基于网络药理学、分子对接和实验验证探讨莪术-鳖甲药对抗肝纤维化的作用机制

采用网络药理学、分子对接技术和实验验证探讨莪术-鳖甲药对(Curcumae Rhizoma-Trionycis Carapax,CRTC)抗肝纤维化的作用机制。首先搜集鳖甲和莪术的化学成分和靶点信息;然后将两味药的作用靶点合并去重。使用疾病数据库以获取肝纤维化的相关基因。提取CRTC和肝纤维化的交集靶点,进一步对“药物-潜在活性成分-潜在靶点”网络进行可视化展示。将交集靶点导入STRING数据库以构建蛋白-蛋白相互作用网络(PPI);然后进行GO功能和KEGG通路富集分析并可视化,再用Autodock Vina软件实现分子对接模型的构建。最后通过体内实验对网络药理学预测的靶点及通路进行实验验证。共筛选得到CRTC与肝纤维化的交集靶点共65个。PPI网络中筛选得到度值排名前四的靶点分别为白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(Akt serine/threonine kinase 1,AKT1)、信号传导及转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferative activated receptor gamma,PPARG)。GO功能富集分析显示涉及的生物过程有1025条,细胞组分有41条,分子功能有84条;KEGG通路富集分析得到149条通路,其中关键通路有EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药性。分子对接结果显示IL-6、STAT3等核心靶点与其对应成分均有良好的结合活性。体内动物实验结果证实CRTC能改善肝纤维化的病理学形态,且显著抑制了IL-6、EGFR、STAT3的表达。综上所述,CRTC通过多靶点、多通路发挥其抗肝纤维化作用,其机制与网络药理和分子对接技术预测的IL-6/EGFR/STAT信号轴相关。

野菊花注射液对人肿瘤细胞SMMC7721、PC3、HL60增殖的影响

目的:探讨野菊花抗肿瘤作用。方法:采用直接将药物加入培养液的方式,以MTT法观察野菊花注射液在不同浓度下对人肿瘤细胞SMMC7721、PC3、HL60增殖的影响。结果:野菊花注射剂在32μl/ml浓度下对人肿瘤细胞株PC3、HL60增殖有明显抑制的作用,但对人肝癌细胞株SMMC7721增殖作用无明显影响。结论:体外实验表明野菊花注射液可抑制人肿瘤细胞株PC3、HL60增殖,提示野菊花注射液具有一定的抑瘤作用。

西黄丸对人肝癌细胞SMMC7721及小鼠宫颈癌细胞U14周期的影响

目的研究西黄丸抑瘤作用对肿瘤细胞周期的影响。方法采用体内体外两方面实验进行。体外实验:将西黄丸浸提液加入人原发性肝癌细胞株SMMC7721培养基中,72h后流式细胞术测定SMMC7721细胞的细胞周期;体内实验:连续10d给予移植性U14荷瘤小鼠模型西黄丸,10d后流式细胞术测定U14细胞的细胞周期。结果在体外实验中,西黄丸(200μl/ml)使SMMC7721中G0-G1期细胞比例显著低于肿瘤细胞对照组,G2-M期增多;在体内实验中,西黄丸高剂量组(0.96g/kg)中也导致U14细胞G0-G1期细胞比例显著低于模型组,G2-M期细胞增多。结论体内、体外研究结果显示西黄丸可特异性地将肿瘤细胞阻滞在G2-M期,提示西黄丸可以通过影响肿瘤细胞周期来发挥抑瘤效应。

不同制备方法对西黄丸体外抑瘤作用影响的比较研究

目的研究不同制备方法对西黄丸体外抑瘤作用的影响。方法采用3种制备方法,即西黄丸浸提液、煎液、含药血清,MTT法分别测定其对两种人恶性肿瘤细胞株(人原发性肝癌细胞株SMMC7721、人早幼粒细胞白血病细胞株HL-60)增殖的影响。结果西黄丸浸提液和煎液均表现出明显的抑瘤作用(P<0.05,P<0.01),且抑瘤效应以浸提液为佳(P<0.05);西黄丸含药血清未表现出抑瘤效应,且含药血清在较高浓度时,对细胞生长表现出促进作用(P<0.01),与空白大鼠血清作用相似。结论不同的制备方法对西黄丸体外抑瘤作用有明显的影响,西黄丸浸提液和煎液均具有明显的抑瘤作用,且浸提液的抑瘤作用优于煎液,古人将西黄丸定位于丸剂,确有其合理性和科学性。血清药理学实验方法是否适合于体外抑瘤实验需进一步探讨。

