富血小板血浆联合间充质干细胞治疗兔膝关节骨性关节炎的机制研究

目的探讨富血小板血浆(PRP)联合间充质干细胞(MSC)对兔膝关节骨性关节炎的治疗作用及潜在机制。方法PRP处理MSC,蛋白印迹实验观察MSC中Mg^(2+)依赖性蛋白磷酸酶1δ(Wip1)蛋白表达;MSC通过转染法构建Wip1过表达细胞;将30只新西兰大白兔分为对照组、模型组、MSC组、Wip1-MSC组、PRP+MSC组,每组6只;采用改良Hulth法构建兔左膝关节骨关节炎模型;肉眼观察关节软骨形态变化并行Pelletier JP评分;以Mankin评分进行病理评估;CCK-8法检测关节软骨细胞增殖能力;ELISA法检测关节液中炎症因子水平。结果PRP与DMEM培养基按1∶3、1∶2、1∶1比例混合均可诱导MSC中Wip1蛋白表达上调(P<0.01);与对照组相比,模型组Pelletier JP和Mankin评分明显升高(P<0.01);与模型组相比,MSC组、Wip1-MSC组和PRP+MSC组Pelletier JP和Mankin评分均明显降低(P<0.05,P<0.01);而与MSC组相比,Wip1-MSC组和PRP+MSC组Pelletier JP和Mankin评分明显降低(P<0.05)。与对照组相比,模型组细胞活力、增殖能力及炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)均明显升高;与模型组相比,MSC组、Wip1-MSC组、PRP+MSC组细胞活力、增殖能力及炎症因子显著降低(P<0.05或P<0.01);而与MSC组相比,Wip1-MSC组和PRP+MSC组细胞活力和增殖能力及炎症因子水平明显降低(P<0.01)。结论PRP可诱导MSC中Wip1表达而增强MSC对兔膝关节骨性关节炎的治疗作用。

M1巨噬细胞培养液对ER阳性乳腺癌细胞上皮-间质转换的影响及Calpain的介导作用

目的 探讨M1巨噬细胞对乳腺癌细胞上皮细胞-间充质转换(EMT)的影响及钙蛋白酶(Calpain)在其中的介导作用。方法 以人乳腺癌细胞系雌激素受体阳性(ER+)细胞MCF-7、T47D及雌激素受体阴性(ER-)细胞MDA-MB-231为模型细胞,实验分为MCF-7细胞及T47D细胞的RPMI-1640组(RPMI-1640纯培养基培养)、M1巨噬细胞条件培养液培养组(M1-CM组)、M1-CM+Calp组[M1-CM联合Calpain抑制剂Calpeptin(50μmoL/L)处理]、M1-CM+CI-Ⅲ组[M1-CM联合Calpain抑制剂Calpain inhibitorⅢ(50μmoL/L)处理],MDA-MB-231细胞的RPMI-1640组、M1-CM组;采用划痕实验和侵袭实验检测各组中MCF-7细胞、T47D细胞、MDA-MB-231细胞的迁移能力及MCF-7细胞的侵袭能力,采用qRT-PCR检测M0巨噬细胞、M1巨噬细胞趋化因子受体7CCR7、趋化因子配体10(CXCL10)及白细胞介素-12(IL-12) mRNA表达水平,采用Western blot实验检测MCF-7细胞、T47D细胞及MDA-MB-231细胞中上皮-钙黏素(E-cad)、纤连蛋白(FN)、波形蛋白(Vim)蛋白水平表达。结果 与RPMI-1640组相比,M1-CM组ER+细胞MCF-7及T47D迁移能力增强(P<0.05),MCF-7细胞侵袭能力增强(P<0.05);ER+细胞MCF-7及T47D E-cad蛋白表达水平下调,而FN、Vim表达上调(P<0.05),而ER-细胞MDA-MB-231中只有E-cad表达上调(P<0.05);与M1-CM组相比,ER+细胞MCF-7及T47D的M1-CM+Calp组、M1-CM+CI-Ⅲ组中M1-CM诱导的ER+乳腺癌细胞EMT效应被逆转(P<0.05)。结论 M1巨噬细胞条件培养液可以促进ER+细胞人乳腺细胞的EMT,但对ER-细胞EMT无明显影响,其促进ER+乳腺癌细胞EMT信号机制可能与Calpain通路有关。

