高转移性人肺腺癌细胞株SPC-A-1BM的建立及其特性分析

目的:建立高转移性人肺腺癌细胞株SPC-A-1BM及其免疫缺陷小鼠转移动物模型。方法:将人肺腺癌细胞株SPC-A-1经免疫缺陷小鼠血道或肺原位接种后形成转移,在放射性核素示踪下找到骨转移病灶,然后切除病变骨组织进行体外培养获得转移性肺癌细胞,用这些癌细胞重复以上循环10次,获得高转移肺癌细胞。采用荧光定量PCR方法检测亲代细胞和高转移细胞的基因表达。结果:获得以骨转移为主,肺、肾上腺、淋巴结等多脏器转移的人肺腺癌转移细胞株(SPC-A-1BM)及其免疫缺陷小鼠动物模型。定量PCR检测显示SPC-A-1BM的上皮生长因子受体(EGFR/HER)家族、血管内皮生长因子(VEGF)家族和3个抗凋亡蛋白的基因较原代细胞均有不同程度的变化。结论:SPC-A-1BM是以骨转移为主的高转移性人肺腺癌细胞株,该细胞株及其转移动物模型为肺癌转移的生物学研究提供了一个良好的技术平台。

CYFRA^(21-1)、CEA、NSE三项联合测定对肺癌患者的临床研究──239例肺癌病人的回顾性分析

测定了２３９例肺癌病人（其中腺癌１２９例，鳞癌５９例，小细胞癌３５例，腺、鳞癌混合型癌１６例）和６６例其它肺疾患病人胸水和血清中骨胶素（ＣＹＦＲＡ２１－２）、癌胚抗原（ＣＥＡ）、烯醇化酶（ＮＳＥ）的浓度。结果显示：三项测定的总阳性率依次是ＣＹＦＲＥ２１－１为５１．４％， ＣＥＡ４３．５％，ＮＳＥ ４８．１％，但与病理类型相关，鳞癌以 ＣＹＦＲＡ２１－１最高为 ７６．３％，腺癌以 ＣＥＡ最高达 ５７．１％，而小细胞肺癌则以 ＮＳＥ最高达９４．３％。４９例伴有胸水患者（腺癌２７例、小细胞肺癌７ 例、其它良性肺疾患１５例）的胸水和血清三项测定结果显示腺癌病人的胸水样本ＣＹＦＲＡ２１－１和 ＣＥＡ测定均较血清样本更灵敏，而小细胞肺癌病人胸水样本的ＮＳＥ测定具有极可靠的价值。 比较三项测定对不同病理类型癌症病人的敏感性和特异性在非癌症的其它肺疾病患者中的假阳 性和假阴性，并进一步讨论三项联合测定的临床意义和必要性。

建立^(99)Tc^m标记联肼尼克酰胺多肽“显像剂”纤维膜组合文库

目的证明^(99)Tc^m 标记联肼尼克酰胺(HYNIC)多肽"显像剂"文库是^(99)Tc^m 显像剂研制中的有效方法。方法八肽组合文库采用人工点阵方式合成。HYNIC 多肽通过 C 末端以及双β丙氨酸(连接体)共价连接在纤维膜上。用阻断剂阻断非特异结合位点后,将膜文库和人重组热休克蛋白70(HSP70)温育,冲洗。用生物素-亲和素法和抗体法筛选文库。对筛选阳性多肽化合物进行再合成、^(99)Tc^m 标记(以三羟甲基甘氨酸为辅助配体)以及体内分析。将人肺癌细胞株 A549和 H460接种于雌性裸鼠胸壁皮下,用于体内研究。结果 ^(99)Tc^m 标记文库显示,"显像剂"文库的质量较好。由于天冬酰胺-亮氨酸-亮氨酸-精氨酸-亮氨酸-苏氨酸-甘氨酸多肽(NLLRLTG)对 HSP70家族蛋白具有高度特异性,因此,采用^(99)Tc^m -HYNIC-NLLRLTG 为对照组。经筛选获得的15种阳性多肽化合物中,有8种^(99)Tc^m 化合物在体内肿瘤中的分布优于对照组,其中^(99)Tc^m -HYNIC-谷氨酰胺-甘氨酸-缬氨酸-亮氨酸-苏氨酸-甘氨酸-苏氨酸-精氨酸多肽(QGVLTGTR)在体内肿瘤中的分布最佳。活性肽 NLLRLTG替代实验和肿瘤热疗研究表明,^(99)Tc^m -HYNIC-QGVLTGTR 具有 HSP70结合肽活性。结论 ^(99)Tc^m 标记HYNIC 八肽化合物"显像剂"文库的设计可能为多肽显像剂的研制提供一种模式。

