抑制钠氢交换蛋白下调IL-8表达和促进p38磷酸化

我们前期的研究证明,抑制钠氢交换蛋白1(NHE1)可以减少VEGF表达从而抑制K562细胞诱导的血管生成。本研究探讨抑制NHE1后其他可能的血管生成因子变化及相关机制。用NHE1特异性抑制剂卡立泊来德10μmol/L处理K562细胞;蛋白芯片筛选NHE1抑制后血管生成因子的表达变化,实时定量PCR验证卡立泊来德处理后白介素-8(IL-8)的表达水平;构建K562稳定干扰NHE1细胞株,实时定量PCR验证干扰NHE1后IL-8的表达变化,Western blot检测卡立泊来德处理后细胞内p38磷酸化水平;p38抑制剂SB203580处理K562细胞,实时定量检测IL-8表达变化。蛋白芯片筛选结果显示,卡立泊来德处理后K562细胞中IL-8表达显著下调;实时定量结果进一步验证了这种抑制效应;卡立泊来德处理后p38磷酸化水平显著上调;卡立泊来德处理后加入SB203580抑制p38,IL-8表达可以部分恢复。结论:抑制NHE1可能通过促进p38磷酸化,下调促血管生成因子IL-8的表达。

急性脑梗死与IL-17、IL-10的关系研究

目的:探讨急性脑梗死患者血浆中白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-10(IL-10)的含量变化与急性脑梗死的关系。方法:31名急性缺血性脑卒中患者为患者组(感染组与非感染组),同期15名体检健康者为对照组,对两组成员进行神经功能缺损程度评分,采用酶联免疫吸附法检测患者组发病后第1、第3及第7天及对照者外周血血浆中IL-17、IL-10的浓度。结果:与对照组相比,患者组血浆中IL-17水平在梗死后第1、第3及第7天时均明显升高(P<0.05),且在第3天达峰值;患者组血浆中IL-10水平在脑梗死后第1天无明显变化,第3及第7天时高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);脑梗后第3及第7天,患者组血浆中IL-17、IL-10水平随神经功能损害程度加重而升高,IL-10与IL-17呈正相关(r=0.463,P=0.00);感染组血浆中IL-10在第1、第3及第7天均高于非感染组,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:IL-17、IL-10在急性脑梗死时均升高,其变化有可能与脑梗死后脑组织损伤的程度以及脑梗死后炎症反应的强度有关系,IL-17升高与IL-10呈正相关。

Cariporide对宫颈癌HeLa细胞体外转移及MT1-MMP表达的影响

目的:通过体外实验研究钠氢交换蛋白1(NHE1)特异性抑制剂Cariporide对人宫颈癌HeLa细胞体外转移能力的影响,并初步探讨其作用机制。方法:用Cariporide处理HeLa细胞,采用细胞-基质粘附实验、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测Cariporide对HeLa细胞的粘附、迁移和侵袭能力的影响:Real-time RT-PCR、Western blot法分别检测Cariporide对HeLa细胞膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)mRNA及蛋白表达的影响结果:细胞-基质粘附实验结果显示,与对照组相比,Cariporide处理过的HeLa细胞体外粘附率降低25%,差异具有统计学意义(P<0.05);细胞划痕实验和Transwell侵袭实验结果显示,Cariporide处理后,HeLa细胞损伤愈合的速度和穿过滤膜的细胞数量均明显少于对照组;Real-time RT-PCR及Western blot结果表明Cariporide可显著降低MT1-MMPmRNA和蛋白水平的表达量(P均<0.05)。结论:Catiporide可有效抑制人宫颈癌HeLa细胞的体外转移能力,其作用机制可能与降低MT1-MMP的表达有关。

CD44单克隆抗体A3D8通过抑制ERK1/2上调Bim诱导HL-60细胞早期凋亡

CD44单克隆抗体A3D8可抑制急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞的增殖抑制,并诱导其早期凋亡。本研究探讨在此过程中ERK以及BCL-2家族成员的作用机制,为治疗白血病提供新方法和新的药物靶点。用MTT法检测A3D8对HL-60细胞的增殖抑制效应,用流式细胞术检测A3D8对HL-60细胞线粒体膜电位的变化,用实时定量PCR技术检测BIMmRNA表达的变化;用Western blot检测A3D8处理后磷酸化ERK-1/2的表达变化。结果表明:A3D8能显著抑制HL-60细胞的增殖,抑制效率呈现剂量和时间的量效关系,并可进一步诱导HL-60细胞的早期凋亡,而BCL-2家族成员Bim的表达水平也随时间和浓度的变化而改变,磷酸化ERK-1/2的表达水平明显降低。结论 :CD44单克隆抗体A3D8可通过降低磷酸化ERK-1/2的表达来调节Bim,从而诱导HL-60细胞的增殖抑制和早期凋亡。