面向工业自动化的物联网技术的应用研究

由于市场经济的迅猛发展,工业自动化目前成为社会发展的重要趋势。然而,面向工业自动化发展,工业针对物联网以及物联网技术提出了较高的要求。因此,物联网针对工业来讲,就是互联网的一种延伸、创新以及拓展,在计算机与互联网发展的基础上,物联网属于第三代世界信息产业。本文分析面向工业自动化的物联网关键技术,并探讨面向工业自动化的物联网技术的应用。

《机械制造基础》课件的制作

计算机辅助教学简称 CAI,是将计算机作为教学媒体 ,为学生提供一个良好的学习环境 ,使学生通过与计算机的对话来进行学习的一种新型教学形式。本文简单阐述了利用 Authorware软件制作《机械制造基础》

仓库库存计算机信息管理系统

用计算机对仓库库存信息进行日常的管理,通过对系统需求分析,从系统设计着手,介绍系统各模块,包括输入输出、信息查询、数据报表、系统维护等功能的实现。简单介绍概念结构设计、逻辑结构设计、界面设计及安全性设计等。

M1巨噬细胞培养液经ERK/Notch1通路对MCF-7细胞EMT的影响

目的探讨M1巨噬细胞条件培养液对乳腺癌细胞上皮-间质转换(EMT)的影响、及EMK/Notch1通路在其中的介导作用。方法将MCF-7细胞分为RPMI-1640组(RPMI-1640纯培养基)、M1-CM组(M1巨噬细胞条件培养液)、M1-CM+DAPT组(M1-CM联合50μmol/L DAPT)及M1-CM+U0126组(M1-CM联合10μmol/L U0126),采用划痕实验和侵袭实验(Transwell)检测MCF-7细胞迁移和侵袭能力,采用蛋白印迹(Western blot)实验检测MCF-7细胞蛋白水平表达。结果与RPMI-1640组相比,M1-CM组MCF-7细胞迁移率及侵袭率均增加(P<0.05)、上皮标志物E-cad蛋白表达水平下调(P<0.05)、间质标志物FN及Vim蛋白表达水平上调(P<0.05);与M1-CM组相比,M1-CM+U0126组及M1-CM+DAPT组MCF-7细胞迁移率及侵袭率均降低、E-cad蛋白表达水平上调(P<0.05)、FN及Vim蛋白表达水平下调(P<0.05);与M1-CM组比较,M1-CM+U0126组Notch信号通路Notch1蛋白、其靶基因Hes1蛋白表达均被显著抑制(P<0.05),M1-CM+DAPT组ERK磷酸化未被抑制(P>0.05)。结论M1巨噬细胞条件培养液促进MCF-7细胞EMT,该效应可能与ERK/Notch1信号通路活动有关。

表皮生长因子对乳腺癌细胞上皮-间质转化的影响及钙蛋白酶的介导作用

目的:观察表皮生长因子(EGF)对人乳腺癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响,探讨钙蛋白酶(Calpain)在其中的作用。方法:常规培养雌激素受体(ER)阳性乳腺癌细胞MCF-7和ER阴性MDA-MB-231细胞,EGF诱导EMT并适时加入Calpain抑制剂Calpeptin预处理;划痕实验观察细胞迁移能力,蛋白印迹实验检测细胞FN和E-cadherin蛋白表达。结果:EGF(50μg/L)处理24 h和48 h均显著增加MCF-7和MDA-MB-231细胞迁移(P<0.01);EGF处理24 h、48 h、72 h时均能诱导MCF-7和MDA-MB-231细胞FN表达上调和E-cad表达下调(P<0.01),在48 h时具有最佳诱导效应;Calpeptin(10μmol/L)预处理能显著抑制EGF诱导的MCF-7和MDA-MB-231细胞迁移(P<0.01);48 h时, Calpeptin预处理能显著抑制EGF诱导的MCF-7和MDA-MB-231细胞FN表达上调和E-cad表达下调(P<0.01)。结论:EGF能诱导乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞EMT和迁移,该效应可能与Calpain的介导作用相关。

