褪黑素对精神分裂症模型大鼠海马神经元氧化应激损伤的保护作用

目的:研究褪黑素(MT)对精神分裂症模型大鼠海马神经元氧化应激损伤的保护作用及机制。方法:60只雄性SD大鼠被分为5组:对照组、模型组、模型+MT低剂量组(12.5 mg/kg)、模型+MT高剂量组(25 mg/kg)、模型+MT受体阻断剂组(Luzindole,1 mg/kg),每组12只。采用腹腔注射MK-801的方法建立精神分裂症大鼠模型,造模成功后,模型+MT低剂量组、模型+MT高剂量组以及模型+MT受体阻断剂组均腹腔注射相应药物,对照组及模型组注射10%无水乙醇溶液,持续21 d。采用Morris水迷宫实验检测大鼠的学习记忆功能,试剂盒法检测海马组织匀浆液中氧化应激相关因子ROS、SOD、MDA含量,免疫组织化学法检测神经元标记蛋白NeuN的表达,Western blot法检测海马核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白水平。结果:与对照组比,模型组大鼠学习记忆功能受损,海马ROS、MDA含量显著增加,SOD活性下降,NeuN阳性细胞数明显减少,海马Nrf2、HO-1蛋白表达显著升高(均P<0.05);与模型组比,模型+MT高剂量组大鼠学习与记忆功能均有较明显的改善,海马ROS、MDA含量均下降,SOD活性升高,NeuN阳性表达增加,Nrf2、HO-1蛋白表达显著升高(均P<0.01)。与模型+MT高剂量组比,模型+MT受体阻断剂组大鼠学习记忆功能受损,海马ROS含量上升,NeuN阳性表达下降,Nrf2、HO-1蛋白表达下降(P<0.05)。结论:MT具有保护精神分裂症大鼠海马神经元氧化应激损伤的作用,其机制与调控Nrf2/HO-1信号通路有关。

葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎小鼠中TRAIL-R基因敲除对Th17细胞凋亡的影响

目的:采用葡聚糖硫酸钠(DSS)构建实验性结肠炎小鼠模型,探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的受体基因敲除(TRAIL-R-/-)对结肠炎症及Th17细胞凋亡的影响。方法:将C57BL/6品系小鼠分为4组:TRAIL-R-/-结肠炎组、TRAIL-R-/-对照组、野生型(WT)结肠炎组、WT对照组,每组各9只。结肠炎组饮用3.5%的DSS,对照组饮用清水。7 d后,从临床表现和组织病理学上评估小鼠结肠炎的严重程度。取外周血单个核细胞(PBMCs)和结肠黏膜固有层单个核细胞(LPMCs),采用流式细胞术检测Th17细胞占CD4+T细胞的比例,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-q PCR)、Western blot和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测视黄酸相关孤儿受体(ROR-γt)和IL-17A的m RNA和蛋白表达水平。采用TUNEL荧光染色技术及激光共聚焦显微镜观察结肠组织中Th17细胞的凋亡率。通过比色法检测结肠组织中凋亡蛋白酶Caspase 3、Caspase 8和Caspase 9的活性。结果:DSS诱导后,TRAIL-R-/-小鼠较WT小鼠发生了更为严重的结肠炎。TRAIL-R-/-结肠炎小鼠PBMCs中Th17细胞的比例(P<0.01),以及ROR-γt和IL-17A的m RNA和蛋白表达水平均显著高于WT结肠炎小鼠(均P<0.05)。TRAIL-R-/-结肠炎小鼠LPMCs中Th17细胞的比例(P<0.01),以及ROR-γt和IL-17A的m RNA和蛋白表达水平均显著高于WT结肠炎小鼠(均P<0.05)。与WT结肠炎小鼠相比,TRAIL-R-/-结肠炎小鼠的结肠组织中Th17细胞的凋亡率(P<0.01)以及Caspase 3和Caspase 8的酶活性均显著降低(均P<0.01)。结论:DSS诱导后,TRAIL-R-/-小鼠的结肠炎症较WT小鼠更为严重,原因可能是Th17细胞凋亡减少,其数目和活性增高所致。

