N-氢化诺卜基吡啶类卤化铵的合成及抑菌活性研究

以氢化诺卜基氯、氢化诺卜基溴和氢化诺卜基碘为原料,分别与吡啶及其同系物(α-甲基吡啶、4-二甲氨基吡啶、4-甲基吡啶)通过季铵化反应,制得N-氢化诺卜基吡啶类氯化铵、N-氢化诺卜基吡啶类溴化铵和N-氢化诺卜基吡啶类碘化铵共7种氢化诺卜基吡啶的季铵盐类化合物,分别为N-氢化诺卜基吡啶溴化铵(2a)、N-氢化诺卜基吡啶碘化铵(2b)、N-氢化诺卜基吡啶氯化铵(2c)、N-氢化诺卜基-γ-二甲氨基吡啶溴化铵(2d)、N-氢化诺卜基-γ-二甲氨基吡啶碘化铵(2e)、N-氢化诺卜基-α-甲基吡啶碘化铵(2f)、N-氢化诺卜基-γ-甲基吡啶溴化铵(2g)。采用了质谱(MS),核磁共振(1H NMR,13C NMR)及红外光谱(FT-IR)表征了化合物的结构;采用菌丝生长速率法测试了7种化合物对葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)、柑橘茎点霉菌(Phoma citricarpa)、柑橘炭疽刺盘孢菌(Colletotrichum glecosporioides)、猕猴桃拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsis actinidia)和枣拟茎点霉菌(Phomopsis mauritiana)的抑制效果。结果表明:在500 mg/L下,7种化合物对5种供试病原菌均具有一定的抑制效果,2d和2e对柑橘茎点霉菌和猕猴桃拟盘多毛孢菌的抑菌率为100%,均高于对照样多菌灵对这2种病原菌的抑制率,而2d对葡萄座腔菌的抑制率达到100%,与对照样多菌灵的抑菌效果一样。

氢化诺卜基3同烷基卤化铵的合成与结构分析

将以β-蒎烯为初始原料依次经Prins反应、催化氢化、卤代等合成反应得到的氢化诺卜基卤代物分别与三甲胺、三乙胺、三正丁胺反应,制得氢化诺卜基三甲基卤化铵、氢化诺卜基三乙基卤化铵和氢化诺卜基三正丁基卤化铵共8种含氢化诺卜基的季铵盐类化合物,并对它们的结构进行了质谱、核磁共振及红外光谱分析.其中的氢化诺卜基三乙基碘化铵及氢化诺卜基三正丁基溴化铵在体外抗肿瘤活性试验中表现出对人肺癌H460细胞、人胃癌MKN-45细胞、人肝癌SMMC-7721细胞、人乳腺癌MCF7细胞具有体外抗肿瘤活性.

异莰烷基甲酸及其酯类的合成与结构分析

以莰烯为原料,经Vilsmeier-Haack反应、催化加氢得到异莰烷基甲醛,异莰烷基甲醛经氧化反应得到异莰烷基甲酸。在对甲苯磺酸的催化下,与一系列一元醇(正丙醇、正丁醇、异丁醇、仲丁醇、正戊醇、异戊醇和环己醇)进行酯化反应,合成了未见报道的7种异莰烷基甲酸酯类化合物4a-4g,产率在61~84%之间,采用IR、MS、~1H NMR及^(13)C NMR对产物进行了结构表征。分析了异莰烷基甲酸酯及其反应中间体的合成方法。本研究可为莰烯的精细化学利用提供一定的理论基础。

肿瘤炎性微环境与辐射抗性机制的研究进展

肿瘤炎性微环境通过介导复杂的通路在肿瘤发展的不同阶段均起决定性的作用。炎性微环境中存在大量的免疫细胞、生长因子和细胞趋化因子等,利于肿瘤的增殖、侵袭、黏附和血管生成,促使肿瘤的发生和发展。因此,肿瘤炎性微环境的深入研究为肿瘤放射治疗的疗效提出了一条新理论,而且近年来肿瘤炎性微环境中主要组分对肿瘤细胞辐射抵抗机制的研究已成为前沿领域。本文针对肿瘤细胞辐射抗性机制中肿瘤炎性微环境的作用进行综述。

