大豆异黄酮对过氧化氢诱导的肝细胞损伤的保护作用

为探索大豆异黄酮对过氧化氢(H_2O_2)致肝细胞损伤的保护作用,以H_2O_2损伤Chang Liver细胞建立肝细胞氧化应激损伤模型,并以10,20和40 mg·L^(-1)大豆异黄酮进行干预。采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测肝细胞存活率;以微板法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性和肝细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性,以及肝细胞还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量;采用蛋白印迹技术检测肝细胞核因子-E2相关因子2(Nrf2)蛋白含量。在10~40 mg·L^(-1)范围内,大豆异黄酮对Chang Liver细胞不显示细胞毒作用。300μmol·L^(-1)H_2O_2刺激后,模型组肝细胞存活率与正常组比较下降,细胞外液中ALT、AST、LDH水平上升,说明Chang Liver细胞损伤显著;而模型组肝细胞中SOD和GSH水平与正常组比较下降,丙二醛水平上升,说明模型组Chang Liver细胞氧化应激增强。大豆异黄酮可剂量依赖性地提高Chang Liver细胞存活率,降低ALT、AST、LDH向细胞外液的释放;降低细胞MDA水平,升高细胞SOD和GSH水平,增高核中Nrf2蛋白水平。研究结果显示大豆异黄酮对H_2O_2致肝细胞氧化应激损伤具有保护作用。

三七皂苷通过AMPK/DRP1介导的线粒体裂变减轻过敏性鼻炎

目的探讨三七皂苷(notoginsenoside R1,PNS-R1)是否通过AMP激活蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/线粒体裂变关键蛋白(dynamin-related protein 1,DRP1)介导的线粒体裂变减轻过敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR)。方法利用不同剂量PNS-R1治疗卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)诱导的AR小鼠,通过观察擦鼻、打喷嚏的过敏症状和鼻组织的HE染色探索PNS-R1在AR中的抑制作用。通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清IgE水平和鼻灌洗液(nasal lavage fluid,NLF)炎性细胞因子水平,Western blot检测凋亡相关蛋白。在体外,利用IL-13刺激人鼻黏膜上皮细胞(human nasal epithelial cells,HNEpC),观察细胞凋亡、线粒体膜电位、细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)和线粒体ROS(mtROS)生成、AMPK/DRP1,TXNIP/NLRP3炎症小体的表达水平以及DRP1易位情况。结果PNS-R1减轻了AR小鼠的过敏症状,HE染色炎性细胞减少,降低血清OVA特异性IgE水平以及NLF中IL-4、IL-6和IL-8的水平。在体外,PNS-R1上调IL-13刺激后的线粒体膜电位,降低ROS和mtROS生成、减少cleaved-caspase-3、Bax和上调Bcl-2表达,以AMPK依赖性方式下调DRP1磷酸化(Ser 616)和DRP1在线粒体膜上的易位,减少TXNIP/NLRP3表达。结论PNS-R1通过抑制AMPK/DRP1信号轴及随后的TXNIP/NLRP3信号轴保护线粒体的完整性,缓解AR。

虎杖苷调控PINK1-Parkin介导的线粒体自噬改善变应性鼻炎

目的探讨虎杖苷(Polydatin,PD)通过PINK1-Parkin信号通路调控线粒体自噬对变应性鼻炎(Allergic rhinitis,AR)的保护作用及机制,为临床治疗AR提供新靶点。方法将32只BALB/c小鼠随机分为4组,即对照组,OVA组,PD低剂量(30 mg·kg^(-1))和高剂量(45 mg·kg^(-1))治疗组。造模结束后,记录小鼠挠鼻和打喷嚏的总次数。HE染色观察鼻黏膜上皮的形态和嗜酸性粒细胞浸润情况。Western blot检测PINK1、Parkin、TOM20和线粒体凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3、cleaved-caspase-3和Cytochrome C的表达量。免疫荧光观察鼻黏膜上皮细胞(HNEpC)中PINK1和cleaved-caspase-3的表达。结果AR小鼠挠鼻和打喷嚏的频率显著增加,鼻黏膜上皮增厚,嗜酸性粒细胞聚集,予以PD治疗后逆转了上述变化。Western blot结果显示,OVA组PINK1、Parkin和促凋亡蛋白Bax、caspase-3、cleaved-caspase-3、Cytochrome C表达增加,TOM20、Bcl-2的表达降低,PD上调了PINK1、Parkin、Bcl-2的水平,抑制了TOM20和促凋亡蛋白的表达,而予以线粒体分裂抑制剂1(Mdivi-1)预处理后,PINK1、Parkin和Bcl-2表达减少,TOM20和促凋亡蛋白表达增加,PD治疗作用不明显。免疫荧光证实了PINK1和cleaved-caspase-3的Western blot结果。结论PD通过激活PINK1-Parkin信号通路,促进线粒体自噬从而改善AR。

