乙型肝炎疫苗-卡介苗联合疫苗细胞免疫的研究

目的评价乙型肝炎疫苗-卡介苗联合疫苗对小鼠细胞免疫的影响。方法采用BALB/c小鼠,试验组分为联合疫苗组、卡介苗组、乙肝疫苗组,对照组分为空白组和保护剂组,各组小鼠分别于接种后1个月及2个月,取脾进行淋巴细胞转化试验以及细胞因子和T淋巴细胞表面标记检测。结果联合疫苗组淋巴细胞转化刺激指数、IL-2含量均明显高于卡介苗组和乙肝疫苗组;CD4+/CD8+值高于单价乙肝疫苗组,而与卡介苗组差异无显著意义。结论乙型肝炎疫苗-卡介苗联合疫苗能有效地诱导细胞免疫。

有效冻存昆虫细胞的新方法

有效冻存昆虫细胞的新方法金立杰，薛伟钢，张士安（卫生部长春生物制品研究所，长春）近年来，昆虫细胞Ｓｆ９和Ｓｆ２１作为基因工程的宿主细胞，越来越多地应用于研究和生产中。昆虫细胞的有效保存成为应用中的一个重要问题。我们根据几年来的工作经验，摸索出简单有效...

乙型肝炎卡介苗联合疫苗与单价乙型肝炎疫苗免疫效果的比较

目的:比较乙型肝炎卡介苗联合疫苗与单价乙型肝炎疫苗的免疫效果。方法:实验动物采用豚鼠,按0、1、2月三针免疫程序接种,并于每针免疫后1个月采血,ELISA方法检测血清抗体滴度。实验分三部分进行。实验一:三种不同规格的联合疫苗与单价乙型肝炎疫苗的比较;实验二:同一规格连续三批联合疫苗与单价乙型肝炎疫苗的比较;实验三:联合疫苗与两种单价疫苗同时免疫的比较。结果:在三个实验中,联合疫苗组第一针血清抗体滴度均低于对照组,但无统计学差异;联合疫苗组第二、三针血清抗体滴度均高于对照组,也无统计学差异,实验组各组之间无明显差异。结论:联合疫苗组三针免疫程序的HBsAg的效力与单价乙型肝炎疫苗组相似。

重组CHO乙肝疫苗细胞培养收换液工艺改进

利用CHO细胞生产重组乙肝疫苗 ,在细胞培养收换液工艺中建立管道化生产线。采用大罐配成新鲜工作液 ,过滤除菌 ,经管道直接输入细胞培养瓶内 ;细胞培养上清的收集也经管道或直接倒入不锈钢罐内。工艺改进后 ,细胞原液收获率提高 1 5% ,配液污染率降低 1 2 % 。

重组卡介苗活疫苗的研究进展

重组卡介苗（ｒＢＣＧ）是利用ＢＣＧ活疫苗的优点和特性，借助分子生物学重组技术，将多种外源基因导入ＢＣＧＤＮＡ中，构成重组卡介菌多价活疫苗，期望实现以最少的免疫接种次数，获得抗多种疾病的持久免疫的目的。此研究进展较快，且初步研究结果已显示出ｒＢＣＧ广阔的应用前景，为新型疫苗的开发提供新途径。

IL-2重组杆状病毒载体的构建及表达

将人白细胞介素２（ＩＬ－２）ｃＤＮＡ插入苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮ－ＰＶ）的转移载体ｐＶＬ１３９２中。经限制性酶切和ＤＮＡ杂交筛选、鉴定出重组转移载体ｐＶＬ１３９２－ＩＬ２。重组载体通过在昆虫细胞内共转染将ＩＬ－２ｃＤＮＡ转移到野生型ＡｃＮＰＶＤＮＡ中。经３２Ｐ标记探针鉴定出重组病毒Ａｃ１３９２－ＩＬ２。用重组病毒感染昆虫细胞，结果表达产物有明显刺激ＣＴＬＬ细胞生长，［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入法检测ＩＬ－２活性为１５００ＩＵ／ｍ１。

乙型肝炎-卡介苗联合疫苗的研究进展

乙型肝炎疫苗和卡介苗均是我国常年生产和使用的生物制品,其安全性、有效性早已被证实。根据我国计划免疫规定,乙肝疫苗和卡介苗必须在新生儿出生后24h内接种。因诸多原因,不能简单地将现行2种疫苗混合使用,而须分2针接种。制备乙型肝炎-卡介苗联合疫苗,可以减少针次,降低副作用。动物试验显示,联合疫苗的免疫效果不低于2种单价疫苗。

重组白细胞介素2制品外源残余DNA的检测

采用ＤＮＡ杂交技术，用３２Ｐ标记的探针检测重组白细胞介素２制品的外源ＤＮＡ残余量。设三个水平：２５个剂量、１５个剂量、５个剂量。结果提示该方法是一种敏感有效的检测方法，其最小用样量为５个剂量单位。这为新制品检测方法的建立提供依据。

精神神经免疫学:神经系统和免疫系统两者之间的相互关系

精神神经免疫学是一门新兴的多边缘性学科,主要研究行为、神经、内分泌与免疫的相互关系。本文从“生物—心理—社会”这一新的医学模式角度出发,整体分析疾病发生、发展的内外因素及其相互作用,为疾病的防治提供多方面、多层次的理论和实验依据。