NRP1和miR-9在人NSCLC组织和癌旁组织中的表达及其临床意义

目的:检测人非小细胞肺癌(NSCLC)组织标本中神经纤毛蛋白1(NRP1)mRNA和miR-9的表达水平,并探讨二者表达与NSCLC患者临床特征之间的关系。方法:在患者知情同意下,收集2010—2011年吉林大学中日联谊医院匹配的NSCLC患者组织标本,包括45例正常组织、45例癌旁组织及45例肿瘤组织。采用qRT-PCR法检测不同组织中NRP1mRNA和miR-9表达水平,分析二者表达水平与不同临床病理特征的相关性。结果:与正常组织比较,癌旁组织中NRP1mRNA表达水平无明显变化(P>0.05),而肿瘤组织中NRP1mRNA表达水平明显降低(P<0.05);与正常组织比较,癌旁组织miR-9表达水平无明显变化(P>0.05),而肿瘤组织中miR-9表达水平明显升高(P<0.05)。男性癌旁组织中miR-9表达水平低于女性(P<0.05)。NSCLC患者肿瘤组织中NRP1mRNA表达水平与性别、年龄、分化程度、TNM分期及临床分期无关联(P>0.05),但与病理分型及淋巴结转移有关联(P<0.05);NSCLC患者肿瘤组织中miR-9表达水平与年龄、肿瘤病理类型、淋巴转移、分化程度、TNM分期及临床分期无关联(P>0.05),而与性别因素有关联(P<0.05)。结论:NSCLC患者肿瘤组织中miR-9表达水平显著升高,而NRP1mRNA表达水平明显下降,NRP1mRNA检测有助于判断NSCLC的分型及转移。

二烷基氢化诺卜基苄基卤化铵的合成及抑菌活性

以氢化诺卜基溴为原料,分别与二甲胺、二乙胺、二正丙胺反应得到3种二烷基氢化诺卜基胺,后者再分别与溴化苄、氯化苄、碘化苄反应制得了7种二烷基氢化诺卜基苄基卤化铵,其结构经红外光谱、质谱、核磁共振确认,这7种化合物均为新化合物.以葡萄座腔菌(Botryosphaeria parva)、柑橘茎点霉菌(Phoma citricarpa)、柑橘炭疽菌(Colletotrichum glecosporioides)、猕猴桃拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsis actinidia)、枣拟茎点霉菌(Phomopsis mauritiana)为供试菌种,采用菌丝生长速率法测定7种化合物对供试菌种的抑菌效果.结果表明:在500 mg·L-1的浓度下,7种化合物对葡萄座腔菌的抑制率均达80%以上,对柑橘黑斑病菌的抑制率均比多菌灵的抑制率更高,且N,N-二乙基-N-氢化诺卜基苄基碘化铵对柑橘黑斑病菌的抑制率高达100%.化合物N,N-二甲基-N-氢化诺卜基苄基碘化铵和N,N-二乙基-N-氢化诺卜基苄基碘化铵对猕猴桃拟盘多毛孢菌的抑制率均在80%以上,具有良好的抑制效果.

神经纤毛蛋白1对非小细胞肺癌放射敏感性的影响

目的 探讨神经纤毛蛋白1（neuropilin 1,NRP1）在不同种类非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系的表达情况及其与肿瘤放射敏感性的关系,方法 通过Western blot技术检测不同来源的5种人NSCLC细胞系（H358、H460、H1299、A549、SK-MES-1） NRP1的基础表达水平,MTT方法检测经不同剂量X射线照射后肺癌细胞的存活情况,初步筛选5种细胞中辐射敏感和辐射抵抗的2种细胞;采用克隆形成实验及流式细胞术分别检测细胞存活分数及凋亡率的变化,分析2种肺癌细胞的放射敏感性,采用Western blot检测2种细胞受X射线作用后NRP1的表达变化,通过克隆形成实验检测靶向抑制NRP1对A549细胞放射敏感性的影响,结果 5种肿瘤细胞NRP1表达量由高到低依次为：A549＞ SK-MES-1＞ H358＞ H460＞ H1299;X射线对肿瘤细胞的抑制能力呈剂量依赖性增强,其抑制率由高到低依次为：H460＞ H1299＞H358＞ SK-MES-1＞A549,因此选取A549细胞和H460细胞做后续研究.克隆形成实验显示,A549在2 Gy照射下的存活分数（SF2）是0.887,而H460细胞为0.313。A549细胞受照后的凋亡率为对照组的122.54％,明显低于H460细胞的238.88％,辐射可以诱导A549细胞NRP1的表达上调达40％,同时靶向抑制NRP1则可以增强A549细胞的放射敏感性,结论 在NSCLC细胞中A549细胞具有较强的辐射抗性,且辐射抗性的形成与其NRP1表达上调有关。

