绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞的体外培养和鉴定

目的:为了追踪评价干细胞修复组织缺损时干细胞龛的分子作用机制,培养绿色荧光蛋白转基因小鼠的骨髓间充质干细胞,并对其进行鉴定和诱导分化。方法:取3-4周龄gfp小鼠股骨全骨髓,ACK裂解红细胞后采用贴壁法进行体外培养和传代,荧光显微镜下观察贴壁细胞荧光状态。运用流式细胞术检测干细胞标记物,通过体外诱导观察其成骨成脂能力。结果:原代培养的Gfp骨髓间充质干细胞,能多次传代,细胞的荧光仍保持原有状态,未发生淬灭。流式细胞术鉴定CD29、CD90表达阳性,CD45表达阴性。成骨诱导3周后骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞,茜素红S染色有橘红色磷酸盐胞外基质沉积并保持原有的荧光强度;成脂诱导2周后,细胞形态增大,油红O染色可见胞质内大量橙红色脂肪空泡,分化的细胞仍保持原有的荧光强度。结论:贴壁培养的Gfp骨髓间充质干细胞不仅荧光表达稳定,而且具有干细胞自我更新增殖和多向分化的干细胞特性,可以做为研究干细胞龛的优质示踪干细胞源。

骨髓间充质干细胞向成牙本质样细胞分化的体外实验研究

目的:观察骨髓间充质干细胞向成牙本质样细胞分化的能力。方法:分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞、胎鼠牙胚细胞,制备牙胚细胞条件培养液;用牙胚细胞条件培养液诱导SD大鼠骨髓间充质干细胞7d,通过免疫荧光染色和RT-PCR方法,观测其表达成牙本质细胞特异性标志物—牙本质涎蛋白(DSP)、牙本质基质蛋白1(DMP-1)的情况,明确骨髓间充质干细胞能否向成牙本质样细胞分化。结果:大鼠骨髓间充质干细胞在诱导体系中生长状态良好。培养7d后,部分细胞抗牙本质涎蛋白(DSP)、抗牙本质基质蛋白1(DMP-1)免疫荧光染色呈阳性;RT-PCR显示mRNA水平表达牙本质涎磷蛋白(DSPP)和牙本质基质蛋白(DMP-1)。结论:大鼠骨髓间充质干细胞在牙胚细胞条件培养液的诱导下可以分化为成牙本质样细胞。

下颌第一磨牙5个根管1例

消除根管内的病源刺激物是成功根管治疗的首要条件[1]。成年恒牙的根管系统是个复杂的系统且根管变异性大,从而致根管被遗漏。下颌第一磨牙通常为3～4个根管,5个根管较少见。作者收治左侧下颌第一磨牙5个根管病例1例,报道如下。