蛋白酪氨酸磷酸酶-2自身抗体放射配体检测法的影响因素分析

目的对蛋白酪氨酸磷酸酶-2自身抗体（IA-2A）放射配体检测法的影响因素进行分析。方法采用放射配体法检测186批IA-2A，对其检测结果进行回顾性分析和总结，并通过参加国际第4次糖尿病自身抗体检测标准化评估（DASP 2005）验证方法的灵敏度和特异度。结果该方法批内变异系数（CV）为3．1％-9．5％，批间CV为5．5％-11．7％；以信／噪比（S／N）≥50作为检测IA-2A的理想标准，186批次检测中合格161批（86．6％），失败25批（13．4％）。其中高温操作环境[（32．7±6．3）℃]检测失败率（占失败总批次的60％）显著高于低温操作环境[（11．8±5．7）℃，占失败总批次的16％]，且高温操作环境S／N（55．1±6．9）明显低于低温操作环境（68．5±6．2，P〈0．01）。在失败批次中，由三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲盐溶液引起的占68％（17／25），其他原因有标记失败等。DASP 2005反馈结果显示，我室IA-2A检测灵敏度72％，特异度99％，受试者工作特征（ROC）曲线分析显示，曲线下面积0．825±0．048（0．730-0．919）。结论放射配体法检测IA-2A的影响因素，特别是Tris缓冲盐溶液应引起操作者重视并加以控制，以确保结果稳定可靠。

胰岛素自身抗体微量平板放射免疫法的建立与应用

目的建立胰岛素自身抗体（IAA）的微量平板放射免疫（RIA）法，并探讨其临床应用价值。方法^125I-胰岛素与血清在微量平板4℃保温72h后，免疫复合物转移至已包被蛋白A的Millipore过滤平板中并洗涤，于多功能液体闪烁发光分析仪上测计数。以IAA指数≥0．06作为阳性标准，通过参加第四次国际糖尿病自身抗体检测标准化评估（DASP 2005），评价方法的灵敏度与特异性。并检测71例1型糖尿病（T1DM）患者、551例初诊2型糖尿病（T2DM）患者以及317名健康对照者IAA水平。采用SPSS 11．5软件进行t检验、非参数检验χ^2检验和直线相关分析；一致率用Kappa值评估。结果（1）优化的检测条件为5μl血清与2×10^4计数·min^-1的^125I-胰岛素于4℃缓慢振摇保温72h。（2）该方法批内CV4．8％～8．9％，批间CV6．4％～10．5％，DASP 2005反馈结果显示该法诊断T1DM灵敏度50％（25／50），特异性97％（97／100）。与国产IAA RIA试剂盒进行比较，结果判定总体一致率为72．9％（Kappa值0．402），相关系数（r）为0．678（P〈0．001）；26例结果不相符的标本中25例为该法检测阳性而国产RIA试剂盒检测阴性。（3）该方法检测T1DM患者的阳性率为19．7％（16／71），显著高于健康对照组的0．9％（3／317，χ^2=54．36，P〈0．001），其中0～9岁T1DM组9例中IAA阳性5例。检测初诊T2DM患者IAA阳性率1．5％，与健康对照组差异无统计学意义（χ^2=0．95，P〉0．05）。结论IAA微量平板RIA法灵敏度与特异性好，可应用于临床，IAA在婴幼儿T1DM患者中阳性率较高。

胰岛素自身抗体对成人隐匿性自身免疫糖尿病的诊断价值

目的 探讨胰岛素自身抗体(IAA)对成人隐匿性自身免疫糖尿病(LADA)的诊断价值.方法 选取2003年10月至2007年3月连续在中南大学湘雅二医院就诊的1003例初诊2型糖尿病、110例1型糖尿病患者,并选取同期米院体格检杏的317名健康对照者,采用微量平板放射免疫法和放射配体法检测IAA及谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)和蛋门酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A)水平,了解IAA阳性率及与其他抗体重叠情况.对4例IAA单独阳性的LADA患者进行了4年随访,观察其临床特征变化.采用卡方榆验比较初诊2型糖尿病组、健康对照组和初诊1型糖尿病组IAA阳性率,采用t检验比较IAA阳性组和阴性匹配组空腹胰岛素(FINS)水平下降速率.结果 (1)初诊2型糖尿病患者IAA阳性率3.39%(34/1003)高于健康埘照组0.95%(3/317)(X2=5.3,P<0.05),但低于1型糖尿病组21.82%(24/110)(x2=68.2,P<0.01).(2)初诊2型糖尿病患者三种抗体联合检测阳性率为10.47%(105/1003),高于GADA 6.58%(66/1003)、IA-2A 2.79%(28/1003)、IAA3.39%(34/1003)单个抗体检测(x2值分别为9.2、37.8和46.2,P值均<0.05).IAA联合检测可提高LADA阳性检出率2.39%.(3)在4年随访期间,IAA阳性者逐年转阴,4例中的2例患者合并GADA阳性;IAA阳性组FINS水平下降速率较阴性匹配组呈增高趋势(分别为15.37%和5.29%;t=1.7,P=0.059).结论 IAA对初诊2型糖尿病患者筛查LADA有一定价值;联合检测IAA、GADA、IA-2A能提高LADA诊断效率.

