7个shRNA分子对绵羊BMPR-1B基因的干扰作用分析

为获得有效干扰绵羊BMPR-1B基因的shRNA干扰分子,从绵羊卵巢组织中扩增了1 515 bp BMPR-1B基因全长编码区cDNA序列,添加HA标签序列后,插入Plex-mcs慢病毒质粒,构建Plex-BMPR-1B慢病毒表达载体,转染HEK293细胞,并与2个包装质粒共转染293T细胞进行病毒包装,用获得的重组慢病毒感染HEK293细胞;同时,将7个干扰分子与Pll-LentiLox 3.7载体重组,并与3个包装质粒共转染293T细胞进行病毒包装,获得干扰分子的重组病毒颗粒。最后用干扰分子重组的病毒颗粒感染整合Plex-BMPR-1B的HEK293细胞,进行qRT-PCR和Western blot检测。结果显示:重组BMPR-1B蛋白质在稳定整合Plex-BMPR-1B的HEK293细胞系中获得了表达;研究中设计的7个shRNA分子能抑制绵羊BMPR-1B基因表达水平68.30%～99.86%,其中PLL-BMPR-1B-1306和PLL-BMPR-1B-1475干扰分子的干扰效果最好。

PDE3与亮甲酚蓝在绵羊卵母细胞体外培养中的应用研究

[目的]探讨磷酸二酯酶3(PDE3)特异性抑制剂Milrinone与亮甲酚蓝染色液(BCB)相结合在绵羊卵母细胞体外培养中的应用。[方法]比较了BCB对绵羊卵母细胞的筛选与传统的形态分级之间的差异,以及对胚胎后期发育的影响;研究了Milrinone对绵羊卵母细胞的最佳抑制时间,并用于BCB-卵母细胞体外培养。[结果]A、B级卵母细胞中BCB+卵母细胞的比例为64.42%,极显著高于C级卵母细胞的17.00%;BCB+卵母细胞的成熟率(86.16%)、卵裂率(85.29%)、囊胚率(34.40%)分别极显著高于BCB-卵母细胞(50.94%、36.19%和6.73%);6 h是Milrinone对绵羊卵母细胞的最佳抑制时间,该试验组体外培养效率显著高于其他组;Milrinone对BCB-卵母细胞抑制培养6 h,极显著提高了体外胚胎发育率。[结论]为提高绵羊卵母细胞体外培养效率提供了依据。

绵羊类胚胎干细胞长期培养中增殖、凋亡、多能性相关基因的表达动力学

已报道的家畜类胚胎干细胞(embryonic stem-like cell,ESC-like)均无法实现长期培养,这制约了家畜ESC的研究.通过检测本实验室建系的绵羊类胚胎干细胞oESC-like,探究导致oESC-like无法持续培养的原因,为以后的研究打下基础.实验观察了oESC-like形态变化,检测了AKP的表达,使用免疫荧光技术检测了PCNA、Bcl-2、Bax、Sox-2、Oct-4蛋白的表达,并用软件Image-Pro Plus6.0计算蛋白表达水平.结果显示,oESC-like在长期培养过程中其形态具备ESC的典型形态特征;AKP持续表达;Sox-2和Oct-4的表达有不同程度的提高,增殖能力无明显变化;Bax表达水平逐代提高,Bcl-2的表达水平在5、10代显著高于Bax的表达水平可抑制Bax的活化,而从15代开始Bcl-2表达水平下降,低于Bax的表达水平,不能有效地抑制Bax的活化;Bcl-2/Bax表达水平的比值逐代下降,说明oESC-like在长期培养过程中逐渐走向凋亡.为解决绵羊类胚胎干细胞能够体外长期培养的科学问题,针对本实验室已有研究成果和存在的问题,进行逆向思维找出突破口,为遗传育种、基因工程、医疗等方面在实践上提供理论基础.

诱导幼龄绵羊卵泡发育的研究

为了稳定并提高幼龄绵羊卵泡的发育效率。本研究从激素处理方案、激素生产厂家、羔羊日龄、重复处理周期等4个方面进行了研究。结果表明:国产FSH剂量在60、120、180IU之间差异显著(P<0.05);国产FSH和加拿大生产的FSH对幼羔卵泡发育没有影响;5～9周龄羔羊的卵泡数和卵母细胞数显著高于4周龄和11周龄的羔羊(P<0.05);4～7周龄羔羊首次处理后间隔15～30天再次处理的卵泡数和卵母细胞数都没有差异(P>0.05),2次重复处理总卵泡数和卵母细胞数间也没有差异(P>0.05)。