痛风及高尿酸血症动物模型的研究现状和评价

痛风是一种以血尿酸增高为特征的代谢性疾病 ,近年来随着我国人民生活水平的提高 ,高尿酸血症和痛风的发病率逐年上升 ,因而研制防治痛风和高尿酸血症的药物已成为当前医药界研究的热点 ,但实验动物模型的困难严重地影响着研究工作的开展。本文对目前常见的痛风和高尿酸血症实验动物模型进行了较系统的简介 ,并根据笔者的研究经验进行了简要评价 ,供致力于该方面研究的学者参考。

犀黄丸对多种人恶性肿瘤细胞株MDA-MB-231、SMMC7721、T24、HL-60、A549增殖的影响

目的:研究犀黄丸对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、人肝癌细胞株SMMC7721、人膀胱癌细胞株T24、人早幼粒细胞白血病细胞株HL-60、人肺腺癌A549细胞株细胞增殖的影响。方法:将不同浓度犀黄丸浸出液,直接加入含肿瘤细胞培养板中,MTT法分别测定其对多种恶性肿瘤细胞株增殖的影响。结果:犀黄丸浸出液对MDA-MB-231、SMMC7721、T24、HL-60、A549肿瘤细胞的增殖均有明显的抑制作用(P<0.05;P<0.01),且随浓度的增加,抑制率上升,呈剂量依赖关系,抑瘤作用的IC50以MDA-MB-231、SMMC7721为敏感。结论:体外实验结果表明,犀黄丸对多种人肿瘤细胞增殖有明显抑制作用,不同的恶性肿瘤细胞株对其的敏感性存在较大的差异,其抑瘤作用表现出一定的选择性。提示犀黄丸在传统上用于“乳岩”———乳腺癌的治疗确有一定的科学性,故传统抗肿瘤中药在现代临床使用时也应选择敏感的肿瘤类型。

补经合剂对初老大鼠卵巢FSH受体和子宫E、P受体的影响

目的:以补经合剂对初老大鼠卵巢、子宫内膜受体的影响,拟从分子生物学水平进一步阐明该方的作用机理。方法:以雌性初老大鼠为自然肾虚模型,采用免疫组织化学方法观察该药对肾虚大鼠卵巢的卵泡刺激素受体(FSHR)和子宫内膜的雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)的影响。结果:补经合剂高剂量组(相当于31g原生药/kg)能正向调节大鼠卵巢中卵泡和黄体的FSHR的水平(P<0.05或P<0.01);同时补经合剂高、低剂量组(相当于7.8g原生药/kg)也能正向调节大鼠子宫ER水平,以低剂量组更为明显(P<0.05);补经合剂高剂量组还能正向调节子宫内膜上皮PR的水平(P<0.05)。结论:补经合剂临床上用于治疗月经后期或伴量少的机理,可能与该药正向调节卵巢FSHR和子宫内膜ER、PR的水平有关。

“恐伤肾”与即早基因表达的相关性研究

为观察“恐伤肾”与即早基因表达C -fos的相关性 ,采用惊恐刺激大鼠 ,制造“恐伤肾”大鼠模型 ,通过免疫组织化学方法 ,测定大鼠大脑各部位C -fos的活性。结果 :惊恐刺激可引起大鼠大脑海马与丘脑的C -fos表达明显增高。提示“恐伤肾”

小鼠高尿酸血症模型初探

目的：探索建立小鼠高尿酸血症模型的方法。方法：使用黄嘌呤６００ｍｇ／ｋｇ和乙胺丁醇２５０ｍｇ／ｋｇ，次黄嘌呤６００ｍｇ／ｋｇ和烟酸１００ｍｇ／ｋｇ，ｉｇ给药连续５天。结果：给药两组与正常对照组之间，小鼠血尿酸有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。以黄嘌呤和乙胺丁醇组更为明显。结论：提示该两种方法可作为小鼠高尿酸血症动物模型。