氯化锂抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭的机制研究

目的:探讨LiCl对乳腺癌细胞系MDA-MB-231侵袭能力的影响,及其对侵袭关键因子NGAL表达的调控。方法:LiCI处理后,MTT测定细胞活力,光镜观察细胞伪足形成;Transwell观察细胞侵袭能力的变化;实时定量PCR及Western blotting观察NGAL在转录和翻译水平的表达;使用小分子药物Bay117082(NF-KB通路抑制剂)和FH535(Wnt/β-catenin通路抑制剂)处理细胞,检测关键通路对NGAL表达的调控。结果:在浓度低于10mmol/L时,LiCl对细胞活性的影响无显著性差异。5mmol/L或10mmol/LLiCl处理细胞24 h后,细胞形态发生明显改变,其伪足形成受到影响,但在NHEl抑制剂Cariporide作用下,细胞伪足破坏的情况有所减轻;Transwell结果显示5、10mmol/L LiCl分别处理细胞24 h后,细胞的侵袭能力受到明显抑制。实时定量PCR和Western blotting结果显示,LiCl处理后NGALmRNA和蛋白表达均明显下降,表明LiCl对NGAL的调控可能始于转录水平。小分子药物处理分别使Wnt/β-catenin和NF-kB信号通路抑制后,NGAL的表达均受到明显抑制,表明这两条通路都参与了NGAL表达的调控。结论:LiCl通过抑制NF-kB调控NGAL的表达,抑制伪足形成以及细胞侵袭。

缺血性脑卒中患者急性期外周血中NKT细胞比例变化的意义

目的探讨在缺血性脑卒中患者急性期外周血中NKT细胞占淋巴细胞比例的动态变化趋势,在卒中后免疫抑制过程、感染并发症方面的作用。方法选择40例缺血性脑卒中急性期患者,其中感染组6例,非感染组34例,另外选择无缺血性脑卒中健康查体者20人(对照组)。采用流式细胞术检测外周血中NKT细胞在发病后第1天、第3天、第7天占淋巴细胞比例(后均简称比例)的动态变化趋势。结果与对照组比较,卒中组的NKT细胞比例在发病第1天、第3天、第7天显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,感染组的NKT细胞比例在发病第1天、第3天、第7天显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论缺血性脑卒中发病后第1天出现外周血中NKT细胞比例的降低,这种变化持续1周,其细胞比例在发病后1周内动态改变不明显。外周血中的这两种细胞比例与卒中后感染的发生无明显相关性。

抑制钠氢交换蛋白1促进低氧诱导的K562细胞分化

本研究主要探讨低氧微环境对慢性髓系白血病细胞系K562分化的影响及钠氢交换蛋白1(NHE1)在该过程中的作用。利用低氧模拟物CoCl2或于低氧(2%O2、5%CO2和93%N2)环境中培养K562细胞,应用激光共聚焦显微镜测定细胞内pH值(intracellular pH,pHi),瑞氏染色观察细胞形态,实时定量RT-PCR检测基因表达,Western blot技术检测MAPK磷酸化水平的改变。结果表明:与对照组相比,低氧培养的K562细胞表现出成熟相关的形态学改变,并伴随CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBPα)的mRNA水平上调;特异性NHE1抑制剂Cariporide预处理能够促进低氧诱导的K562细胞分化,Cariporide处理后K562细胞的P38和ERK5蛋白激酶磷酸化水平显著增强。结论 :低氧及低氧模拟物能够诱导K562细胞系分化,抑制NHE1活性协同促进低氧诱导的K562细胞分化,其机制可能是通过增强细胞内MAPK蛋白激酶磷酸化水平促进分化。

门急诊输液护理过程中的常见问题及防范对策的相关分析

对门急诊输液护理中常见问题以及相关防范对策展开研究。方法 将我院在2019年4月到2022年4月期间收治的80例门急诊输液患者作为研究对象,按照不同的护理方法进行分组,其中有40例接受一般性护理干预,入组对照组,其余40例患者接受的是我院结合常见门急诊护理问题优化过的综合性护理干预,入组观察组,结合两组护理干预结果对综合性护理干预的应用效果进行验证,并对门急诊输液护理常见问题与相应的防范对策进行总结。结果 对比发现观察组穿刺不良事件与输液风险事件更少,患者护理满意度更高,患者不良情绪与穿刺疼痛评分更低,对比差异显著。(P<0.05)结论 反复穿刺、穿刺感染、护患关系差等是门急诊输液护理中最常见的问题,为提高患者护理满意度,减少不良门急诊输液护理事件,我院今后将优先采用观察组所用的护理方案对护理问题进行防范,另外,本院也会不断结合新的护理问题对综合性输液护理方案进一步进行完善。

