高血压大鼠ACE2的表达及其与一氧化氮相关性分析

目的探讨血管紧张素转换酶2(ACE2)在自发性高血压大鼠(SHR)中的表达情况并对其与血清一氧化氮(NO)水平作相关性分析。方法分别采用实时荧光定量PCR,Northern印迹以及免疫印迹技术测定心、肾组织中ACE2的mRNA与蛋白表达情况,同时用硝酸还原酶法检测血清NO含量。结果与WKY对照组相比,SHR大鼠心、肾组织中ACE2的mRNA和蛋白表达均明显下降(ACE2/GAPDH mRNA拷贝数比值为:心脏0·043±0·012vs1.291±0·619;肾脏0·051±0·016vs0·914±0·433,P均<0·01;蛋白相对OD值为:心脏0·729±0·046vs1±0·053;肾脏0·734±0·063vs1.005±0·05,P均<0·01),同时出现血清NO浓度下降[(24.3±8.0vs78.4±27.9)μmol/L,P<0·01)。相关分析发现,大鼠血清NO水平与心、肾组织中ACE2/GAPDH的mRNA拷贝数比值呈正相关(r=0·610,0·521,P均<0·05),而与血压水平则呈负相关(r=-0·656,P<0·05)。结论SHR大鼠心、肾组织中ACE2的mRNA和蛋白表达均明显下降,很可能与体内NO水平降低及血压上升有关。特异性影响ACE2转录和表达的药物将对高血压病的防治有重要的临床应用价值。

血管紧张素转换酶2基因转染对人内皮细胞MIF表达的影响

目的:探讨重组血管紧张素转换酶2(ACE2)基因转染对体外培养的人血管内皮细胞中由血管紧张素(Ang)II诱导的巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的影响。方法:克隆和构建含人ACE2基因全长的重组质粒(pACE2),并将之转染入人血管内皮细胞中。分别采用实时定量PCR和Western印迹技术检测转染细胞中的MIFmRNA与蛋白表达情况。结果:AngⅡ(100nmol/L)和AngIV(100nmol/L)刺激后均可诱导人血管内皮细胞中MIFmRNA及蛋白表达增加(P<0.01)。pACE2基因转染可明显抑制内皮细胞中由AngII和AngIV诱导的MIFmRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论:ACE2基因过表达可明显抑制人内皮细胞中炎症介质MIF的表达,提示ACE2基因具有一定的抗炎症效应。通过调节ACE2基因的活性和表达,很可能为炎症相关疾病如动脉粥样硬化治疗提供新的策略。

重组ACE2基因对人血管内皮细胞中eNOS磷酸化水平的影响

目的探讨重组血管紧张素转换酶2(ACE2)基因转染对内皮源性一氧化氮(NO)合酶(eNOS)磷酸化水平的影响。方法克隆和构建含人ACE2基因全长的重组质粒(pACE2),并将之转染入人血管内皮细胞中;采用实时定量PCR和Western印迹技术检测转染细胞中的ACE2、eNOS的表达情况,同时使用硝酸还原酶比色法测定细胞中NO含量。结果血管紧张素II(AngII,100nmol/L)加入细胞后可抑制由胰岛素刺激的Ser1177-eNOS磷酸化与NO生成(n=5～6,P<0.01)。pACE2基因转染可逆转细胞中由AngII对胰岛素诱导eNOS磷酸化的抑制效应,同时伴NO水平上升(n=5～6,P<0.01)。结论ACE2过表达可明显改善人血管内皮细胞中eNOS磷酸化的表达,伴有NO生成增加,提示ACE2可能通过调节血管AngII/NO的平衡,在改善血管内皮功能和胰岛素抵抗中起重要功效。

血管紧张素转换酶2与高血压

肾素血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)和激肽释放酶-激肽系统是机体内调控血压稳定的两大体系,它们之间相互对抗,同时又形成多层次的相互作用的网络.在整个血压调控网络中,血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)及其新近发现的同源酶ACE2是其中的关键作用子[1].