IL-17A通过p38 MAPK/ERK1/2信号通路上调慢性鼻窦炎患者MMP-9的表达

目的:探讨白细胞介素17A(IL-17A)在介导慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)中基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的作用及机制,为临床治疗CRSwNP组织重塑寻找新靶点。方法:收集以CRSwNP为诊断的患者15名,鼻中隔偏曲患者15名。采用ELISA、RT-qPCR和免疫组织化学染色方法检测患者相关组织中IL-17A和MMP-9的表达水平;HE染色法观察患者钩突及鼻息肉组织黏膜的病变;Western blot检测鼻息肉原代细胞和人鼻黏膜上皮细胞(HNEpCs)中MMP-9和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路蛋白的表达;细胞免疫荧光观察HNEpCs中MMP-9的表达变化。结果:CRSwNP患者IL-17A和MMP-9的表达明显增加,其鼻部组织黏膜炎症浸润明显。鼻息肉及IL-17A刺激的HNEpCs中细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和p38磷酸化表达明显增加,而鼻息肉成纤维细胞或HNEpCs予以ERK1/2或p38抑制剂预处理可降低以上蛋白的表达水平。结论:IL-17A可能在CRSwNP的组织重塑中对MMP-9的调控发挥至关重要的作用,其机制可能与p38 MAPK/ERK1/2信号通路有关。

IL-17A中和抗体通过IL-17RA/Traf6/NF-κB信号通路缓解鼻窦炎伴鼻息肉组织重塑

目的通过探究IL^(-1)7A中和抗体缓解慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)组织重塑的作用机制,为临床治疗CRSwNP组织重塑寻找新靶点。方法BALB/c小鼠32只,随机分为Control组,C+IL^(-1)7A中和抗体组,HDM模型组,HDM+IL^(-1)7A中和抗体组。ELISA和免疫组化检测小鼠炎症因子的表达。HE着色法察看小鼠鼻息肉及下鼻甲粘膜的病变,Western blot检测小鼠和HNEpCs中MMP-9、VEGF、Act1、Traf6、NF-κB信号通路蛋白。结果CRSwNP小鼠中IL-4、IL^(-1)7A表达水平增加,MMP-9、VEGF、Act1、Traf6、NF-κB信号通路蛋白表达上调,其鼻组织炎症浸润明显,而予以IL^(-1)7A中和抗体后以上蛋白表达水平下降,炎症浸润缓解。IL^(-1)7A刺激HNEpCs后Act1、Traf6、NF-κB信号蛋白表达增加,而予以anti-IL^(-1)7RA和Traf6 inhibitor预处理可降低以上蛋白的表达水平。结论IL^(-1)7A可能在CRSwNP的组织重塑中发挥至关重要的作用。阻滞IL^(-1)7RA/Traf6/NF-κB信号通路可以缓解鼻窦炎伴鼻息肉组织重塑。

筛窦黏液囊肿突入眶内1例

患者韩XX，男，58岁，农民，吉林省敦化市人，于2006年11月3日主因“右限内眦部肿物20年迅速增大5年”入院。该患者20年前无明显诱因右眼内眦部有一大米粒大小的肿物，患者未在意，未经治疗。5年前开始迅速增大现有扁豆大，1年前开始右眼经常分泌白色糊状分泌物，易擦拭。5天前到当地医院检查穿刺抽出黑褐色液体，眼眶CT印象：右限内侧近筛窦区占位性病变建议病理检查，考虑右侧上颌窦内炎症。初步诊断为筛窦肿物，建议手术治疗。今日到我院进一步诊治，门诊以筛窦肿物介绍入院。入院查体：体温36.2℃，呼吸20次／分，脉搏80次／分，血压125／80m，Hg浅表淋巴结无肿大。