CIAPIN1基因在白血病患者骨髓单个核细胞中表达的研究

本研究旨在检测CIAPIN1基因在白血病患者中的表达,探讨其在白血病中的作用。收集112例初治白血病患者的新鲜骨髓,用TRIzoL一步法提取细胞总RNA、合成cDNA、以β-actin为内参,应用实时定量PCR方法检测CIAPIN1mRNA的表达;实验中选择10例正常人的骨髓作为对照。结果表明:骨髓单个核细胞(MNC)中CIAPIN1mRNA在急性髓系白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)和慢性髓系白血病(CML)患者中的表达均高于正常人(p<0.05);在慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者中的表达与正常人相比差异无统计学意义(p>0.05)。结论 :CIAPIN1基因在初治白血病患者MNC中表达升高,其表达上调在白血病的发病中可能有一定的作用。

细胞内酸化逆转HL-60、MSC和脐血CD34＋细胞耐药的研究

本研究主要探讨细胞酸化对罗丹明123(rhodamine Rh123)在不表达或低表达MDR1且分化程度较低的细胞中累积的影响,为抗白血病细胞多药耐药(multidrug resistance,MDR)寻找胞内酸化逆转的新方法。采用实时定量PCR技术检测MDR1基因在mRNA水平的表达;利用高钾缓冲液对细胞进行酸化,应用激光共聚焦显微镜测定HL-60、MSC及CD34+脐血细胞pHi值;采用MTT法观察细胞酸化对细胞活力的影响;应用流式细胞术检测细胞酸化对HL-60、MSC及脐血CD34+细胞内Rh123累积的影响。结果表明:细胞酸化3小时对HL-60、MSC及脐血CD34+细胞的活力无明显影响,细胞酸化能明显改变细胞对Rh123的累积;此外,细胞分化程度越低,其细胞内Rh123的累积越少。结论 :细胞酸化能逆转HL-60、MSC和脐血CD34+细胞的耐药。

同源重组细胞基因敲除与siRNA基因沉默的效果比较

本研究比较细胞系同源重组基因敲除(gene knockout)与siRNA基因沉默(gene silence)二种技术方法用于研究蛋白功能方面的效果差异。对鸡B淋巴细胞瘤来源的DT40细胞系,应用基因打靶技术分离出Sam68基因缺失的细胞株,并且利用稳定表达siRNA的质粒pSilencer-Sam68得到Sam68基因沉默的细胞株。与野生型细胞株相比,对这些细胞株进行Sam68的功能解析。结果表明:Sam68基因缺失细胞表现出明显的生长速度迟缓,通过细胞周期检测揭示这些细胞生长速度延迟是由于细胞周期中的G2/M期延长;但在Sam68基因沉默细胞中却没有看到这些变化。结论:针对活细胞中的蛋白功能研究,应用细胞系基因敲除技术比siRNA基因沉默技术能够得到更加清晰的实验结果。

DNA损伤时钠氢交换蛋白1在K562和HL-60细胞中的表达和对细胞凋亡的影响

本研究主要探讨在依托泊苷引起的DNA损伤下,BCR-ABL阳性细胞系K562中钠氢交换蛋白-1(NHE1)的表达变化情况,并初步探讨其在何种水平被调控。采用实时定量PCR技术检测NHE1在mRNA水平的表达;Western blot检测依托泊苷对细胞NHE1在蛋白水平的影响;流式细胞术测定细胞凋亡情况;构建NHE1启动子区荧光素酶报告载体,并测定不同依托泊苷浓度作用下的荧光素酶活性。结果表明:DNA损伤引起HL-60细胞NHE1在mRNA和蛋白水平升高(p<0.05),在K562细胞中未发现明显变化(p>0.05);依托泊苷对HL-60细胞有明显的促凋亡作用,阻止细胞内pH值的升高可以降低依托泊苷的促凋亡作用,依托泊苷对K562细胞凋亡率无明显影响;K562细胞在DNA损伤时,NHE1启动子区构建的荧光素酶表达载体活性升高。结论:依托泊苷造成的DNA损伤,促进HL-60细胞凋亡,并且依赖pHi的改变;在K562细胞中NHE1表达没有改变,但其转录活性升高。