人ACE2基因真核表达载体的构建及其转染人内皮细胞的研究

目的:克隆人血管紧张素转换酶2(ACE2)基因,构建其真核表达载体并将之转染入体外培养的人血管内皮细胞中。方法:采用PCR方法从人胎儿心脏cDNA文库扩增出人ACE2cDNA全长基因,克隆到pcDNA3.1-D/V5-His表达载体上,构建重组真核表达质粒phACE2,经酶切和测序鉴定。采用脂质体法将phACE2转染至人血管内皮细胞中,分别利用实时定量PCR和Western印迹检测重组ACE2的mRNA和蛋白的表达情况。结果:经PCR、酶切和基因序列测定证实重组入载体的片段(2419bp)为目的基因序列,在转染的内皮细胞中发现ACE2的mRNA和蛋白的表达明显增加(P<0.01)。结论:本研究成功构建并表达了pcDNA3.1-hACE2重组真核表达载体,为该基因在高血压病防治中的功效研究奠定了基础。

全反式维甲酸对高血压大鼠体内ACE2表达与一氧化氮信号的影响

目的:探讨全反式维甲酸(atRA)对高血压大鼠体内血管紧张素转换酶2(ACE 2)基因表达及一氧化氮(NO)信号的影响。方法:采用自发性高血压大鼠(SHR)及其同源对照W KY大鼠,经腹腔注射atRA,为期1月。分别用实时荧光定量PCR,N orthern印迹及免疫印迹技术测定atRA治疗后SHR体内ACE 2、血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)的表达情况,以硝酸还原酶法检测血清NO水平。结果:与W KY对照组相比,SHR心脏ACE 2的mRNA和蛋白表达下调[mRNA拷贝数比值:(0.06±0.02)vs.1;蛋白吸光度比值:(0.73±0.05)vs.1,P均<0.01],atRA(低、高剂量atRA组)治疗后SHR心脏ACE 2表达上调[mRNA:(0.23±0.08),(0.53±0.18)vs.(0.06±0.02);蛋白水平上升:(0.9±0.07),(0.92±0.08)vs.(0.73±0.05),P均<0.05],同时出现AT1表达降低、血清NO水平增高以及血压下降(P均<0.05)。结论:长期atRA治疗促进SHR大鼠心脏ACE 2的表达增加,导致体内NO增加,血压下降,提示转录调节剂atRA很可能对人类高血压病防治具有一定的价值。

原发性高血压患者血清可溶性细胞间粘附因子(sICAM-1)与一氧化氮、过氧化脂质水平相关性的研究

目的 检测原发性高血压患者血清可溶性细胞间粘附因子 (sICAM 1 )水平并探讨其与一氧化氮 (NO)及过氧化脂质水平的相关性。 方法 采用ELISA法测定血清sICAM 1浓度 ,分别用硝酸还原酶法、硫代巴比妥酸 (TBA)法及黄嘌呤氧化酶法检测NO水平、丙二醛 (MDA)含量及超氧化物岐化酶 (SOD)活性。结果 与正常对照组相比 ,65例原发性高血压病患者血清sICAM 1浓度和MDA含量升高 (P <0 0 1 ) ,而NO水平和SOD活性降低 (P <0 0 1 )。相关分析发现 :血清sICAM 1浓度和MDA含量呈正相关 (r=0 94,P <0 0 1 ) ,而与NO水平和SOD活性水平呈负相关(r=- 0 58、r =- 0 93 ,P值均 <0 0 1 )。结论 原发性高血压患者血清sICAM 1明显升高 ,且与机体氧化应激增强及NO降低有关。

全反式维甲酸对高血压大鼠体内apelin-APJ信号系统的影响

目的:探讨全反式维甲酸(atRA)对高血压大鼠体内心血管活性多肽apelin及其受体APJ信号的影响。方法:采用12周龄雄性自发性高血压大鼠(SHR)及其同源对照WKY大鼠,经腹腔注射atRA,为期1月。分别用实时荧光定量多聚酶链式反应(PCR)与免疫印迹技术测定atRA治疗后SHR体内apelin和APJ受体的表达情况。结果:与WKY对照组相比,SHR心脏组织中apelin及其受体APJ的 mRNA和蛋白表达明显下调(P均<0.01)。而atRA治疗后SHR(低、高剂量atRA组)大鼠心脏组织中apelin、APJ表达出现上调(P均<0.05)。结论:长期atRA治疗促进SHR大鼠心脏组织中apelin及其受体APJ的表达增加,提示转录调节剂atRA很可能对人类高血压病防治具有积极作用。