探讨心血管内科护理中风险管理的应用效果

目的:对比研究心血管内科护理风险管理与无风险管理常规护理之间的差异,并提出相应的应对措施。方法:选取我院300例自2014年1月至2015年2月收治的心血管内科患者,分为观察组和对照组各150例。对观察组患者的护理进行护理风险管理,对照组患者给予常规护理,对比两组患者的护理效果及对护理的满意度。结果:在此次研究实验中,观察组患者的护理疗效合格率(96.67%)和患者对护理的满意度(98.67%)明显优于对照组患者的护理疗效合格率(89.33%)和患者对护理的满意度(87.33%),对比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:护理风险管理可以促进护理人员提高护理质量,提高患者的临床疗效十分具有临床推广价值。

PDE3与亮甲酚蓝在绵羊卵母细胞体外培养中的应用研究(英文)

[目的]探讨磷酸二酯酶3(PDE3)特异性抑制剂Milrinone与亮甲酚蓝染色液(BCB)相结合在绵羊卵母细胞体外培养中的应用。[方法]比较了BCB对绵羊卵母细胞的筛选与传统的形态分级之间的差异,以及对胚胎后期发育的影响;研究了Milrinone对绵羊卵母细胞的最佳抑制时间,并用于BCB-卵母细胞体外培养。[结果]A、B级卵母细胞中BCB+卵母细胞的比例为64.42%,极显著高于C级卵母细胞的17.00%; BCB+卵母细胞的成熟率(86.16%)、卵裂率(85.29%)、囊胚率(34.40%)分别极显著高于BCB-卵母细胞(50.94%、36.19%和6.73%);6 h是Milrinone对绵羊卵母细胞的最佳抑制时间,该试验组体外培养效率显著高于其他组;Milrinone对BCB-卵母细胞抑制培养6 h,极显著提高了体外胚胎发育率。[结论]为提高绵羊卵母细胞体外培养效率提供了依据。

bFGF浓度对oESC-like增值、凋亡、多能性相关基因表达的影响

使用免疫荧光技术检测与增值、凋亡、多能性相关基因的表达水平。提高bFGF浓度可增强PCNA、Oct-4、Sox-2、Bax和Bcl-2的表达,同时使Bcl-2/Bax比值维持较稳定水平。结果表明提高bFGF浓度可增强oESC-like的增值能力和多能性,增强其抗凋亡能力以适应长期培养。

添加不同因子对绵羊类胚胎干细胞多能性的影响

为筛选出更有利于维持绵羊类胚胎干细胞(oESC-like cell)多能性的因子,在基础培养基N2B27/CH中,分别添加PD、PD+hLIF、PD+BPM4、PD+hLIF+BMP4,通过比较分析,初步筛选出了比本实验室原培养体系(N2B27/CH+bFGF)更利于维持oESC-like多能性的培养基添加因子。结果显示:基础培养基中添加PD、PD+hLIF后细胞生长较好,细胞之间的结合更加致密;各种培养基培养物都表达AKP与Sox2、Oct4免疫荧光蛋白等oESC-like多能性标志;4种不同培养基与bFGF相比,细胞的生长速度减慢;在基础培养基N2B27/CH中添加PD和PD+hLIF使多能性候选基因Lin28与c-Myc表达量极显著升高(P<0.01),Nestin的表达量极显著下调(P<0.01),加入PD+hLIF使Oct4表达量极显著上调(P<0.01)。因此,在oESC-like基础培养液N2B27/CH的基础上,添加PD或PD+hLIF更有利于oESC-like细胞多能性维持。

探讨护士分层护理管理在护理管理工作中的应用

目的探究在护理管理工作中,护士分层管理模式的应用效果。方法选取100例护理工作人员作为实验对象,随机分为实验组和对照组,再选取200例患者,平均分成8组,每组25例,实验组和对照组各选择四组患者共100例进行护理。对照组采用传统护理管理的方法,而实验组则采用了护士分层护理管理方法,除确保基本的、专科的护理以及心理护理落实到位,还对每日的工作量、护理内容、护理质量以及病患的满意程度进行调查统计。将两组的调查数据进行比较。结果实验组各方面的满意程度方面均明显好于对照组,比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论护士分层管理方法可以使得护理工作更能贴近患者的需求,对于减少医患纠纷起到了积极的作用。

水稻秧棚温度GSM无线数据采集系统

为了避免水稻秧棚温度过高烧坏秧苗,研制了水稻秧棚温度GSM无线数据采集系统,本系统终端由铂电阻温度传感器,单片计算机数据采集器、以西门子芯片为核心的GSM短信模块等组成,监控中心由GSM短信模块和微型计算机等组成,使用VB6.0语言进行水稻秧棚温度监控程序设计,经田间试验,监控系统使用效果良好。