丹参、黄芪及野菊花注射液对正常人肝细胞增殖的影响

目的:比较不同中药注射剂对正常人肝细胞株L02增殖的影响。方法:将丹参、黄芪、野菊花注射液,采用不同浓度直接加入培养液的给药方式,以MTT法测定三种注射液对正常人肝细胞株L02的增殖情况。结果:丹参注射剂对人肝细胞株增殖有明显的促进作用,且随用药剂量的增大,呈一定的量效关系;黄芪、野菊花注射液对L02细胞株增殖作用不明显。结论:丹参注射液对人肝细胞株L02增殖具有促进作用,同时提示不同的中药注射液各有其特点,中医临床辨证论治应存在不同的机理。

两种生脉注射液对小鼠心、肝酶学的影响

目的:探讨生脉注射液对小鼠心、肝酶学的影响。方法:两个厂家的生脉注射液小鼠尾静脉注射,每日1次连续3天,于末次给药2h后进行小鼠心肌酶学(LDHL、CK、AST)、肝脏酶学(ALT)检测。结果:36ml/kg剂量下,某药业的生脉注射液可引起小鼠LDHL、CK、AST、ALT活性的明显升高,另一药厂注射液组仅出现LDHL的活性升高;18ml/kg剂量某药业的生脉注射液可引起小鼠CK活性的明显升高,另一药厂生脉注射液组的心肌、肝脏酶学检测与空白组比较未见明显差异。结论:不同厂家的生脉注射剂在引起心、肝酶学异常变化上存在差异。

桂枝、荆芥挥发油对大鼠急性肺损伤模型核因子κB信号通路影响的比较

目的探讨桂枝、荆芥挥发油对核因子κB/IκB信号通路的影响。方法用大肠肝菌内毒素(LPS)制作大鼠急性肺损伤模型,通过桂枝挥发油和荆芥挥发油治疗后,采用ELISA法检测肺组织细胞中核蛋白NF-κB P65的含量和肺组织溶浆中磷酸化IκB-α、TNF-α和IL-1β的含量。结果正常大鼠肺组织中,NF-κB P65、磷酸化IκB-α、TNF-α和IL-1β有微量表达,LPS经尾静脉注射6 h后,各指标表达均显著增高,与空白对照组比较有显著差异(P<0.01),桂枝、荆芥挥发油组NF-κB P65、磷酸化IκB-α、TNF-α和IL-1β的含量均较模型组显著降低(P<0.01)。结论桂枝、荆芥挥发油对急性肺损伤时高度活化的核因子κB/IκB信号通路有显著的抑制或拮抗作用,提示核因子κB/IκB信号通路可能是桂枝、荆芥挥发油抗炎作用的主要机制之一。

荆芥挥发油对急性肺损伤大鼠肺组织病理形态及NF-κB、IκB含量的影响

目的观察荆芥挥发油(VOHS)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织核因子-κB(NF-κB)及其抑制物α(IκB-α)、白细胞介素1-β(IL1-β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响,探讨荆芥挥发油抗炎作用的细胞信号调控转导机制。方法♂SD大鼠60只随机均分空白对照组、模型对照组、阳性对照组(地塞米松)、VOHS高、中、低(110、55、28μg.kg-1)剂量组。尾静脉注射1 mg.kg-1LPS或生理盐水,6 h后处死大鼠,光镜下观察大鼠肺组织的病理改变;酶联免疫吸附法测定肺组织中NF-κB p65、磷酸化IκB-α、IL1-β和TNF-α的含量。结果与模型对照组比较,VOHS高、中、低剂量组均可减轻大鼠肺组织的炎性病变,显著降低NF-κB p65、磷酸化IκB-α、IL1-β和TNF-α的含量,差异有统计学意义(P<0.05、P<0.01)。结论VOHS的抗炎作用机制之一可能是抑制IκB-α磷酸化的降解和NF-κB的活性,进而减少炎症相关细胞因子IL1-β、TNF-α的合成和释放。