全反式维甲酸对高血压大鼠心脏氧化应激水平的影响

目的:探讨全反式维甲酸(atRA)对高血压心脏还原型辅酶I氧化酶P22亚单位(p22phox)表达以及氧化应激水平的影响。方法:采用12周龄雄性自发性高血压大鼠(SHR)及其同源对照WKY大鼠,经腹腔注射at-RA,为期1月。分别采用免疫印迹、硫代巴比妥酸比色以及透射电镜技术测定atRA治疗后SHR心脏p22phox的表达、丙二醛(MDA)含量以及心肌超微结构情况。结果:与WKY对照组相比,SHR心脏组织中p22phox蛋白表达与MDA含量明显升高(P均<0.01)。而atRA治疗后SHR(低、高剂量atRA组)大鼠心脏组织中p22phox蛋白表达与MDA水平出现下调(P均<0.05),同时伴有心肌损伤减轻。结论:长期atRA治疗可降低SHR大鼠心脏组织中p22phox表达与MDA水平,提示atRA在高血压病中具有一定的抗氧化效应。

全反式维甲酸调节高血压大鼠肾脏AT_1/APJ受体表达平衡

目的探讨全反式维甲酸(atRA)对自发性高血压大鼠(SHR)肾脏血管紧张素1型受体(AT1)及其类似物APJ受体表达的影响。方法采用12wk♂SHR及其同源对照WKY大鼠,经腹腔注射atRA,为期1mon。分别用实时荧光定量PCR与免疫印迹技术测定atRA治疗后SHR肾脏组织AT1和APJ受体的表达情况。结果与WKY对照组相比,SHR肾脏组织中AT1受体mRNA和蛋白水平明显升高,APJ受体表达则出现下调(P均<0·01)。而atRA治疗后SHR肾脏AT1受体表达降低,APJ表达则得到回升,同时伴有血压下降(P均<0·05)。结论长期atRA治疗可调节SHR大鼠肾脏组织中AT1/APJ受体表达的平衡,提示转录调节剂atRA很可能对人类高血压病防治具有一定价值。

血管紧张素转换酶2基因转染对人血管内皮细胞中氧化应激水平的影响

背景血管紧张素转换酶2(ACE2)是迄今为止发现的人类 ACE 的第一个同源基因,是血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的主要降解酶,但其在氧化应激中的调控作用尚不清楚。目的探讨重组 ACE2基因转染对体外培养人血管内皮细胞中由 AngⅡ诱导的 NAPDH 氧化酶 p22^(phox)表达和丙二醛(MDA)水平的影响。方法克隆和构建含人 ACE2基因全长的重组质粒(pACE2),并将之转染人人血管内皮细胞中。分别采用实时定量 PCR 和 Western印迹技术检测转染细胞中的 p22^(phox)的 mRNA 与蛋白表达情况。采用硫代巴比妥酸比色法测定细胞中 MDA 含量。结果 AngⅡ(100 nmol/L)和 AngⅣ(100 nmol/L)刺激后均可诱导人内皮细胞中 p22^(phox)的 mRNA 及蛋白表达大大增加,伴有细胞中 MDA 水平升高(n=6,P 均<0.01)。pACE2基因转染可抑制细胞中由 AngⅡ和 AngⅣ诱导的 p22^(phox)表达,同时伴 MDA 水平下调(n=5～6,P 均<0.01)。结论 ACE2基因过表达可明显抑制人内皮细胞中 p22^(phox)的表达,而且降低 MDA 水平,提示 ACE2具有一定的抗氧化效应。通过调节 ACE2基因活性和表达,很可能成为氧化应激相关疾病如高血压病防治的重要手段。

从2014年美国成人高血压治疗指南推荐看肾素-血管紧张素-醛固酮系统阻断剂在高血压病防治中的地位

2014年美国高血压预防、检测、评估和治疗全国联合委员会第8次报告（JNC8）最近发布了新的美国成人高血压治疗指南[1]。JNC8新指南建立了高血压治疗的临床证据条款和推荐，包含1项高血压患者治疗流程图和9条指南推荐，