CEA、CYFRA21-1和ADA在恶性胸腔积液的诊断价值

目的 研究癌胚抗原(CEA)、细胞角质蛋白19(CYFRA211)和腺苷脱氨酶(ADA)对恶性胸腔积液的诊断意义。 方法 测定58例恶性胸腔积液及26例结核性胸腔积液的CEA、CYFRA211、ADA的水平。 结果 恶性组胸水CEA、CYFRA211水平均明显高于结核组(P<0001)。恶性组胸水ADA值明显低于结核组(P<0001)。胸水CEA对诊断恶性胸腔积液的敏感性为8103%,特异性为9615%。CYFRA211的敏感性为9655%,特异性为7308%。ADA的敏感性为8750%,特异性为9642%。 结论 联合检测胸水CEA、CYFRA211、ADA的水平。

有机介质中^(99)Tc^mO_4^-非胶体还原产物的制备及其性质研究

目的研究能在肿瘤中浓聚的^(99)Tc^mO_4^- 非胶体还原产物(^(99)Tc^m-Rs)的物理化学特性和生物学表现。方法采用乙腈与 Na^(99)Tc^mO_4 洗脱液混合蒸发除去水,在各种有机溶剂中,用氯化亚锡还原 Na^(99)Tc^mO_4。对^(99)Tc^m-Rs 进行薄层层析(TLC)、纸电泳、液相分配系数、滤膜通过特性研究,对类似物非胶体还原铼(Re-Rs)做元素分析。并对 H460细胞摄取^(99)Tc^m-Rs 和^(99)Tc^m-Rs 在 SD 大鼠体内分布、在肿瘤内分布及在缺血心肌内分布进行研究。结果在乙腈中还原Na^(99)Tc^mO_4可以获得高产率的^(99)Tc^m-Rs(>90%)。^(99)Tc^m-Rs 的物理、化学性质和生物学特征与^(99)Tc^mO_4^- 不同,而且不是有机化学反应产品。^(99)Tc^m-Rs 对乏氧细胞和缺血组织有亲和作用。静脉注射^(99)Tc^m-Rs 后2和18 h,在 H460肿瘤中,肿瘤/血液放射性比值分别为3.05±0.34和8.07±1.19,肿瘤/骨骼肌放射性比值分别为10.38±1.21和20.55±2.80。缺血心肌也明显摄取^(99)Tc^m-Rs。乏氧、pH 值降低和钙离子累积浓度增加,H460细胞摄取^(99)Tc^m-Rs 随之增加,乏氧和钙离子浓度增加能提高^(99)Tc^m-Rs 对二巯丙磺酸钠的标记率。以乙腈为展开剂,硅胶 TLC 结果显示^(99)Tc^m-Rs有2种成分,Rf 值分别为1.0和0.78,后者在正常和肿瘤组织中分布与^(99)Tc^mO_4^-无差异。结论 ^(99)Tc^m-Rs 是^(99)Tc^mO_4^- 在有机溶剂中还原或歧化反应产生的无机化合物,其制备简便,是前景较好的乏氧显像剂。

一种新的用于靶向化合物研发的体内高通量筛选方法

目的建立组织靶向化合物的体内完全随机高通量筛选模型。方法以氨基酸为原料,采用固相合成法合成 C 端氨化三肽组合文库。^(99)Tc^m 标记文库的结构通量为8000,即含有8000种不同化学结构的^(99)Tc^m 标记三肽化合物。体内筛选采用定位扫描和重复模式。实验动物采用 SD 大鼠和 A549肺癌荷瘤裸鼠。通过测定每克组织百分注射剂量率(%ID/g)或显像,测定^(99)Tc^m 标记文库或单肽的组织分布。结果通过无创伤性显像或组织放射性计数测定组合文库的组织分布和代谢,实现体内完全随机高通量筛选,可用于发现、优化和设计具有组织特异性分布的(标记)化合物。这种组织靶向性分布有很高的化学结构特异性。在整个体内筛选过程中,非靶组织放射性本底同时受到监测。结论标记组合文库体内示踪技术是一种可靠、简易、灵敏的体内完全随机高通量药物筛选技术,可用于组织靶向药物(特别是放射性药物)的研究。