MG患者以及153例正常对照组外周血中提取DNA,PCR扩增rapsyn基因的8个外显子,采用直接测序检测基因型。与野生型rapsyn基因比较,分析rapsyn基因突变位点以及与MG临床症状的相关性。结果:rapsyn基因第1、2、4、5、6、7和8外显子与野生基因序列相同,没有发生基因突变。在rapsyn基因第3外显子中发现新SNP:L222R[CTG>CGG(2)]或T665G。SNP L222R等位基因频率和基因型频率在患者组和对照组均符合Hardy-Weinberg遗传平衡(P>0.05),具有群体代表性。G等位基因频率在患者组和对照组之间无统计学差异(P>0.05),3种基因型TT、TG、GG在患者组(42.4%vs 48.5%vs 9.1%)和对照组(49.0%vs 33.3%vs 17.6%)存在显著性差异(P<0.05),并且携带GG基因型对照组显著高于患者组(P<0.05),表现为隐性模型特征。结论:rapsyn基因SNPs与MG存在相关性;L222R(T665G)是新发现的SNP,G等位基因可能是MG的保护因子。

医学微生物学探索性实验教学与学生创新能力的培养

在高等教育面临着素质教育、培养创新人才的新形式下,以提高学生的综合素质,培养学生的创新精神、创新能力为出发点,在2004级医学专业本科生中开设探索性实验。实践证明,探索性实验的开展充分调动了学生的学习热情,极大地激发了学生对微生物学的学习兴趣,提高了微生物学实验教学质量。显然,探索性实验的开展是传统教学模式的有益补充和尝试。

基础医学硕士研究生招生困难现状分析

以延边大学2001—2008年医学专业硕士研究生招生情况为例,探讨目前基础医学硕士研究生招生困难的现状及原因,并提出解决办法。希望对学生树立积极的择业观念提供帮助。

微生物学探索性实验教学的尝试

在高等教育面临着素质教育、培养创新人才的新形式下,以提高学生的综合素质、培养学生的创新精神、创新能力为出发点,在微生物学实验教学中开设探索性实验。实践表明,探索性实验的开展充分调动了学生的学习热情,增强了学生独立动手能力、综合分析能力和创新意识,提高了微生物学实验教学质量。

白细胞介素-12基因治疗肿瘤及抑制肝转移

[目的]探讨经静脉转染表达mIL-12的DNA质粒在肿瘤的治疗及抑制肝转移中的作用.[方法]经皮下和腹腔接种M5076细胞建立荷瘤模型,用水流动力学方法将mIL-12基因转染荷瘤C57BL/6小鼠,观察实验组与对照组的生存率及肿瘤转移灶数目,用ELISA法检测血清中细胞因子水平,用小鼠脾细胞的细胞毒性实验评价CTL和NK细胞活性.[结果]转染pGEG.mIL-12小鼠血清中白细胞介素-12(IL-12)及IFN-γ水平明显升高.经皮下接种肿瘤细胞建立荷瘤模型的转染pGEG.mIL-12小鼠组抑制肿瘤细胞作用、抑制肿瘤细胞肝转移和生存时间与对照组相比较差异均有统计学意义.经腹腔接种肿瘤细胞建立荷瘤模型转染pGEG.mIL-12小鼠组与对照组相比较明显抑制腹腔内肿瘤播散,延长生存时间,差异有统计学意义.M5076细胞对转染pGEG.mIL-12小鼠脾细胞的CTL和NK细胞破瘤细胞活性均不敏感.[结论]用水流动力学方法转染小鼠细胞因子基因产生的高水平IL-12对CTL不敏感的M5076肿瘤有治疗和抑制肝转移的作用.

重症肌无力转基因小鼠模型的建立

[目的]建立人免疫球蛋白转基因小鼠实验性自身免疫性重症肌无力模型．[方法]用电鳐电器官分离纯化的乙酰胆碱受体免疫人免疫球蛋白转基因小鼠，以肌肉收缩力判定病情，以放射免疫测定法测定动物血清中抗乙酰胆碱受体抗体滴度及动物全身肌肉乙酰胆碱受体浓度．[结果]实验动物血清中抗乙酰胆碱受体抗体滴度为6～296nmol，全身肌肉乙酰胆碱受体损失率最高达65％，部分动物出现肌肉收缩无力表现．[结论]成功地建立了人免疫球蛋白转基因小鼠实验性自身免疫性重症肌无力模型．

人体寄生虫学教学改革初探

人体寄生虫学是研究与人类健康有关的寄生虫的生物学特征、生存规律、与宿主及外界环境的关系的科学,它是基础医学与临床医学之间的桥梁课程.寄生虫感染是世界范围内的公共卫生问题,而经过几十年来的预防与治疗工作,寄生虫感染得到了较好的控制.目前国内医学院校普遍存在人体寄生虫学教学时数及教学人员编制缩减问题,