CD8＋T细胞耗竭的细胞及分子机制研究进展

在慢性炎性反应及肿瘤进展过程中，T细胞持续暴露于炎性因子及抗原中，导致T细胞功能退化，即T细胞耗竭。功能耗竭的T细胞其效应功能受损，表达大量抑制性受体，且转录调控机制也发生显著改变。T细胞耗竭会影响机体对持续感染及肿瘤的有效控制，而逆转耗竭T细胞的功能有助于恢复机体正常的免疫效应。现以CD8＋ T细胞为代表，总结CD8＋ T细胞耗竭相关细胞及分子机制研究进展，以及相关抗感染及肿瘤的新的治疗策略。

循环内皮祖细胞在老年人缺血性脑血管病不良事件中的影响

目的探讨循环内皮祖细胞（EPCs）在预测老年人缺血性脑血管病预后及死亡率中的价值。方法选择2010年至2012年在天津医科大学总医院保健医疗部门诊统一查体且有缺血性脑血管病史100例作为研究对象，收集患者年龄、性别、血压、血糖、血脂、既往史、治疗药物等一般资料，对其外周血进行流式细胞分析，以CD34^＋／CD133^＋的阳性细胞作为EPCs标记，检测EPCs数量。根据EPCs数目水平分成低、高两组，随访18个月，观察研究对象心脑血管疾病等相关事件的发生。结果两组人群间年龄、性别、血压、血脂、疾病史、危险因素、治疗史等比较差异均无统计学意义（P〉0．05）；低水平EPCs组较高水平EPCs组第1次住院事件及脑血管病事件明显增多（P〈0．05）；而两组之间发生的心血管病事件、心肌梗死事件、脑血管病引起的死亡事件、心血管病引起的死亡事件、其他原因引起的死亡事件差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论循环内皮祖细胞水平可作为老年缺血性脑血管病事件的预测指标，可帮助患者对缺血性脑血管病的发生进行早期预防及早期干预。

中枢神经系统自身免疫性疾病相关抗体检测专家共识2022

中枢神经系统自身免疫性疾病是以自身免疫细胞、自身抗体及其他免疫分子直接或间接攻击神经系统(包括神经元、胶质细胞、髓鞘)为主要致病机制的自身免疫性疾病。这一类疾病的早期鉴别诊断、疾病进展监测以及疗效预后评估等很大程度上依赖于实验室辅助检查。而国内中枢神经系统自身抗体检测方法学的选择和判读依据尚缺乏适合的标准或指导性规范,迫切需要规范实验室诊断以更好地指导临床实践。为此,中华医学会神经病学分会神经免疫学组基于国内外抗体检测技术进展和临床诊断需求,并在充分征求学组专家意见的基础上形成了“中枢神经系统自身免疫性疾病相关抗体检测专家共识2022”。本共识总结常见的中枢神经系统自身免疫性疾病(以中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病和自身免疫性脑炎为例)实验室辅助检查的原理和传统检测方法,对如何选择实验检查项目以及解读实验室检查的结果给出指导性建议。

细胞酸化对P糖蛋白高表达耐药白血病细胞的影响

目的探讨细胞酸化对患者原代白血病细胞P糖蛋白（P—glycoprotein，P—gp）和mdrl表达的影响，为逆转白血病多药耐药（MDR）提供新方法。方法采用实时定量RT—PCR技术检测mdrl mRNA表达水平的变化，筛选出P—gp高表达的患者白血病细胞。应用钠氢离子交换蛋白1特异性抑制剂Cariporide和高钾缓冲液对细胞进行酸化，采用MTT法观察细胞酸化对细胞活力的影响。应用激光共聚焦显微镜测定细胞内pH值（Intracellular pH，pHi）及细胞酸化对细胞内阿霉素累积的影响，应用流式细胞术检测细胞酸化对细胞中P—gp功能的影响，采用Western blot检测细胞酸化对细胞P—gp表达水平的影响。结果患者细胞pHi降低到7．0，酸化1h后mdrl mRNA表达量分别降至对照组的0．532±0．110，酸化3h后降至对照组的0．166±0．070；酸化3h后P—gp的蛋白水平降至对照组的0．560±0．090；细胞pHi 7．01h后细胞内罗丹明123（Rhodaminel 123，Rh123）累积由对照组的20．07±0．39明显增加至71．03±0．47，激光共聚焦显微镜观察结果也证实酸化增加细胞内阿霉素累积。结论细胞内酸化能够抑制患者细胞P—gp表达和功能。