无血清培养基与含血清培养基培养CHO细胞的比较

目的对无血清培养基与含血清培养基培养CHO细胞进行比较。方法应用两种培养基采用小方瓶培养CHO细胞,观察细胞维持时间、培养过程的形态变化及对血凝效价的影响。结果应用无血清培养基(A)培养CHO-C28细胞虽然可维持细胞正常生长,但贴壁不好,逐渐降低(A)加量情况可得到相应改善。结论 目前无血清培养基尚不能完全取代含血清培养基用于培养CHO细胞。

ISCOMS重组乙型肝炎疫苗的研究

目的 提高CHO细胞表达的重组乙型肝炎病毒表面抗原 (HBsAg)的免疫原性。方法 采用透析法制备HBsAg免疫刺激复合物 (immunostimulatingcomplexes简称ISCOMS)。用放免法 (RIA)检测免疫小鼠的抗体滴度 ;标记胸腺嘧啶掺入法 (3H TdR)检测小鼠脾淋巴细胞转化率 ;CTLL 细胞株 XTT法检测IL 2活性。结果 经电镜观察ISCOMS颗粒呈蜂窝状 ,直径为 30～ 4 0nm左右。SDS PAGE分析 ,制备的ISCOMS颗粒HBsAg蛋白均由P2 3、GP2 7和GP30组成。用Bradfords法测定ISCOMS蛋白回收率为 4 1 5 0 %。免疫NIH小鼠结果显示ISCOMS重组乙肝疫苗和铝佐剂疫苗的ED50 分别为 10 3 2 2 5 5和 2 5 80 6 4 ;ISCOMS组的相对效力是铝佐剂组的 4倍。刺激指数 (SI)分别为 6 78± 2 32和 3 12± 0 5 4。IL 2水平分别是 10 2IU ml± 2 12IU ml和 4 95IU ml± 0 86IU ml。结论 ISCOMS重组乙型肝炎疫苗稳定性好 ,免疫原性强 ,抗体产生早 ,滴度高 ,并且能激起细胞免疫 ,有可能发展成为新一代疫苗。

HBV PreS2-MBP融合蛋白在大肠杆菌中表达条件的优化

目的优化HBV PreS2-MBP融合蛋白在大肠杆菌中的表达条件。方法通过改变重组质粒的宿主菌、培养基、诱导温度、诱导剂、诱导剂浓度、诱导时间等条件,利用SDS-PAGE和BandScan凝胶分析软件,分析以上条件改变对表达产物表达量的影响。将重组质粒连续传100代,检测融合蛋白的表达稳定性。结果重组质粒在大肠杆菌BL21菌株、GS培养基、28℃、0.5mmol/L IPTG或1.5mmol/L乳糖诱导4h时,目的蛋白的表达量最高,占菌体总蛋白的43.5%。重组质粒传代100代,融合蛋白的表达稳定。结论已确定出了融合蛋白在大肠杆菌中表达的最佳条件。

重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)免疫效果的观察

目的进一步观察重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)的免疫效果。方法选择江苏省响水县某中心小学学生及教师,经筛查HBsAg、antiHBs和antiHBc均为阴性的98名作为观察对象,使用10μg重组乙肝疫苗(CHO细胞),按0、1、6个月3针免疫程序进行免疫效果观察。结果全程免疫后1个月,85名学生中,抗HBs阳性83名,阳转率为97.65%,GMT为172.50mIU/ml,最高可达498.12mIU/ml。男性、女性的抗HBs阳转率分别为97.50%和97.78%,GMT分别为170.11和148.42mIU/ml。结论10μg重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)应用于小学生,免疫效果良好。

HBV PreS2-MBP融合蛋白质粒构建及在大肠杆菌中的表达

目的在大肠杆菌pMALP2x系统中表达HBVPreS2MBP融合蛋白,并对其进行鉴定和纯化。方法利用DNA重组技术,将全长的HBVPreS2蛋白基因克隆至原核表达载体pMALP2x中,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。表达产物经SDSPAGE和Westernblot检测,并经阴离子交换层析、AmyloseResin亲和层析纯化。结果成功构建了重组载体pMALP2x/S2,诱导蛋白为MBP标记的可溶性的PreS2MBP融合蛋白,具有良好的抗原性,可经AmyloseResin亲和层析纯化。结论pMALP2x系统可成功表达PreS2MBP融合蛋白。

HBsAg免疫刺激复合物的制备及鉴定

目的 提高CHO细胞表达的重组乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的免疫原性。方法 采用离心法和透析法制备HBsAg的免疫刺激复合物，并探讨其影响因素。结果 初步确定HBsAg的ISCOMs的最佳形成条件是：温度25℃，反应时间18h，pH6．8。电镜下观察ISCOMs呈直径为30—40nm的蜂窝状结构。SDS-PAGE分析表明，离心法和透析法制备的颗粒HBsAg蛋白均由P23、GP27和GP30组成。用Bradfords法检测离心法和透析法制备的ISCOMs的蛋白回收率分别为31．50％和41．15％，其稳定性和免疫原性均优于相应的铝佐剂疫苗。结论 HBsAg免疫刺激复合物可提高乙型肝炎表面抗原的免疫原性。