基因差异表达的研究方法

基因差异表达的研究方法△潘美辉金虎林袁建刚强伯勤（中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室，北京，１００００５）ＡｂｓｔｒａｃｔＤｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｓｃｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅ...

cDNA3′端代表差异显示分析

根据真核ｍＲＮＡ３′端一般含Ｐｏｌｙ（Ａ）的原理，可使用共同引物将不同的ｍＲＮＡ反转录成ｃＤＮＡ，然后设计特殊引物进行反转录ＰＣＲ，或者将限制性酶切与反转录ＰＣＲ偶联使用，均可获得对应于ｍＲＮＡ３′端的ｃＤＮＡ３′端代表扩增子。比较不同条件下的ｃＤ－ＮＡ３′端代表扩增子，可以获得两种或多种细胞中ｍＲＮＡ的表达差异谱，并分离。

改进开放性前列腺切除术的几点体会

１９９５年４月～１９９８年２月，用改进的方法为７３例前列腺增生症和２例前列腺癌患者作了前列腺切除术．虽然患者年龄高（４８～８４岁，平均６９岁）、多病，但由于改进的方法缩短了手术时间、减少了术中和术后出血、减少了术后感染，７５例中仅１例切口血肿，其余均一期愈合，术后排尿通畅．

双J输尿管支架管182例应用体会

我科近８年间，给１８２例病例使用了双Ｊ导管．其中，手术中置管１７７例，经膀胱镜输尿管扩张后逆行置管６例；其中１次完成两侧尿路手术７例；２种手术３８例；双侧置管２０例．双Ｊ导管的应用简化了手术，提高了手术安全性，简便了术后护理工作，减少了感染机会．

γ射线诱发鼠骨髓干细胞染色体不稳定性传递及时相分析

１３７Ｃｓ－γ射线可以诱发鼠骨髓干细胞染色体不稳定性的延迟表达。结果显示１）鼠骨髓细胞经γ射线照射后，体外培养１４ｄ，在其ＣＦＵ－Ａ中仍有不稳定性染色体畸变出现。２）Ａ４细胞经γ射线照射后，其染色体不稳定性畸变的延迟表达可持续３０ｄ以上，并有一定的剂量－效应关系，多数时间点具有统计学意义。３）γ射线照射ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，染色体不稳定性的体内传递可持续３０ｄ以上，并在第３０ｄ时出现染色体畸变频率的异常升高。染色体不稳定性延迟表达的结果，一方面可能使细胞死亡，另一方面可能使细胞的基因不稳定性遗传下来，并最终导致细胞的癌变。

脊椎动物中枢神经系统发育相关基因的级联调控

脊椎动物的中枢神经系统是一系列在组成上高度复杂的细胞构成的。它的形成经历了一个极其复杂的发育分化过程。这一过程受到了多种基因的级联调控（ＣａｓｃａｄｅＲｅｇｕｌａｔｉｏｎ）。参与这一级联调控网络的基因不仅包括了同源盒基因等编码转录因子的基因，其它一...

ISOLATION AND IDENTIFICATION OF cDNA FRAGMENTS AND FULL-LENGTH cDNA DIFFERENTIALLY EXPRESSED IN HUMAN GLIOBLASTOMA CELL LINE BT-325 VERSUS ALL-TRANS RETINOIC ACID INDUCTION

Objective.To investigate the differentiation process of the human glioblastoma cells. Methods.Differential display reverse transcribed-PCR(DDRT-PCR) was used to isolate the genes differentially expressed in control and all-trans retinoic acid treated human glioblastoma cell line BT-325.Routine method of cDNA library screening was performed to clone full-length cDNA. Results.Thirty-six RT-PCR reactions were performed and 64 differentially expressed fragments were recovered,amplified and cloned.Of them,46 ESTs were sequenced and delivered into the GenBank.The homology comparison using BLAST algorithm revealed that 22ESTs are highly homologous with the known genes and many of them play important roles in the cell differentiation progress.A dot-blot hybridization was conducted to certify the differentiation expression.The result showed that 27 EST clones are expressed at different level in control and all-trans retinoic acid treated BT-325 cells.A full-length cDNA was cloned using the EST-HGBB098. Conclusion.DDRT-PCR was a simple and effective method to serially analyze the differentially expressed genes.

丁酸钠对人脑多型性胶质母细胞瘤细胞系BT-325的诱导分化

目的 研究丁酸钠体外诱导人脑多型性胶质母细胞瘤细胞系 BT-325细胞的分化。方法 以 1mmol/L丁酸钠处理 BT-325细胞 ,测定细胞生长曲线 ,流式细胞术分析细胞周期， Western blot分析 BT-325中 GFAP的表达变化 ,鉴定细胞的分化状态。结果 BT-325细胞经丁酸钠诱导 6～ 8 d后，出现明显的分化特征：胞体显著增大，贴壁明显，细胞伸出多个突起，与相邻的细胞接触，且有接触抑制现象；细胞生长显著受抑 ,80％的细胞被阻断在 G1和 S期；胶质纤维酸性蛋白的含量明显增加。结论 经 1mmol/L丁酸钠处理后 ,人脑多型性胶质母细胞瘤细胞系 BT-325细胞发生一定程度的分化。

不同性质辐射诱发DNA损伤的模型

描述了一种评估不同性质的辐射诱发不同DNA损伤的理论模型。模型没有严格区分直接与间接效应而是协同考虑的。计算出的初始双链断裂(DSB)产额与测量结果相一致。也研究了其它DNA多种与单一损伤。当辐射发生质的改变时,损伤的数量与质量都会发生改变。低LET辐射时,损伤中的多种损伤比例约为30％,随着电离密度的增加而大幅度上升。

人血痕α、β凝集素检出法的实验探讨

本文对人血痕α、β凝集素的检出方法及不同条件下的检出效果进行了实验探讨。结果证明,改进后的方法所用器材简单,操作方便,具有较高的实用价值。

金宁一 半辈子与“病毒”同行

冬季凛冽的寒风被挡在窗外，阳光暖暖地照进房间里。敦厚睿智的学者——这是年届花甲的金院士给我的第一印象。

人脑胶质细胞瘤分化相关基因GDR1全长cDNA的克隆和鉴定

人脑胶质细胞瘤是严重危害人类健康的一类恶性肿瘤．选用在ＤＤＲＴ－ＰＣＲ研究中获得的１９个代表新基因的ＥＳＴ之一设计筛库引物，在人ｃＤＮＡ文库中筛出一长度为 １５３５ ｂｐ的ｃＤＮＡ克隆，其开放读码框编码３３４个氨基酸，与已知蛋白无明显同源性，属一新发现的基因，ＧｅｎＢａｎｋ接受号为ＡＦ０６８１９５．ＲＴ－ＰＣＲ显示该基因产物在分化后的ＢＴ－３２５中的表达量明显高于分化前的细胞，暗示该蛋白可能与脑胶质细胞瘤分化有关，命名为 ＧＤＲ１（Ｇｌｉｏｍａｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｌ）。