编码糖蛋白B的裸基因疫苗诱导单纯疱疹病毒Ⅰ型感染小鼠的体液和细胞免疫

[目的]用编码单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)糖蛋白B的pDNA转染小鼠,研究基因疫苗治疗感染性疾病的有效性,并分析免疫反应.[方法]采用血管内注射方法,将含有不同剂量、不同pDNAs的生理盐水注入Balb/c小鼠体内,1周后行再次免疫,观察以不同组合pDNA进行免疫的实验组和对照组小鼠被致死剂量HSV-1感染后生存率间的差异.通过潜伏感染的检测、血清中细胞因子水平的测定、细胞毒性反应的测定及中和实验评价免疫效果.[结果]接种pG.gB或接种pGEG.gB的小鼠,与相应对照组比较,生存率和诱导产生中和抗体的效价与剂量呈正相关,pGEG.gB免疫组对P815.gB细胞有显著的细胞毒性作用,pGEG.gB免疫小鼠的脾细胞增殖反应显著强于pG.gB免疫的小鼠;pG.gB和pGEG.gB免疫后的小鼠血清中IL-12和IFN-γ水平均显著升高.[结论]裸pDNA的经小鼠尾静脉免疫可诱导HSV-1感染小鼠的体液和细胞免疫应答,对小鼠HSV-1急性感染有明显的预防和治疗作用,且含有EBNA1和oriP的EBV质粒载体明显增强CTL活性和增殖反应.

医学微生物学设计性实验教学初探

探讨医学微生物学实验课程进行开放实验室及开展设计性实验的教学方式,为今后实验教学方法的改革积累经验.

临床医学四年级学生考研调查分析

了解临床医学专业四年级学生关于报考硕士研究生的认知和行为情况,为指导医学生的就业方向提供依据。采用问卷调查的方法,对延边大学临床医学四年级学生161人调查,回收154份。91.3%的学生想报考研究生,并且其中89.7%的学生报考临床医学专业。目前考研已经成为学生毕业后的首选出路,因此需要对学生进行正确的毕业指导,以适应时代的要求。

浅议优秀教学团队的培养与精品课程建设的关系

探讨精品课程的建设与优秀教学团队的培养之间的相互关系和意义,明确了精品课程的建设是优秀团队建立的基础和平台,优秀团队的培养是精品课程建设的条件和保障。两者之间是互为条件、相互促进的关系,为精品课程的建设和发展提供参考。

白细胞介素-12基因治疗急性感染单纯疱疹病毒小鼠实验研究

[目的]探讨经静脉转染表达mIL-12的DNA质粒对小鼠1型单纯疱疹病毒(HSV-1)急性感染的预防和治疗作用.[方法]经腹腔接种HSV-1建立小鼠模型,用水流动力学方法将mIL-12基因转染Balb/c小鼠,比较观察实验组与对照组生存率,用ELISA法检测血清中细胞因子水平,用小鼠脾细胞评价细胞毒T细胞(CTL)和淋巴细胞增殖反应.[结果]与对照组比较,转染pGEG.mIL-12组小鼠生存率明显提高,血清中白细胞介素12(IL-12)及γ干扰素(IFN-γ)质量浓度明显升高,脾淋巴细胞增殖反应明显增强,而对特异性P815.gB细胞的CTL水平未见提高.[结论]用水流动力学方法转染小鼠IL-12基因对小鼠HSV-1急性感染有预防和治疗作用.

卡那霉素在体外对A.healyi的杀伤作用

[目的]观察卡那霉素在体外对棘阿米巴A.healyi的杀伤作用.[方法]用1.0,10.0,100.0g/L卡那霉素和0.2,2.0g/L甲硝唑在体外培养棘阿米巴3,8,24,48h,观察用药前及不同培养时间的生长情况.[结果]1.0g/L卡那霉素对棘阿米巴无抑制作用,10.0g/L卡那霉素在培养48h时及100.0g/L卡那霉素培养24h时抑制棘阿米巴生长,100.0g/L卡那霉素在培养48h时杀伤棘阿米巴.2.0g/L甲硝唑作用48h时仍无明显的杀伤作用.[结论]在体外卡那霉素质量浓度为10.0g/L时对棘阿米巴有抑制作用,100.0g/L时具有杀伤作用.

重症肌无力治疗性单价IgG抗体基因的构建

目的:构建一株对重症肌无力(MG)具有特异性免疫治疗作用的单价IgG类抗体基因。方法:应用定点突变技术,将致病性抗乙酰胆碱受体(AChR)抗体IgG637的重(H)链第322位氨基酸进行K322A突变,获得的突变型抗体IgG637/K322A基因再进行H链互补决定区3(CDR3)缺失突变,获得突变型抗体IgG637/K322A/CDR3ΔPLKP基因。经转化大肠杆菌XL1-Blue进行增殖后,转染哺乳类细胞CHO-k1进行表达,表达产物经ELIAS检测与补体C3的结合活性,经RIA检测与特异性抗原人AChR的结合活性。突变抗体H链再经杵(T366Y)臼(Y407T)突变,以利于异源H链的配对。结果:突变型抗体IgG637/K322A丧失了与补体C3结合的能力,突变型抗体IgG637/K322A/CDR3ΔPLKP丧失了与人AChR结合的能力。测序证实已经获得了预想的杵臼突变序列。结论:已经成功的制备了无补体激活能力的单价IgG类抗AChR抗体基因。