血管紧张素转换酶2、氧化应激与血压调控研究进展

高血压病是一类环境、遗传因素共同作用的复杂的多基因疾病,其发病机制至今尚未被完全阐明。肾素血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)在调节水盐代谢、维持血容量与血管张力、氧化应激水平以及调控心、肾脏功能等方面起着极其重要的作用,是机体内调控血压稳定的最重要机制之一,其活性异常参与高血压病的发病过程。新近发现的血管紧张素转换酶2(angiotensin convertingenzyme 2,ACE2)是人类ACE的第一个同源酶。ACE2不仅能直接高效降解ACE的作用产物血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)而生成Ang-(1-7),还能竞争性地作用于ACE的底物AngⅠ,使之产生Ang-(1-9),后者经ACE或中性肽链内切酶作用进一步水解为舒血管物质肽Ang-(1-7)。AngⅡ是心血管系统中氧自由基生成和氧化应激的重要激活物,NADPH氧化酶是其中的重要参与者。在ACE2基因敲除的小鼠中NADPH氧化酶的活性明显增加,加重AngⅡ介导的心血管组织氧化损伤。ACE2基因能促进Ang-(1-7)的生成,后者可直接对抗AngⅡ引发的血管收缩、管壁增厚、血管外周阻力增加和氧化应激等作用。另外,Ang-(1-7)是一种内源性ACE抑制剂,还可增强缓激肽的降压效应,增加一氧化氮和前列环素等扩血管物质的释放,通过Mas受体实现其扩张血管、降低血压水平及减轻氧化损伤等作用。ACE2活性或表达异常通过促使氧化应激增加可能导致高血压。新的RAS系统参与氧化应激及血压调控主要依赖于两条路径:ACE-AngⅡ-AT1轴与ACE2-Ang-(1-7)-Mas轴,而ACE和ACE2基因是其中的关键作用子。由于ACE2、Ang-(1-7等)新成员的加入,RAS体系较以往变得更富挑战性,同时为高血压的防治带来新的契机。通过改善ACE2表达和/或活性,可降低机体内氧化应激水平,导致血压下调,从而在高血压中发挥心血管保护功效。ACE2基因、氧化应激和高血压三者之间关系密不可分,通过调节ACE2活性和氧化应激水平的药物已成为高血压药物治疗新的研究方向。随着对氧化应激相关基因转录调控和肾素血管紧张素系统相关基因的深入研究,将给肾素血管紧张素系统调节药物及抗氧化剂的发展提供更广阔的空间,将可能为高血压病的防治提供新的策略。NADPH氧化酶抑制剂、血管肽酶抑制剂、AngⅡ转录生长因子受体、ACE2基因治疗等均为目前高血压防治新的研究热点,开发上述新型药物并运用到临床必定会给高血压的防治带来新的一场改革。[基金项目:国家自然科学基金(30973522 & 30700328);浙江省科技计划面上科研项目(2009C33080)]。

实时定量聚合酶链反应检测心血管活性多肽apelin方法的建立

目的 :建立实时定量聚合酶链反应 (RQ PCR)检测心血管活性多肽的方法 ,为快速、准确地分析心脏组织中apelin基因表达奠定基础。方法 :根据心血管活性多肽apelin基因序列 ,设计并合成引物和荧光标记TaqMan探针。将逆转录 聚合酶链式反应扩增的apelin基因片段克隆至pGEM Teasy载体 ,重组质粒经蓝白筛选、酶切、测序鉴定后 ,作为阳性克隆标准品 ,用于标准曲线的制定 ,由此可定量检测出每一样品模板的起始拷贝数。结果 :阳性克隆标准品制作的标准曲线可显示循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系 (r =0 970 ) ,可用于apelin基因表达的起始拷贝数定量测定。结论 :RQ PCR方法较常规PCR技术更为简便、准确、特异、灵敏 。

ACE2/Ang-(1-7)信号与高血压伴发抑郁症研究现状

ACE2/Ang-(1-7)是调节血压及神经细胞功能的关键信号途径。ACE2/Ang-(1-7)信号异常可上调脑炎症因子表达、促使神经细胞功能紊乱使血压增高及抑郁症的发生。特异性的ACE2/Ang-(1-7)信号调节剂将为高血压伴抑郁症的防治提供新的策略。本文就ACE2/Ang-(1-7)信号在高血压伴发抑郁症中的作用研究进展作一介绍。

高血压患者红细胞免疫功能和过氧化脂质水平变化探讨

目的研究高血压患者红细胞免疫状态以及红细胞膜脂质过氧化作用对其影响。方法采用红细胞酵母菌混合花环法测定红细胞C3 b受体花环率 (E C3 bRR)和红细胞免疫复合物花环率 (E ICR) ,分别采用硫代巴比妥酸(TBA)法与黄嘌呤氧化酶法检测红细胞膜丙二醛 (MDA)含量、超氧化物歧化酶 (SOD)活性水平。结果与正常对照组相比 ,高血压患者红细胞E C3 bRR及SOD活性降低 (P <0 .0 5 ) ,红细胞膜MDA升高 (P <0 .0 5 ) ,而红细胞E ICR无显著性差异 (P >0 .0 5 )。相关分析发现 :高血压患者红细胞E C3 bRR与红细胞膜MDA含量呈负相关 (r= 0 .91,P <0 .0 1) ,而与SOD活性水平呈正相关 (r=0 .87,P <0 .0 1)。结论高血压患者存在红细胞免疫功能下降 ,且与红细胞膜过氧化脂质作用增强有关。