云南烟草丛枝症病害研究 Ⅷ 验证与烟草丛枝症病害相关的稳定RNA

来自云南省２２个县市的烟草丛枝症标本均检测到与云南烟草丛枝症病害相关的稳定ＲＮＡ，大小相当于８００ｂｐ左右的ＤＮＡ；病株的根、茎、叶、花和枯叶中含有此ＲＮＡ，种子中未检测到此ＲＮＡ；此ＲＮＡ的最大吸收峰为２６９ｎｍ；能被蛇毒磷酸二酯酶Ｉ消化，不具有类病毒结构特征，推测可能是病毒的基因组分；支持莫笑晗等对此ＲＮＡ的结构推测，即可能是有广泛内部配对、具有类似发叉结构的线性长度为１６１ｋｂ的单链ＲＮＡ．与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ目前发现的超稳定ＲＮＡ．

秸秆还田和覆盖对烤烟生长发育及品质的影响

为提高烟叶品质,对麦秆还田、稻草还田、稻草覆盖、麦秆覆盖、地膜覆盖、无覆盖进行了比较试验。结果表明:麦秆覆盖的处理上等烟比例、均价最高,地膜覆盖的处理烟叶产量、产值最高。在烟株团棵期之前,土壤温度较低,地膜覆盖保温保湿效果好,烟株生长量增加较快,但从旺长期至初采期麦秆覆盖处理的效果较好,烟株生长量增长较快,稻草覆盖处理次之。麦秆还田处理的烟叶分层落黄较早,且麦秆还田有利于改良土壤、培肥地力。

形成灰色烤烟的原因及机理

通过对土壤、烟株、烟叶生理生化指标分析及田间生态环境调查和盆栽试验,系统研究了形成灰色烤烟的原因及影响品质的机理.结果表明,烤烟灰色烟叶发生与植烟土壤pH偏低、根层土壤含水量过高、土壤通透性差有密切关系,而影响灰色烟叶发生和严重程度的直接原因是土壤和烟叶内Fe,Mn等离子含量过高所致.在土壤pH值偏低,土壤含水量过高,根层土壤通透性差的条件下,Fe,Mn由不易被吸收的高价态转化成容易被植物吸收的低价态,造成烟株体内吸收积累Fe,Mn过多,营养平衡失调,引起烟草出现生理性中毒.

云南烟草丛枝症病害研究 V传染途径

在隔离环境中，按植物病毒学的标准程序，测试云南烟草丛枝症病害的传染途径，结果表明：云南烟草丛枝症病害具有广泛的传染途径，可以通过机械传染（嫁接、摩擦）和介体传染（菟丝子、蚜虫、烟盲蝽、叶蝉）等方式传播．

云南烟草丛枝症病害研究 Ⅺ 病原研究:类病毒问题

感染云南烟草丛枝症病害的病苗的细胞切片中观察到类似于旁壁体的质膜体，旁壁体是类病毒侵染植物形成的特征病变结构，但多次双向电泳实验均未检测到类病毒分子，质膜体的形成可能和莫笑晗等发现的与云南烟草丛枝症病害相关的稳定ＲＮＡ有密切关系，但线性开环结构和失活温度说明其不具有类病毒核酸特征．

云南烟草丛枝症病害研究 VI综合防治技术的研究与示范推广

１９９４至１９９８年，在云南烟草丛枝症病害的重病区进行药剂治疗和治虫防病等研究，并进行大面积综合防治技术示范（３１１５ｈｍ２）和推广工作（６４０３２ｈｍ２），结果表明：抗生素类药剂和抗病毒制剂无治疗效果，单纯治虫防病的效果也不理想，采用以网罩隔离育苗培育无毒苗、药剂控制传媒昆虫、淘汰和更换病苗、保健栽培为技术核心的综合防治措施，能够有效地控制病害的发生和流行，防治效果在９５％以上．

云南烟草丛枝症病害研究 Ⅶ 激素的变化

采用植物激素ＥＬＩＳＡ测定试剂盒，对比测定了烟草感染丛枝症的病株与健株体内细胞分裂素（ｉＰＡ和ＺＲ）与生长素（ＩＡＡ）含量的变化．结果表明：生长素含量在整个发病期间健株都较高于病株，细胞分裂素含量在发病初期明显高于健株，随后呈下降趋势并趋于稳定，Ｃ／Ａ值在病程中相对处于较高水平．

云南烟草丛枝症病害研究I田间发病规律

系统地调查云南烟草丛枝症病害的田间自然发病情况和介体发生情况，并实验测定烟草品种的抗病性，结果表明：烟草丛枝症病害在病区常年均有发生，最早发病时间在４月下旬，保山市１９９４，１９９５和１９９７年属一般年份，１９９３，１９９６和１９９８年属流行年份，导致病害流行的主要因素是苗期和移栽初期的两次蚜虫迁飞期高峰，以网罩隔离培育无毒烟苗、避开蚜虫迁飞高峰期移栽并同时施药是最有效的防治方法．目前生产上审定推广的品种全为高感品种，测定３１个烤烟和１４５个晒晾烟品种未发现抗病品种．

