疫苗制品中Vero细胞残余蛋白含量检测方法的建立

目的建立疫苗制品中Vero细胞残余蛋白含量检测方法。方法制备Vero细胞蛋白抗原参考品,免疫家兔,提纯抗体作为包被抗体并以酶标记,建立酶联免疫检测系统。用Vero细胞蛋白抗原参考品绘制定量标准曲线,并对各项指标进行验证。结果提纯后抗体纯度达90%以上,抗体效价为1∶64,Westernblot分析显示,提纯抗体与Vero细胞蛋白抗原参考品中绝大部分蛋白成分均能特异性结合。确定最佳抗体包被浓度为10μg/ml,酶标抗体的工作浓度为1∶1000。Vero细胞蛋白抗原参考品定量范围为12.5～800.0ng/ml时,线性关系良好,r=0.997,该方法特异性、精密度及准确度良好。将试剂于4、25和37℃分别放置3周,检测同一定量参考品和样品中Vero细胞蛋白抗原含量,差异无显著意义。结论已建立了用ELISA检测疫苗制品中Vero细胞残余蛋白含量的方法。

冻干Vero细胞乙型脑炎纯化疫苗的稳定性

目的了解冻干Vero细胞乙型脑炎纯化疫苗的稳定性。方法将冻干Vero细胞乙脑纯化疫苗分别放置在4℃、25℃、37℃和40℃下,按规定时间取样。用ELISA双抗体夹心法和小鼠效力试验检测其抗原单位和效力水平。结果在4℃下72周效力损失4.2%,25℃下24周效力损失4.5%,37℃下12周效力损失9.1%,40℃下4周效力损失15.2%。疫苗溶解后室温放置24h,效力无明显改变。结论冻干Vero细胞乙脑纯化疫苗在室温下稳定性良好。

不同方法制备Vero细胞乙型脑炎纯化疫苗的质量比较

目的比较不同纯化方法制备Vero细胞乙型脑炎纯化疫苗的质量。方法用柱层析一步法、两步法、区带离心法纯化工艺制备Vero细胞乙脑纯化疫苗各3批,比较杂蛋白去除率、抗原比活性、纯度、HCP残留。结果3组杂蛋白去除率分别为97.0%、99.1%和99.6;抗原比活性分别为0.35、0.59和0.68EU/μg;抗原回收率分别为82.3%、49.6%和30.3%;HCP残留量分别为10.40、0.70和0.13μg/ml,纯化液中每微克蛋白中残余HCP(ng)的含量平均为139.3、32.9和9.3ng。结论蔗糖梯度离心法制备的Vero细胞乙型脑炎疫苗抗原活性、纯度、杂蛋白去除效果、HCP残余量均优于两种柱层析法。两步柱层析法优于一步法。

流行性乙型脑炎病毒在二倍体细胞上的适应性

目的研究流行性乙型脑炎病毒在二倍体(2BS)细胞上的传代适应性,确定在2BS细胞上培养乙脑病毒的条件和方法。方法通过病毒毒力和免疫原性检测,观察在不同培养条件下乙脑病毒在2BS细胞上的增殖情况。结果pH值在7·4～7·6之间、人血白蛋白含量为0·2%、病毒稀释度为1:1000时,病毒维持液培养的病毒滴度最高。在2BS细胞上传50代的病毒滴度均在7·0logLD50以上,且差异无显著意义。连续传代后病毒的免疫原性下降。结论建议用于建立病毒种子库的流行性乙型脑炎病毒,在2BS细胞上传代不应超过3代。

3种乙型脑炎纯化疫苗免疫原性和热稳定性

目的比较地鼠肾细胞、Vero细胞和2BS细胞乙型脑炎纯化疫苗的免疫原性和热稳定性。方法对3种细胞制备的病毒原液和冻干疫苗分别进行小鼠免疫原性试验和热稳定性试验。结果2BS细胞制备的病毒原液和疫苗小鼠效力均高于地鼠肾细胞和Vero细胞;Vero细胞和地鼠肾细胞制备的病毒原液和疫苗小鼠蚀斑减少中和试验抗体效价均高于2BS细胞。3种细胞制备的疫苗在37℃保存4周,中和抗体效价损失均小于5%。结论3种细胞制备的病毒原液及冻干疫苗均具有良好的免疫原性及热稳定性。

乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)中间品的稳定性

目的对乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)生产各阶段的中间品进行稳定性观察。方法将各阶段中间品置4℃保存,于不同时间取样,进行病毒滴度、抗原含量和小鼠免疫原性检测。结果4℃下病毒收获液14d内滴度下降8.0%,灭活收获液的抗原含量8周内下降7.3%。浓缩原液、鱼精蛋白处理原液、蔗糖区带离心原液抗原含量在12周内分别下降了9.7%、8.3%和8.3%,加保护剂脱糖原液12周内抗原含量下降了8.4%,稀配半成品24周内抗原含量下降了2.98%,但在12周内均保持了良好的小鼠保护效力。结论上述样品在4℃下,保存期限内均保持了良好的稳定性。

Vero细胞乙型脑炎纯化疫苗生产工艺参数的研究

疫苗的生产工艺对保证疫苗的质量起着重要的作用，尤其是对生产过程中一些指标的量化显得更为重要。试验的设计分别考察了细胞接种量，细胞培养时间和离心机纯化样品的蛋白含量等因素对疫苗质量所产生的影响。结果显示，对以上指标的控制的最佳量化是接种量3～7×10^7／瓶，培养时间6d，样品蛋白含量2000～2500μg／ml。产品质量稳定。

原代地鼠肾细胞疫苗中残余宿主细胞蛋白检测方法的建立及初步验证

目的建立定量检测原代地鼠肾细胞（primary hamster kidney cell，PHKC）疫苗中残余宿主细胞蛋白含量的方法。方法制备PHKC蛋白免疫家兔，对获得的抗血清进行纯化并标记辣根过氧化物酶，通过优化各反应条件建立ELISA方法，同时进行方法学验证。结果ELISA检测方法的最佳包被抗体质量浓度为6mg／L，酶标抗体工作浓度为1：2000，最佳检测区间为12．500～200．000μg／L，定量限度为23．250μg／L，准确度和精密度较佳。结论建立了一种简单、准确、可靠检测PHKC病毒性疫苗中宿主细胞蛋白残留量的ELISA双抗体夹心法。