谷氨酸脱羧酶抗体微量平板放射结合检测法的建立与初步应用

目的建立谷氨酸脱羧酶抗体（GAD-Ab）的微量平板放射结合检测（RBA）法并评价其临床价值。方法采用^35S-GAD65抗原与血清在96孔平板中保温24h，而后转入已包被蛋白A的Millipore平板中，平板经洗涤后进行放射性计数，GAD—Ab结果以WHO标准单位（U／ml）表示。检测224名健康人、162例1型糖尿病（T1DM）和210例初诊2型糖尿病（T2DM）患者GAD—Ab浓度，评价其临床应用效果。并分别选择经典放射配体（RLA）法检测GAD—Ab指数呈梯度排列的T1DM患者和健康人共119名，比较RBA法和RLA法检测结果的一致率和相关性。对32名健康人、35例TIDM患者、24例T2DM患者同时采集静脉血和手指血，探索该方法检测手指血GAD—Ab浓度的可行性，同时也与RLA法比较。分别采用直线相关分析、t检验、方差分析、受试者工作特征（ROC）曲线等方法进行统计学处理。结果（1）优化的检测条件包括采用2μl血清与3×10^4计数·min^-1的标记抗原缓慢振荡保温24h，采用4℃PBS缓冲液洗涤沉淀物10次，采用Optiphase Supermix型闪烁液测量放射性计数。（2）该法检测GAD—Ab批内CV为3．8％～10．2％，批间CV5．6％～11．9％；GAD—Ab浓度在40．3～664U／ml范围内线性良好，检测限为3．6U／ml；该方法灵敏度78％，特异性98％，与经典RLA法结果判定一致率97．5％，Kappa值0．95，两者检测值呈显著正相关（r=0．915，P〈0．001）。（3）GAD—Ab在TIDM和T2DM患者阳性率分别为46．9％（76／162）和5．2％（11／210），明显高于健康人的n89％（χ^2值为123．5和10．1，P〈0．001和〈0．01）。（4）该方法检测手指血GAD—Ab与经典RLA法检测静脉血结果判定一致率96．7％，Kappa值0．905，检测结果呈显著正相关（r=0．946，P〈0．001）。结论建立的微量平板RBA法灵敏度、特异性、重复性好，能适用于末梢血GAD—Ab检测，具有较好的临床应用价值。

1型糖尿病患者酪氨酸磷酸酶2β抗体检测的临床意义

目的探讨1型糖尿病（T1DM）患者中蛋白酪氨酸磷酸酶2B抗体（IA-2βA）的分布规律及阳性患者的临床特征。方法采用放射配体法检测401例T1DM患者、200例正常对照血清中IA-2βA、IA-2A和谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）水平，并分析抗体阳性患者的临床特征。结果（1）T1DM组IA-2βA阳性率8．7％（35／401），显著高于正常对照组（1．0％，P〈0．05）；（2）35例IA-2βA阳性患者中，同时合并IA-2A阳性的患者16例，阳性重叠率45．7％。IA-2BA与IA-2A指数无相关性（r=0．021，P=0．780）；（3）T1DM患者中，IA-2A、IA-2βA阳性率在0～9岁组最高，二者阳性率显著高于10岁以上的T1DM患者（62．8％vs 19．7％，Χ^2=31．41，P〈0．001；20．0％vs 7．6％，Χ^2=6．11，P〈0．05）。而GADA阳性率在各年龄组中差异无统计学意义；（4）与单独IA-2A阳性患者比较。单独IA-2βA阳性患者年龄和起病年龄较大（IA-2A阳性患者平均年龄24．2岁，平均起病年龄21．6岁；IA-2βA阳性患者平均年龄35．5岁，平均起病年龄34．0岁，均P〈0．05）。结论IA-2βA在儿童T1DM患者中阳性率较高，且随年龄增长阳性率下降。IA-2βA是糖尿病患者自身免疫检测的一项实用指标。