云南烟草丛枝症病害研究 II细胞的超微病变

超薄切片观察云南烟草丛枝症病害的病叶组织，并抽提试验材料的总核酸电泳检测，结果表明：病组织中检测到与烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ，切片中未观察到病毒粒子，薄壁细胞中发现细胞膜系统的畸变：质膜体（ｐｌａｍａｌｅｍｍａｓｏｍｅ）和双层膜泡囊（ｄｏｕｂｌｅｍｅｍｂｒａｎｏｕｓｖｅｓｉｃｌｅｓ）．质膜体由细胞质膜或液泡膜伸入空泡形成，直径约１０００～２０００ｎｍ，结构类似于类病毒侵染寄主形成的旁壁体．双层膜泡囊是含纤维状物内含物的泡囊，直径约１００～２００ｎｍ，结构类似于某些病毒侵染寄主形成的细胞质泡囊（ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃｖｅｓｉｃｌｅｓ）和植原体（ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａｓ），但因其广泛分布于寄主细胞中，不能认为是植原体．文献显示这些病变是类病毒和某些病毒侵染的特征，初步认为云南烟草丛枝症病害可能是病毒病害，发病早期细胞内出现小分子核酸侵染的细胞病变特征，此与莫笑晗等发现病株体内含有大量低分子量ＲＮＡ可能有密切关系．

云南烟草丛枝症病害研究 I病害的症状学及其病程

以云南烟草丛枝症病株为毒源，通过蚜虫传染接种大十字期、猫耳朵期、摆盘期、团棵期、旺长期和现蕾期的烟株，观察症状反应并检测与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ．研究表明：云南烟草丛枝症病害的病程可分为４个阶段：潜育期、过敏反应期、缩顶期和丛枝期，烟株从感染到表现丛枝要经过约１个月；蚜虫接种后约１周，在蚜虫口针刺吸部位开始出现褪绿斑，继而产生强烈的过敏反应，即从褪绿斑中心开始坏死出现蚀点斑，叶片上布满坏死斑纹，有典型的环纹和蚀纹，严重的烟株叶片破裂，细脉坏死；随后进入缩顶期，烟株生长缓慢，叶间距明显缩短，顶部几乎成为一个平面，叶色稍黄，大十字期和猫耳朵期接种烟株缩顶后生长极其缓慢，萎缩成为僵苗，不表现丛枝症状，也不会开花结实；感染约４周后，摆盘期、团棵期、旺长期和现蕾期接种的烟株开始腋芽丛生，生长速度加快，几天后便表现为典型的黄化丛枝症状，叶黄化且变圆，能够开花结实．其症状和文献记载的所有烟草丛枝、丛顶和丛蔟类病害有明显区别，初步认为是１种未见记载的新病害，建议称之为“烟草簇矮病（Ｔｏｂａｃｏｂｕｓｈｙｄｗａｒｆ）”．文中附病程症状图２版．

灰色烤烟防治技术

为了消除灰色烤烟发生,探讨了利用高墒高培土排水、调节土壤pH值、揭膜培土、配方施肥等农田管理措施对灰色烤烟的防治效果.结果表明,无论是通过高墒高培土排水改善土壤通透性、施用石灰提高土壤pH值、不盖地膜或移栽后及早揭膜高培土,还是通过配方施肥提高P素比例而降低K素比例,均能降低烟草对Fe和Mn的吸收而减少灰色烟叶的发生.在防治灰色烤烟的发生时应综合考虑以上措施.

云南烟草丛枝症病害研究 IV建立标准毒株

以蚜虫传染发生云南烟草丛枝症病害的烟株为材料进行组织培养，连续培育３代，以第３代组培烟苗为毒源经蚜虫传染健康烟株，提取毒源和各实验烟株的总核酸进行琼脂糖凝胶电泳．结果表明：第３代组培烟苗为毒源经蚜虫传染的烟株发病表现丛枝症，并检测到与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ．说明与云南烟草丛枝症病害相关的病原能在寄主离体培养组织中长期保存，成功建立云南烟草丛枝症病害的标准毒株．

云南烟草丛枝症病害研究 ⅩⅥ 网罩隔离培育无毒烟苗防治病害

云南烟草丛枝症病害是经烟蚜和烟盲蝽传染的病毒病， 在 “治虫防病”为主的防治技术的基础上， 本文研究网罩隔离技术培养无毒烟苗应用于大田控制病害的方法， 并进行一定面积的技术示范工作， 结果表明： 网罩隔离育苗在田间成功地培育出无毒烟苗， 病苗率为０２３ ％ ～３６ ％ ， 较对照下降约７５ ％ ～９５ ％ ， 移栽后结合优质烟栽培技术， 封顶时烤烟的田间发病率为２ ～５ ％ ， 说明以无毒苗应用技术为核心、辅之介体控制和病苗拔除等技术的综合防治体系能够有效和稳定地控制烟草丛枝症病害的危害．