荆芥挥发油对流感病毒性肺炎小鼠Myd88、TRAF6蛋白表达影响

目的:观察荆芥挥发油(VOHS)对流感病毒性肺炎小鼠Myd88、TRAF6蛋白表达的影响,探讨荆芥挥发油治疗流感病毒性肺炎的细胞信号调控转导机制。方法:60只小鼠随机分为6组,分别为空白对照组、模型对照组、阳性药对照组(利巴韦林),VOHS预防给药组(0.110mg/kg)、VOHS高剂量组(0.110mg/kg),VOHS低剂量组(0.028mg/kg),灌胃给药,除预防给药组于造模前3d给药外,其余各组均于造模前1d给药。以10倍LD50浓度的流感病毒滴鼻感染,第6d处死动物。用Western blotting法检测小鼠肺组织中Myd88、TRAF6蛋白表达。结果:与模型对照组比较,VOHS预防组可显著降低小鼠肺组织中的TRAF6相对蛋白表达量,差异有统计学意义,对于Myd88蛋白表达有一定抑制趋势,但无统计学意义。结论:荆芥挥发油可通过抑制TLR信号转导通路的重要接头分子Myd88和关键分子TRAF6的蛋白表达对抗流感病毒性肺炎。

右归丸对肾阳虚大鼠卵巢细胞Caspase-3、TNFα、Bcl-2、Bax表达的影响

目的:研究右归丸对大鼠卵巢卵泡细胞凋亡的影响与作用机理。方法:以雌性SD大鼠注射糖皮质激素造成肾阳虚模型,采用免疫组织化学方法观察了右归丸对肾阳虚大鼠卵巢的卵泡细胞TNFα、Caspase3、Bcl2、Bax表达的影响。结果:在对大鼠卵巢卵泡细胞Bcl2表达的影响上,右归丸低剂量组、金匮肾气丸组与模型组存在明显的差异(P<0.05),右归丸低剂量组、金匮肾气丸组可通过上调bcl2水平,发挥抑制凋亡的作用(P<0.05),TNFα、Caspase3、Bax也存在相应改变。结论:提示右归丸温阳补肾、填精补血的现代机理之一,可能与该药调节卵泡细胞凋亡途径上的Bcl2、Caspase3、Bax表达有关。同时中成药金匮肾气丸也具有相似的作用。

补肾增效液对^(60)Coγ射线小鼠脾淋巴细胞DNA损伤的影响

目的 :探讨以补肾填精为主的补肾增效液对辐射损伤的防护作用。方法 :设正常对照组、病理模型组、阳性药物组、中药大、中、小剂量组共 6组。灌胃 8天 ,于给药 7天后造模 ,以6 0 Coγ射线全身照射小鼠造成辐射损伤 ,采用脾细胞DNA提取及凝胶电泳方法 ,观察中药对辐照小鼠脾淋巴细胞DNA损伤及凋亡的影响。结果 :补肾增效液能降低脾淋巴细胞DNA裂解率。各用药组脾淋巴细胞DNA的裂解率与病理模型组比较 ,阳性药物组和中药小剂量组差异极显著 (P <0 . 0 1) ,中药大剂量、中剂量组与之比较差异显著 (P <0. 0 5 )。结论 :补肾增效液能较好地抑制6 0 Coγ射线所致小鼠脾淋巴细胞凋亡 ,对辐射损伤有良好保护作用。

黄芪甲苷、总多糖、注射液对3种人恶性肿瘤细胞增殖的影响

目的:比较黄芪不同制剂、成分对3种人肿瘤细胞株SMMC7721、PC3、HL60增殖的影响。方法:将不同浓度黄芪甲苷、总多糖、注射液,直接加入肿瘤细胞培养液中,MTT法测定各成分对三种肿瘤细胞的增殖影响。结果:黄芪甲苷、总多糖、注射液上述三种人肿瘤细胞增殖无明显抑制作用,且黄芪甲苷在20mg/ml浓度时对SMMC7721、PC3的增殖有一定促进作用。结论:体外实验结果表明黄芪甲苷、总多糖、注射液对三种人肿瘤细胞株增殖无明显抑制作用。