膜迷路的三维重建及解剖结构测量

目的观测不同妊娠周龄人胚胎、正常成人及先天性内耳畸形患者膜迷路的三维建模,分析膜迷路空间立体结构数据。方法利用7、10、12及16周龄的人胚胎连续序列切片与正常成人内耳和先天性内耳畸形患者影像学资料进行比较分析。人胚胎标本利用数字切片扫描获得高清二维图。测量不同妊娠周龄人胚胎与成人内耳结构。应用Mimics 21.0软件进行膜迷路三维建模。结果数字切片扫描后高清二维图中清楚分辨内耳各结构,三维重建优于影像学结果。7、10、12、16周龄胚胎、正常成人及内耳畸形患者的前、后侧半规管总膜脚的夹角分别为157.36°、155.19°、153.79°、150.58°、121.36°及121.88°,耳蜗相对于前庭部分内弯,分别为130.15°、120.68°、146.12°、112.73°、104.61°及121.88°。除内耳畸形患者以外的外侧半规管的平面与颅骨水平轴面的夹角分别为36.86°、21.08°、18.37°、15.25°及15.65°。7、10与16周龄与正常成人内耳的3条半规管均互相垂直,12周龄人胚胎的前侧半规管与后、外侧半规管的夹角<90°。胚胎标本中绕蜗轴螺旋管在16周与12周龄已形成2.5圈,10周龄时为2圈,而7周龄时尚未形成1圈。先天性内耳畸形患者前庭囊状扩张大小约6.1 mm×4.6 mm,外侧半规管显示不清。结论通过不同方法成功重建出发育阶段及出生后人内耳膜迷路,反映内耳各结构的空间位置关系并得出相关解剖测量值,推测先天性内耳畸形在胚胎期的发育停滞时间,为婴幼儿早期耳聋的诊断提供了初步依据。

祁州漏芦水提取物对叔丁基过氧化氢诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨祁州漏芦水提取物(Radix Rhapontici water extract,RRWE)对叔丁基过氧化氢(tert-butyl hydroperoxide,TBHP)所致血管内皮细胞凋亡的保护作用。方法体外利用TBHP制备人脐静脉血管内皮细胞损伤模型,随机分为正常对照组、TBHP损伤组、RRWE低剂量组和高剂量组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,比色法观察丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用荧光染色法观察活性氧(ROS)、细胞凋亡及线粒体跨膜电位水平,免疫印迹法检测细胞NF-κB、JNK、Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白的表达情况。结果 RRWE增高TBHP所致损伤的内皮细胞活力,降低细胞ROS水平,减少MDA生成,增高GSH水平与SOD活性,升高线粒体跨膜电位水平,并降低细胞p-JNK及p-NF-κB水平,降低细胞Bax/Bcl-2比值,减少caspase-3活化,抑制细胞凋亡。结论RRWE对TBHP所致的血管内皮细胞损伤具有保护作用,并抑制细胞凋亡,其机制可能与抑制JNK和NF-κB活化有关。

祁州漏芦乙醇提取物对Chang Liver细胞损伤的保护作用

目的探索祁州漏芦乙醇提取物（RUEE）对过氧化氢（H2O2）致肝细胞损伤的保护作用。方法以H2O2损伤Chang Liver细胞建立氧化应激模型,以不同浓度RUEE（12.5~400 mg/L）进行干预。采用MTT法检测细胞存活率;以微板比色法检测培养液中LDH和转氨酶活性以及细胞中还原型谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）含量;免疫印迹技术检测核因子-E2相关因子2（Nrf2）蛋白含量。结果 RUEE在12.5~100 mg/L范围内对Chang Liver细胞存活率无显著影响,不具细胞毒作用。与对照组相比,H2O2组细胞内氧化应激增强,细胞损伤显著。RUEE能剂量依赖性地提高细胞存活率,降低细胞培养液中LDH、ALT、AST的释放;降低细胞MDA含量,升高细胞GSH含量,增高核中Nrf2蛋白水平。结论祁州漏芦对H2O2致肝细胞氧化应激损伤具有保护作用。