钙蛋白酶抑制剂对雌激素诱导人乳腺癌细胞上皮-间质转化的影响

目的:探讨钙蛋白酶(Calpain)对17β-雌二醇(E2)诱导人乳腺癌细胞上皮-间质转化(EMT)的影响。方法:以雌激素受体(ER)阳性乳腺癌细胞MCF-7和ER阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞为研究模型,分别用二甲基亚砜(DMSO,对照组)、50 nmol/L E2(E2组)及50 nmol/L E2联合10μmol/L Calpeptin(E2+Calpeptin组)处理;采用划痕实验观察各组MCF-7和MDA-MB-231细胞的迁移能力,采用蛋白印迹法检测各组细胞纤连蛋白(FN)和E-钙黏素(E-cadherin)蛋白表达。结果:与对照组比较,E2组MCF-7和MDA-MB-231细胞在24和48 h的迁移率均增加(P<0.01),细胞中的FN蛋白在24、48和72 h表达均明显上调、E-cadherin蛋白表达明显下调(P<0.01);与E2组比较,E2+Calpeptin组MCF-7和MDA-MB-231细胞划痕迁移率明显降低,FN表达明显减少、E-cadherin表达明显增加(P<0.01)。结论:E2可通过Calpain诱导MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞的EMT及细胞迁移。

船舶修造中的污染防治

根据《防治船舶污染海洋环境管理条例》的要求,文章讨论了船舶修造中的大气污染源、水污染物、固体废物和噪声污染物来源,提出了船舶修造污染物中的防治措施,明确了船舶修造中改进改造防污染设施的方法。

教学反思在教学行为过程中的应用与研究

教学反思是实施新课程教学的一个不可或缺的技能要求,也是提升教师素质的重要途径。能否坚持对自己的教学行为进行反思是一个教师进取心、责任心、勇气和意志力的表现,是教师能否在教学实践中运用好教学新理念的决定因素。我国著名心理学家林崇德提出:优秀教师=教学过程+反思。这句话反映出教学反思对教师专业发展的重要性。

17β-雌二醇对乳腺癌细胞迁移的影响及CANP-FN通路的介导作用

目的探讨17β-雌二醇(E2)对人乳腺癌细胞迁移活动的影响及其信号机制。方法以雌激素受体(ER)阳性MCF-7和ER阴性MDA-MB-468乳腺癌细胞为研究模型,E2处理诱导细胞迁移。采用划痕实验检测细胞迁移能力,小分子RNA(siRNA)转染模型细胞沉默纤连蛋白(FN)基因表达,Western blot法检测蛋白水平,钙蛋白酶(CANP)特异性抑制剂Calpeptin(Cal)预处理细胞干预胞内CANP活性。结果(1)E2(50 nmol·L^(-1))处理24 h可明显促进MCF-7和MDA-MB-468乳腺癌细胞迁移,迁移率分别增加(51.55±5.50)%(P<0.05)和(40.78±4.78)%(P<0.01);(2)E2明显上调MCF-7和MDA-MB-468乳腺癌细胞FN蛋白表达水平,分别为对照组的2.11倍(P<0.05)和1.86倍(P<0.01);(3)Cal(10μmol·L^(-1))可明显抑制E2诱导的MCF-7和MDA-MB-468乳腺癌细胞迁移,抑制率分别为(49.55±6.44)%(P<0.05)和(36.85±4.40)%(P<0.01);(4)Cal能明显抑制MCF-7和MDA-MB-468乳腺癌细胞FN蛋白表达上调,抑制率分别为(80.12±4.55)%和(78.84±5.70)%(P<0.01);(5)siRNA沉默FN能抑制E2诱导MCF-7和MDA-MB-468乳腺癌细胞迁移,抑制率分别为(40.65±5.80)%(P<0.01)和(40.88±6.02)%(P<0.05)。结论E2可促进ER阳性或阴性乳腺癌细胞的迁移,而CANP-FN信号通路可能参与介导E2的促细胞迁移效应。

