连续流动分析技术测定水中阴离子合成洗涤剂方法优化

阴离子合成洗涤剂是洗涤用品的主要成分,属于生物难降解的物质,是当前环境水污染的重要指标,具有较好的去污能力且价格低,广泛应用于餐饮界和工业的消毒,该类物质虽毒性低但降解缓慢,同时还抑制其他有毒物质的降解。为了建立基于连续流动分析检测技术的阴离子合成洗涤剂检测方法,对国家标准方法(GB/T 5750.4—2023)连续流动法中的仪器流路进行调整,将酸性亚甲基蓝流路变为碱性亚甲基蓝流路直接进样,优化亚甲基蓝体系配比,蠕动泵方向为反转且泵的转速为12 r/min,注射时间为40 s,管路清洗时间为300 s,积分时间设置为30 ms,于650 nm波长下进行测量,参比波长为490 nm,以阴离子合成洗涤剂浓度值为横坐标,峰高信号值为纵坐标,制作标准曲线,并对方法的线性范围、检出限、精密度、准确度进行验证,在0~0.35 mg/L,阴离子合成洗涤剂的标准曲线方程为y=0.1243 x-0.0012,且相关系数r值为0.9995,检出限为0.003 mg/L,添加回收率98.4%~103%,精密度在0.74%~1.8%。结果表明,方法线性关系良好,精密度和准确度高,操作简单,污染少,适用于生活饮用水中阴离子合成洗涤剂的大批量分析检测。

氧氟沙星单克隆抗体的制备及生物条形码检测技术的研究

目的制备氧氟沙星单克隆抗体,采用生物条形码技术测定氧氟沙星残留量。方法采用碳二亚胺法合成氧氟沙星完全抗原后,用免疫原免疫小鼠,将特异性强的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合。通过杂交瘤细胞的多次“筛选-亚克隆”过程,制备氧氟沙星单克隆抗体。其次,制备纳米金复合探针、磁性纳米探针,建立基于荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的生物条形码检测方法,在最优条件下采用荧光定量PCR生物条形码检测方法间接测定动物源性食品中氧氟沙星残留量。结果氧氟沙星线性回归方程为Y=14.4263logX+0.09184,r^(2)=0.96。在0.1~128.0 ng/mL范围内,检出限为1.14 ng/mL,添加回收实验结果显示,氧氟沙星平均回收率和相对标准偏差分别为85.8%~102.6%、1.8%~2.6%。结论基于荧光定量PCR生物条形码免疫分析方法检测氧氟沙星的结果可靠,能够应用于实际样品的检测,为氧氟沙星的检测技术提供新的方向。

盐酸克伦特罗多克隆抗体和量子点的偶联

为在制备盐酸克伦特罗和水溶性羧基量子点偶联物,给荧光快速检测技术的研究提供良好的依据。实验采用EDC/NHS两种偶联剂将二者共价偶联到一起,并经紫外扫描法、荧光扫描、斑点法、荧光免疫分析法对二者偶联效果进行了鉴定,结果表明,量子点和抗体偶联成功,偶联后吸收峰变宽、吸光度变大、荧光强度增加、抗体效价稍低,但不影响试验结果,可为盐酸克伦特罗药物的多残留试纸条及试剂盒的开发提供良好的参考依据。

氨苄青霉素残留检测方法研究进展

氨苄青霉素(ampicillin,Amp)是畜牧养殖过程中常用β-内酰胺类抗生素药物之一,由于其可被作为饲料添加剂使用,导致动物源性食品中氨苄青霉素残留超过最大残留允许量,因此,氨苄青霉素滥用问题已得到广泛关注。目前检测氨苄青霉素残留的方法主要包括理化检测法、微生物检测法和免疫分析法。针对氨苄青霉素及残留现状的概况,综述了氨苄青霉素残留检测方法的研究进展。