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对实验性结肠炎小鼠Th17/Treg细胞平衡的影响

背景:Th17/Treg细胞失衡可能是参与克罗恩病(CD)发生的重要环节。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)信号通路是影响包括CD在内的多种自身免疫性疾病的潜在机制之一。目的:探讨TRAIL基因敲除对实验性结肠炎小鼠Th17/Treg细胞平衡的影响。方法:采用CRISPR/Cas9基因敲除技术获得TRAIL-/-C57BL/6小鼠。分别将TRAIL-/-小鼠和同品系野生型(WT)小鼠各20只随机分为两组,一组不予处理,一组以三硝基苯磺酸(TNBS)诱导实验性结肠炎。评估各组小鼠结肠炎症程度,采用real-time PCR、蛋白质印迹法和ELISA法检测外周血和结肠组织中的Th17、Treg细胞相关转录因子RORγt、Foxp3和细胞因子白细胞介素-17(IL-17)、IL-10表达。结果:与未造模小鼠相比,造模小鼠体质量显著下降,结肠缩短,疾病活动指数评分和组织活动度指数评分升高(P<0.05),TRAIL-/-结肠炎小鼠上述表现更为明显(P<0.05)。WT结肠炎小鼠外周血和结肠组织中的RORγt、IL-17表达较未造模WT小鼠显著升高(P<0.05),Foxp3、IL-10表达显著降低(P<0.05)。TRAIL-/-结肠炎小鼠上述Th17、Treg细胞相关因子表达和RORγt/Foxp3比值均较WT结肠炎小鼠显著升高(P<0.05)。结论:TRAIL基因敲除可能通过Th17/Treg细胞比例上调加重实验性结肠炎小鼠的肠道炎症反应。

黄芩素通过TLR4/NF-κB信号通路对小鼠结肠炎的干预作用

目的:探讨黄芩素通过TLR4/NF-κB信号通路对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的实验性结肠炎的干预作用。方法:将C57BL/6雄性小鼠随机分为5组,即对照组、结肠炎组、黄芩素低剂量(Ba-L)治疗组[10 mg/(kg·d)]、黄芩素高剂量(Ba-H)治疗组[25 mg/(kg·d)]和5-氨基水杨酸(5-ASA)治疗组,每组各12只。对照组小鼠饮用清水,其余各组小鼠均连续7 d饮用3.5%的DSS溶液构建实验性结肠炎模型。在DSS造模开始前7 d和造模开始后给予不同剂量黄芩素或5-ASA灌胃治疗,共14 d。比较各组小鼠之间的平均体质量、疾病活动指数(DAI)以及结肠组织学活动程度评分(HAI);采用实时荧光定量PCR法测定各组小鼠的结肠组织中IL-1β、TNF-α、IFN-γ、TLR4、NF-κB p65、MyD88的mRNA水平;采用免疫荧光技术测定肠上皮细胞中NF-κB p65的入核率。结果:结肠炎组小鼠与对照组小鼠相比,出现严重的结肠炎,表现为小鼠体质量降低、全结肠长度缩短、DAI和HAI大幅度升高(均P<0.01)。与结肠炎组小鼠相比,Ba-L治疗组、Ba-H治疗组和5-ASA治疗组小鼠的结肠炎有明显改善(均P<0.05)。结肠炎组小鼠的结肠组织中IFN-γ、TNF-α、IL-1β、My D88、NF-κB p65、TLR4的mRNA表达水平均明显高于对照组小鼠(均P<0.01);而Ba-L治疗组、Ba-H治疗组及5-ASA治疗组中上述mRNA表达水平则均明显低于结肠炎组小鼠(均P<0.05)。结肠炎组小鼠的肠上皮细胞中NF-κB p65的入核率明显高于对照组小鼠(P<0.001),但Ba-L治疗组、Ba-H治疗组以及5-ASA治疗组的肠上皮细胞中NF-κB p65的入核率则明显低于结肠炎组(均P<0.001)。结论:黄芩素可能通过TLR4/NF-κB信号通路抑制DSS诱导的结肠炎症。