长链非编码RNA LINC00152对人脑胶质瘤裸鼠移植瘤生长的影响及机制探讨

目的 观察长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA) LINC00152过表达对人脑胶质瘤U251荷瘤鼠肿瘤生长的影响并对其机制进行探讨。方法 慢病毒转染法上调U251细胞LINC00152表达水平,设立LINC00152过表达组(LV-LINC00152组)和空载对照组(LV组)细胞,以正常U251细胞作为空白对照组(control组);qRT-PCR检测LINC00152表达水平;构建U251荷瘤鼠模型,p-YAP抑制剂XMU-MP-1进行处理,测量肿瘤体积,实验终点称量瘤重;免疫组织化学染色观察肿瘤组织Ki67表达;蛋白印记实验检测YAP、p-YAP、LATS1、pLATS1蛋白表达。结果 与LV组相比,LV-LINC00152组LINC00152表达明显上调(P<0. 01)。实验终点时,与LV组荷瘤鼠肿瘤相比,LV-LINC00152组肿瘤体积显著增大,瘤重明显增加(P<0. 01);XMU-MP-1(1 mg/kg和3 mg/kg)处理明显降低LV-LINC00152组荷瘤鼠肿瘤体积和瘤重(P<0. 01),并呈剂量依赖性。LV组肿瘤组织Ki67呈弱阳性表达,而LV-LINC00152组呈强阳性表达;XMU-MP-1(1 mg/kg和3 mg/kg)处理后二者肿瘤组织Ki67呈弱阳性和阳性。与LV组相比,LV-LINC00152组肿瘤组织p-YAP和p-LATS1蛋白表达明显上调(P<0. 01);XMU-MP-1(1 mg/kg和3 mg/kg)处理可逆转p-YAP和p-LATS1蛋白表达(P<0. 01),并存在剂量依赖性。结论 长链非编码RNA LINC00152可诱导YAP磷酸化,促进脑胶质瘤生长,而p-YAP抑制剂XMU-MP-1能抑制长链非编码RNA LINC00152的上述生物学效应。

船舶修造单位的溢油应急反应设备库配置

文章根据有关规定和大连中远船务工程有限公司溢油应急反应设备库的配置情况,讨论了船舶修造单位溢油应急反应设备库的配置依据及其设备选型。

国家税收激励政策的启示

市场竞争日益激烈是时代发展与进步的必然趋势,为了提高企业竞争能力,大力发展技术创新活动成为企业发展的关键,然而,一种"市场失灵"现象也就随着创新活动本身所具有的特性而逐渐产生,因此,在企业进行技术创新的过程中,除了自身的努力,还需要国家的支持与帮助,因此,税收激励政策这项国家进行宏观调控最为有力的工具也就越来越体现出其重要价值与作用。然而我国税收激励政策较之发到起步较晚,在发展过程中还存在诸多问题,因此,文章以存在的问题作为切入点,对税收激励政策的启示进行一下细致分析。

