家蚕新基因Bmbzj的表达、抗体制备及亚细胞定位

在自建的家蚕蛹cDNA文库中发现了一条新基因序列,GenBank登录号为DY231426。该基因是一个同源性很低的基因,未发现保守结构域,将其命名为Bmbzj。Bmbzj基因全长661bp,由99bp的5′端非翻译区序列(5′UTR)、486bp的开放读码框(ORF)和76bp的3′端非翻译区序列(3′UTR)组成。生物信息学分析结果表明蛋白Bmbzj可能存在跨膜区和信号肽。将该基因插入到载体pGEX-4T-3中,构建了该基因编码的重组质粒pGEX-4T-3-Bmbzj,转化大肠杆菌Rosetta后,IPTG诱导表达了该融合蛋白,并利用亲和层析的方法纯化该重组蛋白,免疫新西兰兔制备多克隆抗体。亚细胞定位实验结果表明该蛋白只存在于细胞质中。