溃疡性结肠炎患者中诱骗受体和护骨素基因多态性及其结肠组织表达水平分析

目的拟在浙江省汉族人群中探讨结肠组织中诱骗受体和护骨素基因多态性及其结肠组织表达水平与UC的关系。方法收集56例UC患者和62例性别、年龄相匹配的良性结肠息肉患者作为对照组,采集空腹外周静脉血和结肠组织标本。采用SNaPshot技术检测DcR1(rs12549481)、DcR2(rs1133782)及OPG(rs3102735)的基因多态性。采用反转录实时定量PCR(RT-qPCR)法和免疫组织化学法检测结肠组织中DcR1、DcR2、OPG mRNA及蛋白表达水平。在UC组和对照组之间,以及携带不同基因型的UC患者之间比较结肠组织中DcR1、DcR2、OPG mRNA和蛋白表达水平差异。结果UC组中突变基因型(GA+AA)及突变等位基因(A)频率均显著高于正常对照组(15.18%vs 6.45%,OR=2.595,95%CI:1.073~6.274,P=0.030;28.57%vs 12.90%,OR=2.700,95%CI:1.053~6.926,P=0.035)。UC患者结肠组织中DcR2mRNA和蛋白表达水平均显著低于对照组(4.49±2.29 vs 9.49±4.06,t=8.134,P<0.01;0.180±0.052 vs 0.273±0.069,t=8.322,P<0.01)。携带DcR2(rs1133782)突变基因型(GA+AA)的患者结肠组织中DcR2的mRNA和蛋白表达水平显著高于携带野生纯合子(GG)基因型者(3.64±1.63 vs 6.62±2.35,t=5.43,P<0.01;0.129±0.028 vs 0.198±0.047,t=7.147,P<0.01)。然而,UC组和对照组之间,以及携带DcR1、OPG不同基因型的UC患者之间,DcR1和OPG mRNA和蛋白表达水平差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论DcR2(rs1133782)基因突变可能降低UC的发病风险,其机制可能通过降低DcR2 mRNA和蛋白表达水平发挥作用,DcR1(rs12549481)和OPG(rs3102735)基因多态性及其结肠组织表达水平与UC的发病风险无显著关联。

高中地理读图实践能力探究

地理是高中文科学生的必修学科,在高考中占据着重要的地位,同时地理又是一门充满人文色彩的学科,学习好地理,必须掌握扎实的地理读图能力。让学生通过地理地图学会将地理知识应用到实践中,促进学生综合地理素养的提升。那么怎样在高中地理教学中提升学生的读图实践能力是广大高中地理教师重点探讨的问题。鉴于此,该篇文章结合本人多年的高中地理教学经验,探讨了高中学生地理读图实践能力培养的策略。首先,从思想层面上对地理读图实践能力的培养意义予以了认可,然后分析了培养学生地理读图实践能力的过程中存在的问题,最后分析了提升高中生地理读图实践能力的有效对策,希望对高中学生真正学习好地理有所帮助。

谈中小学法制教育存在的问题及对策

青少年由于法律意识淡薄,犯罪问题十分突出,严重影响了我国社会的稳定与发展,为此在学校进行法制教育势在必行。本文主要探讨中小学法制教育存在的问题及对策。

高中地理“地球运动”模块教学实践

"地球运动"模块是高一新生进校首先要接触的内容,同时也是高中地理教学中的难点。这个模块教学好坏直接关系到以后的整个地理教学,如何帮助学生轻松度过这个难关,保持学生学习地理的热情和探索的激情,是我们每一位高中老师要面临和解决的问题。