钙蛋白酶2介导雌激素调控乳腺肿瘤细胞GREB1基因表达

目的:探讨钙蛋白酶2(CANP2)对17β-雌二醇(E2)刺激MCF-10A转化细胞增殖能力、GREB1基因表达的影响及其机制。方法:以乳腺癌MCF-10A转化细胞为研究模型,乳腺癌MCF-7细胞为阳性对照,采用E2(50 nmol/L)刺激2种细胞24 h后,平板克隆方法观察细胞的增殖能力;以0.1%的二甲亚砜(DMSO)刺激MCF-10A、MCF-7细胞作为阴性对照组,以CANP抑制剂Calpeptin(Calp)预处理2刺激的MCF-10A转化细胞1 h或shRNA-CANP2转染2刺激的MCF-10A转化细胞沉默基因表达,同时设立E2对照组和转染空载体E2对照组,采用qRT-PCR检测细胞中GREB1基因表达水平,平板克隆方法观察细胞的增殖能力。结果:与阴性对照比较,E2能上调MCF-10A转化细胞和MCF-7细胞中GREB1基因表达(P<0.01,P<0.05);与E2对照组比较,Calpeptin能抑制E2上调MCF-10A转化细胞和MCF-7细胞的GREB1基因表达,并促进细胞的增殖(P<0.01);与转染空载体E2对照组相比,shRNA-CANP2基因沉默能使MCF-10A转化细胞和MCF-7细胞增殖能力减弱(P<0.01),并抑制E2刺激的MCF-10A转化细胞中GREB1表达的上调(P<0.01,P<0.05)。结论:可能通过CANP2 E2诱导恶性转化乳腺上皮细胞GREB1基因的表达和细胞生长。

17β-雌二醇素对人三阴乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨17β-雌二醇素(E2)对人三阴乳腺癌(TNBC)细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:以人源乳腺癌细胞系MDA-MB-231及468细胞为模型细胞,实验分为二甲基亚砜组(DMSO组)、E2组、E2联合钙蛋白酶抑制剂(E2联合Cal)组及E2联合钙蛋白酶抑制剂Ⅲ组(E2联合CIⅢ组),采用噻唑蓝(MTT)实验和平板克隆实验检测细胞增殖和克隆能力,采用V-FITC/PI荧光凋亡试剂盒检测细胞程序性死亡,采用蛋白印迹法检测细胞蛋白表达水平。结果:E2组两种细胞的增殖率、菌落形成率均显著高于DMSO组(P<0.01,或P<0.05),凋亡强度显著低于DMSO组,YAP蛋白表达显著高于DMSO组(P<0.05);E2联合Cal组和E2联合CIⅢ组中两种细胞的增殖率、细胞菌落形成率均显著低于E2组(P<0.05,或P<0.01),荧光凋亡强度显著高于E2组,YAP蛋白表达均显著高于E2组(P<0.05,或P<0.01)。结论:E2具有诱导模型细胞增殖、抵抗细胞凋亡的能力,Cal和CIⅢ可以阻断E2诱导的上述生物学效应,提示E2可能通过CANP-YAP信号通路促进肿瘤细胞的恶性生物学行为。

基于Calpain-ERK信号通路研究Calpeptin对雌激素诱导人乳腺上皮细胞MCF-10A转化及干性标志物表达的影响

目的:研究钙激活中性蛋白酶(Calpain)抑制剂Calpeptin对雌二醇(E2)诱导人乳腺上皮细胞MCF-10A转化及干性标志物表达的影响,并探讨其作用机制。方法:以人乳腺上皮细胞MCF-10A为研究对象,采用E2诱导制备转化细胞模型。将细胞分为对照组[0.1%二甲基亚砜(DMSO)]、E2转化组(50 nmol/L)、E2转化+Calpeptin组(50 nmol/L E2+1μmol/L Calpeptin),以相应含药培养基连续培养15代。然后采用MTT法检测细胞的增殖率(24、48 h),采用平板克隆试验检测细胞的克隆形成率,采用悬浮成球试验检测细胞的成球数;采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法检测细胞中干性标志物(CD44、Nanog、OCT4)和细胞外信号调节激酶(ERK)m RNA表达水平,并采用Western blotting法检测细胞中CD44、Nanog、OCT4、ERK和磷酸化ERK(p-ERK)蛋白表达水平。另取E2转化细胞分为对照组(0.1%DMSO)和U0126(ERK抑制剂)组(10μmol/L),按上述方法测定细胞的克隆形成率、成球数以及细胞中CD44、Nanog、OCT4、p-ERK蛋白表达水平,以验证ERK表达抑制与转化细胞生物学行为及干性标志物表达之间的关系。结果:与对照组比较,E2转化组细胞的增殖率(24、48 h)、克隆形成率均显著升高(P<0.01),细胞成球数均显著增加(P<0.01),细胞中CD44、Nanog、OCT4、p-ERK m RNA表达水平及CD44、Nanog、OCT4、p-ERK蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。与E2转化组比较,E2转化+Calpeptin组细胞的增殖率(24、48 h)、克隆形成率均显著降低(P<0.01),细胞成球数显著减少(P<0.05),细胞中CD44、Nanog、OCT4、ERK mRNA表达水平及CD44、Nanog、OCT4、p-ERK蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。加入ERK抑制剂U0126后,E2转化细胞的克隆形成率、成球数以及细胞中p-ERK、CD44、Nanog、OCT4蛋白表达水平均显著增加或升高(P<0.05或P<0.01)。结论:Calpeptin可抑制E2诱导的人乳腺上皮细胞MCF-10A转化及干性标志物表达,其机制可能与抑制Calpain-ERK信号通路的激活有关。