miR-9对神经纤毛蛋白-1的靶向调控及其在辐射效应中的作用

目的 构建has-miR-9表达质粒和NRP1-3 ＇UTR荧光素酶报告质粒,探讨miR-9对NRP1的靶向调控作用及其在A549细胞中的辐射效应.方法 利用生物信息学方法预测has-miR-9与NRP1-3＇UTR的结合位点;将miR-9序列插入载体pcDNA-DEST47中构建真核表达质粒,同时构建NRP1-3 ＇UTR的野生型和突变型荧光素酶报告质粒,并与pcDNA-DEST-miR-9质粒共转染至A549细胞,分析miR-9对其调控作用;miR-29b作为阴性对照,观察miR-9对NRP1的靶向作用.采用Western blot方法,验证miR-9对NRP1蛋白表达的抑制作用及照射后A549细胞NRP1蛋白表达变化;采用实时定量PCR方法检测10 Gy电离辐射照射后A549细胞miR-9表达量.结果 荧光素酶活性实验结果显示,miR-9可以显著下调野生型NRP1-3 ＇UTR质粒的荧光素酶活性（t=3.906,P＜0.05）,而不影响突变型质粒的荧光素酶活性,同时证实miR-9以外的miRNA（miR-29b）不能抑制野生型NRP1-3 ＇UTR质粒的荧光素酶活性.转染miR-9 mimic后,在A549细胞中,靶基因NRP1蛋白的表达受抑制.10 Gy照射后,A549细胞中miR-9表达量下调（t=37.319,P＜0.05）,而NRP1蛋白表达升高.结论 在A549辐射效应中miR-9通过靶向结合NRP1基因3＇UTR,特异性调控NRP1蛋白表达.

电离辐射对小鼠胸腺Th17细胞相关细胞因子的影响

目的通过研究电离辐射对小鼠胸腺Th17细胞相关细胞因子的影响，探讨高、低剂量辐射诱导不同的免疫效应中Th17细胞功能。方法将健康ICR小鼠按随机数字表法分为健康对照组、低剂量照射组（0．05、0．075Gy）和高剂量照射组（0．5、1．0、2．0、4．0Gy）探讨剂量-效应关系，用x射线深部治疗机进行不同剂鼍的全身照射，于照射后24h处死。同时，探讨时间．效应关系，即分为健康对照组、低剂量照射组（0．075Gy）和高剂量照射组（2．0Gy），于照射后12、24、48h处死，取胸腺组织制备成组织匀浆，ELISA法检测小鼠胸腺细胞中白介素-17a（IL-17a）与白介素-21（IL-21）的浓度。结果在时间-效应结果中，与健康对照组相比，0．075Gy照射组胸腺细胞IL-17a和IL-21分泌量呈下降趋势，其分泌量于48h降到最低（t=3．85、4．73，P〈0．05）；而2．0Gy照射组均呈大幅度上升趋势，其分泌量在48h达到最高（t=-6．74、-6．19，P〈0．05）；在剂量-效应结果中，与健康对照组相比，较低剂量照射组胸腺细胞IL-17a与IL-21分泌量下降，在0．05Gy最低（t=8．39、16．45，P〈0．05）；较高剂量照射组胸腺细胞的分泌量上升，在4．0Gy时升至最高（t=-15．60、-18．62，P〈0．05）。结论高剂量辐射可以诱导小鼠胸腺细胞IL-17a与IL-21分泌量的增加，而低剂量辐射使其下降，表明Th17细胞相关的细胞因子在低剂量辐射诱导的免疫功能增强效应和高剂蘑辐射诱导免疫抑制效应中起着重要的作用。

辐射对肿瘤微环境中Treg细胞及其相关因子的影响

目的 检测照射后与肺腺癌A549细胞共培养的淋巴细胞中调节性T细胞（Treg细胞）及其相关细胞因子和共刺激分子表达的变化,探讨辐射对肿瘤微环境中免疫耐受机制的影响.方法 分离人外周血淋巴细胞单独培养或与肺腺癌A549细胞进行共培养一段时间后,以6GyX射线进行照射,继续共培养一段时间后,以流式细胞术检测淋巴细胞中CD4＋ CD25＋、CD4＋ CD25＋FoxP3^＋、CD4＋ CD25＋ NrP1^＋不同亚组的百分数、共刺激分子ICOS和CTLA-4的表达情况;ELISA法检测培养体系上清中IL-10、TGF-β、IL-17的分泌量.结果 与照射前后单独培养组相比,相应条件下共培养组中CD4＋ CD25＋、CD4＋ CD25＋ FoxP3^＋、CD4＋ CD25＋ NrP1^＋、ICOS、CTLA-4、IL-10和TGF-β比例均增加（t=2.78 ～40.61,P＜0.05）.而与照射前相比,照射后单独培养组和共培养组的CD4＋ CD25＋和CTLA-4比例增加（t=2.96、2.94、4.47、2.77,P＜0.05）.细胞因子IL-17的表达量在肺腺癌A549细胞和X射线分别作用下无明显变化,但共同作用后会明显增加（t=4.00、4.71,P ＜0.05）.结论 辐射刺激肺癌细胞肿瘤微环境中的CD4＋ CD25＋Treg细胞亚组及其相关CTLA-4和IL-17的表达,诱导肿瘤微环境中的免疫耐受作用.