关于我市农村信息化建设的思考

"统筹城乡发展"、实现"城乡一体化"、"破除城乡二元结构",是十七届三中全会中反复提到的关键词。这充分体现了我们党对科学发展观认识和实践的进一步深化,也预示着工农业关系、城乡关系调整将进入一个全新的阶段。而农村信息化是建设社会主义新农村的重要的技术手段,有利于推进农村的物质文明、精神文明、政治文明和生态文明建设。从信息化对促进城乡一体化的重要意义入手,着眼于我市农业和农村信息化建设现状,提出了农村信息化建设的努力方向。以信息化推进现代农业发展,提升农村公共服务和社会管理水平,从而进一步推动城乡一体化进程。

企业信息化中的安全策略

企业信息化也是企业管理创新的过程。无论是生产过程控制的信息化、企业管理的信息化还是供应链管理的信息化,都必须要有一套合理、完善的安全策略做保证。要从通畅接入、防毒防攻击、可管可控、系统安全等方面来有效地配备网络结构和购置设备,同时健全相应的网络管理制度,这些都是企业信息化健康发展的重要基础。

用单片机实现室内照明智能控制系统的设计构想

目前在各办公楼、写字间以及学校教学楼、图书馆等公共场所中，由于使用人群不固定，往往存在使用完后忽略关灯的现象，这样就造成了不必要的能源浪费和经济损失。另外，各种照明灯具都具有一定的使用时限，在光线充足的情况下仍继续使用，必然会缩短灯具的使用寿命。为解决上述问题，设计了一个基于单片机的室内灯光实时智能控制管理系统。设计中采用光电、红外复合传感器和单片机技术，设计了传感器接口电路、MD转换电路、灯光控制电路、LCD显示电路，实现对室内光线的实时监控和室内人数的自动统计，由AT89C51单片机控制室内灯的开关状态，采用汇编语言设计A／D转换和LCD显示等相关软件，进而实现对室内灯光进行实时控制，以达到方便而又节约能源的目的。

泵送楼盖混凝土与防裂缝措施

因混凝土在受力、变形作用下,引起的水化热、温差、塑性收缩,干燥性收缩的裂缝是很复杂并对结构安全、耐久性影响是很大的问题。作者在多年的施工实践和大量的施工裂缝处理中,总结出楼盖平面泵送混凝土结构防裂缝措施,并在温州市中心区C29地块中取得较好的效果,包括材料优选、运输、施工技术和养护条件。

地下室后浇带的应用和质量控制

后浇带在建筑工程中已普遍应用，但后浇带往往要主体结构完成后才能封闭，新老混凝土的结合要经过慢长的时间差，因此地下室后浇带的施工存在两个问题，一是后浇带钢筋防锈蚀的问题，其次是后浇带防水的问题。作者在多年的施工实践中，总结出地下室后浇带钢筋防锈蚀的措施和后浇带防水的方法，取得较好的效果。

关于动平衡机校准方法的探讨

当前时代下,工业技术的发展速度日益加快,制造业需求能够更平稳运转的旋转机械转子。随着旋转设备数量的不断增长,用户及质量体系管理环节也逐渐将动平衡机校准过程当作了一个重点内容,予以了更高的关注。基于此,本文从动平衡机出发,简单介绍了工作原理、类别,并分析了动平衡机校准的方法,以供参考。

多因素对昆明小鼠胚胎干细胞原代集落形成和后期增殖的影响

目的:研究细胞因子LIF、EGF、bFGF和肝素钠,以及氧分压、温度等多因素对昆明系小鼠胚胎干细胞(KM-ESC)原代集落形成和后期增殖的影响。方法:本研究选择LIF、EGF、bFGF、肝素钠、5%O2,20%O2和37℃、39℃作为研究条件。并检测不同情况下小鼠胚胎干细胞原代集落形成和后期增殖情况。结果:LIF对KM-ESC原代集落形成和后期增殖具有显著促进作用,极显著高于EGF、bFGF和肝素钠组(P<0.01)。温度对KM-ESC原代集落形成和增殖具有显著影响,39℃条件下,原代集落形成率、直径和后期增殖显著高于37℃(P<0.05);而氧分压对KM-ESC原代集落形成无显著作用(P>0.05),但是对原代集落直径和后期增殖有一定促进作用,20%O2组显著高于5%O2组(P<0.05)。结论:LIF、EGF、bFGF、肝素钠、39℃、20%O2对小鼠胚胎干细胞原代集落形成和后期增殖具有显著促进作用。