GPER抑制剂在雌激素诱导乳腺恶性转化细胞中的作用

目的:观察G蛋白偶联雌激素受体(GPER)特异性抑制剂G15对17β-雌二醇(E2)刺激转化细胞增殖能力的影响及其机制初探。方法:自制乳腺癌细胞,乳腺癌MCF-10A细胞用50 nmol/LE2连续刺激至第13代,以DMSO刺激作为对照(均标记为P13);显微镜观察细胞转化形态,将DMSO及E2处理后的P13分别接种到裸鼠皮下,接种后1周观察接种部位的成瘤情况;将自制乳腺癌细胞分为E2组和10μmol/L G15组,以MCF-7细胞作为阳性对照细胞,用平板克隆形成实验观察细胞的增殖能力。结果:镜下可见P13代MCF-10A细胞接触抑制消失、细胞胞体变大、出现克隆小球,裸鼠乳腺脂肪垫皮下成瘤(7/10),对照无瘤形成;平板克隆实验中,自制乳腺癌细胞、MCF-7细胞与各自阴性对照比较,E2刺激组的增殖加快,差异有统计学意义(P<0.05);与各自E2刺激组比较,G15抑制组增殖能力下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:GPER介导E2刺激转化细胞增殖能力增加过程。

EGF对三阴乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响及CANP-YAP通路的介导作用

目的:探讨上皮生长因子(EGF)对人三阴乳腺癌(TNBC)细胞迁移、侵袭能力的影响及CANP-YAP的介导作用。方法:以人源乳腺癌细胞系MDA-MB-231和468细胞为模型细胞,实验分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、EGF组、EGF联合钙蛋白酶抑制剂(Cal)组(EGF联合Cal)及EGF联合钙蛋白酶抑制剂Ⅲ(CIⅢ)组(EGF联合CIⅢ),采用伤口愈合实验检测细胞迁移能力、Transwell检测细胞侵袭能力及Western blot法检测YAP蛋白在细胞中的表达水平。结果:伤口愈合实验和Transwell实验结果显示,EGF组MDA-MB-231、468细胞的迁移率和侵袭率均高于PBS组(P<0.05或P<0.01),EGF联合Cal组和EGF联合CIⅢ组中MDA-MB-231、468细胞的迁移率和侵袭率均低于EGF组(P<0.05);Western blot实验结果显示,EGF组MDA-MB-231细胞和MDA-MB-468细胞中YAP蛋白表达均高于PBS组(P<0.05或P<0.01);EGF联合Cal组和EGF联合CIⅢ组中MDA-MB-231、468细胞YAP蛋白表达均低于EGF组(P<0.05或P<0.01)。结论:EGF具有诱导TNBC细胞MDA-MB-231、468细胞迁移和侵袭,Cal和CIⅢ可以阻断EGF的上述生物学效应,EGF可能通过CANP-YAP信号通路促进肿瘤细胞的恶性生物学行为。