四环素胶体金免疫检测技术的研究

为研制四环素(tetracycline,TC)胶体金免疫层析试纸条,对胶体金的制备及与四环素多克隆抗体的标记进行研究。采用柠檬酸钠还原法制备胶体金,向加热沸腾的100 mL0.01%氯金酸中加入1.8 mL1%柠檬酸钠,加热15 min后冷却定容;已制备好的胶体金溶液标记四环素抗体,将装有1 mL胶体金的离心管中加入一定量K_2CO_3调节p H值,加入一定量抗体蛋白后4℃条件下反应30 min,加入100μLNa Cl后4℃条件下保存备用,标记成功后优化条件。结果表明,胶体金颜色为紫红色、清亮透明、无沉淀及漂浮物,可见光光谱峰宽较小,证明胶体金大小分布均匀,制备成功;硝酸纤维素膜(NC膜)上有明显红色斑点,可见光光谱中最大吸收峰出现偏移,证明金标抗体标记成功;胶体金标记四环素抗体的最佳p H值为7.5,最佳标记蛋白量为稀释抗体6 000倍。胶体金的制备及与四环素多克隆抗体标记的成功,为装配四环素胶体金试纸条奠定了基础,为四环素在食品样品中快速检测方法的建立提供理论参考。

盐酸克伦特罗人工抗原及抗体的制备

为了制备盐酸克伦特罗(CL)人工抗原及抗体,试验采用重氮化法将盐酸克伦特罗与经过活化的牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)分别偶联,合成免疫抗原(CL-BSA)和检测抗原(CLOVA),经紫外光谱扫描对偶联物进行鉴定;用免疫抗原免疫BALB/c小鼠制备盐酸克伦特罗多克隆抗体,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定抗体效价。结果表明:盐酸克伦特罗人工抗原合成成功,制备的鼠源多克隆抗体效价达1∶64 000,该抗体可用于下一步试验。

氯霉素人工抗原的合成及其抗体的制备

为了合成氯霉素（CAP）人工抗原并制备抗体,试验建立CAP残留的酶联免疫吸附试验（ELISA）法,采用重氮化法将半抗原CAP与牛血清白蛋白（BSA）进行偶联,制得免疫抗原,然后与卵清白蛋白（OVA）进行偶联,制得包被抗原,通过紫外光谱扫描鉴定是否偶联成功;用免疫抗原免疫KM小鼠,制备CAP多克隆抗体,并通过间接ELISA法测定抗体效价。结果表明：通过紫外光谱扫描,CAP-BSA在275 nm处为最大吸收峰,CAP-OVA在276 nm处为最大吸收峰;并且免疫KM小鼠得到的抗体效价高达1∶128 000。说明试验成功制备了CAP人工抗原,并且获得了高效价的多克隆抗体,也进一步证明了药物偶联成功。

氨苄西林人工抗原的合成及鼠源多克隆抗体的制备

为了建立氨苄西林(AMP)残留检测的免疫分析方法,试验采用碳二亚胺(EDC)法将AMP与经活化的牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)分别进行偶联,合成人工抗原AMP-BSA和AMPOVA,通过紫外光谱扫描对人工抗原进行鉴定,将AMP-BSA免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,利用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定抗体效价。结果表明:AMP与载体蛋白BSA和OVA偶联成功,并成功制备了鼠源AMP多克隆抗体,效价高达1∶64 000。

特布他林人工抗原的合成及其多克隆抗体的制备

为了建立特布他林(TBL)残留酶联免疫检测方法,试验采用碳二亚胺法将TBL与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)分别耦联,制备TBL人工抗原,经紫外光谱扫描对耦联物进行鉴定;用免疫抗原免疫小鼠制备TBL多克隆抗体,采用间接酶联免疫吸附试验测定抗体效价。结果表明:通过紫外光谱扫描鉴定,TBL-BSA和TBL-OVA存在最大吸收峰值,分别在277 nm和278 nm处;用TBL-BSA免疫Balb/c小鼠,获得的TBL多克隆抗体效价达到1∶32 000以上。说明成功制备出TBL人工抗原,并获得高灵敏度和特异性的TBL多克隆抗体,证明药物耦联成功。