流式细胞术联合共聚焦显微镜对G_2和M期作用位点的鉴别意义

本研究探讨抗癌药物在细胞周期G2期和M期作用位点的鉴别方法。用G2期和M期细胞阻滞剂的甲安吖啶(m-AMSA)和长春花碱(VBL),分别诱导MOLT-4细胞产生细胞G2期和M期阻滞,用流式细胞术分析DNA直方图含量变化,共聚焦显微镜观察阻滞后细胞形态,并寻找上述两种药物诱导阻滞成功后的差异。结果表明:流式细胞术有检测显示,诱导阻滞成功的MOLT-4细胞均表现为G2/M峰增高,但仅凭流式细胞术单独检测无法判别两者差异。共聚焦显微镜观察显示甲安吖啶诱导G2期阻滞的细胞呈现G2期形态特征,VBL诱导M期阻滞的细胞呈现M期形态特征,共聚焦显微镜对细胞形态学的观察有助于区分两者的差异。因此,在流式细胞术验证诱导成功的基础上进一步经共聚焦显微镜观察有助于鉴别G2和M期的阻滞剂。结论:流式细胞术与共聚焦显微镜技术结合是判别抗癌药物的G期和M期细胞阻滞剂类型的有效方法之一。

从细胞阻滞模型来看流式细胞术中细胞周期分析的误区

目的:探讨流式细胞术中细胞周期常规分析方法的误区和潜在的合理分析方法。方法:设立空白对照,观察MOLT-4细胞经0.1μmol·L-1喜树碱诱导细胞周期阻滞7h后细胞周期变化情况,并从常规DNA直方图分析法(方法一)和本实验意外发现的方法(方法二)进行细胞周期分析,并评价两种方法获得的结果。结果:方法一分析的细胞周期分布结果G0/G1期、S期和G2/M期分别为(65.42±4.73)%、(25.01±2.58)%、(9.57±1.96)%,方法二分析结果分别为(31.51±2.13)%、(59.32±5.92)%、(9.17±1.61)%。两种分析方法获得的结果存在显著差异(n=8,P<0.01)。结论:流式细胞术常规细胞周期分析方法存在严重的误区。一种新的基于细胞周期特异性标志物的定量技术或形态学方法应用于细胞周期的分析较合理。

MOLT-4细胞凋亡不同阶段活性Caspase-3在细胞内的空间位相移行

背景与目的:在细胞凋亡过程中,位于细胞浆中的Caspase-3酶原是由什么方式引起细胞形态序贯性变化的问题还没有完全阐明,本研究旨在探讨放射诱导的MOLT-4细胞凋亡不同阶段活性Caspase-3在细胞内的空间分布、细胞形态的变化以及二者的关系。方法:10GyX射线照射诱导MOLT-4细胞。亚G1峰法和凝胶电泳检测凋亡细胞中DNA变化。膜联蛋白V标记细胞膜,带荧光素的Caspase抑制剂(fluorochromeinhibitorofcaspase,FLICA)标记活性Caspase,并用流式细胞仪检测。应用共聚焦显微镜观察MOLT-4细胞凋亡形态及活性Caspase-3在细胞内的分布。免疫印迹检测Caspase-3的表达。结果:X射线10Gy照射后,MOLT-4细胞出现细胞膜翻转、凋亡小体等典型的细胞凋亡特征。其凋亡过程中Caspase-3激活,4h其活性明显增加。在细胞内,活性Caspase-3由靠近细胞膜的胞浆面向细胞浆、胞核移行,与细胞凋亡的形态学变化相吻合,在时间上早于细胞膜翻转。结论:X线照射后MOLT-4细胞中Caspase-3激活,且其亚细胞分布与细胞凋亡的形态学变化相吻合。活性Caspase-3在凋亡细胞中空间位相的移行是放射诱导的细胞凋亡机制之一。

用动脉化疗栓塞术预防肝癌根治性切除术后肿瘤复发的效果研究

目的 :探讨用动脉化疗栓塞术预防肝癌根治性切除术后肿瘤复发的临床效果。方法 :对2011年6月~2012年6月期间在我院接受根治性切除手术的68例肝癌患者的临床资料进行回顾性研究。将这68例患者随机分为对照组和观察组,每组各有34例患者。在这两组患者进行肝癌根治性切除术后,对照组患者未进行动脉化疗栓塞术,观察组患者进行了动脉化疗栓塞术。然后,比较两组患者在术后的第1年、第2年和第3年其肿瘤的复发率。结果 :在进行肝癌根治性切除术后的第1年和第2年,观察组患者肿瘤的复发率明显低于对照组患者,二者相比差异具有显著性(P<0.05)。在术后第3年,观察组患者肿瘤的复发率与对照组患者无明显差异(P>0.05)。结论 :用动脉化疗栓塞术预防肝癌根治性切除术后肿瘤复发的效果显著,可有效地延缓患者肿瘤复发的时间,并可在短时间内降低其肿瘤的复发率,改善其生存状况。此疗法值得在临床上推广应用。

多西紫杉醇联合斑蝥酸钠对人肺腺癌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨多西紫杉醇联合斑蝥酸钠对人肺腺癌A549细胞的抑制作用。方法:采用MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果:斑蝥酸钠和多西紫杉醇均能显著抑制人肺腺癌A549细胞的增殖诱导细胞凋亡(P<0.05),联合使用抑制率及凋亡率均显著高于单药组(P<0.05)。结论:多西紫杉醇和斑蝥酸钠均可明显抑制人肺腺A549细胞,联合使用抑制作用增强。

艾迪联合超声引导微波凝固治疗原发性肝癌临床观察

目的:观察艾迪注射液联合超声引导微波凝固治疗原发性肝癌的近期疗效及安全性。方法:按照中医辨证属于气阴两虚证,选择分期为Ⅱ、Ⅲ期,Karnofsky评分≥50分,预计生存期≥3个月的原发性肝癌患者61例,随机分为两组,治疗组(艾迪+微波治疗)31例;对照组(单纯微波治疗)30例。运用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞的表达水平;用放射免疫法检测血清AFP定量;检查肝脏B超、CT及肝肾功能;观察患者治疗前后临床主症的变化及毒副反应。正常对照组30例抽血查T淋巴细胞亚群、NK细胞活性与肝癌患者比较。结果:治疗组有效率(CR+PR)74.19%显著优于对照组56.67%(P<0.05);治疗组治疗后AFP下降程度优于对照组(P<0.01);治疗组治疗后除CD8+以外的各项免疫指标改善程度优于对照组(P<0.01);治疗后治疗组病人症状改善程度优于对照组(P<0.05);两组治疗后生活质量评分改善程度,治疗组明显优于对照组(P<0.01);治疗组治疗后肝功能改善程度优于对照组(P<0.01);对照组外周血WBC治疗后比治疗前有明显下降(P<0.01),而治疗组治疗前后无明显变化(P>0.05);治疗组12个月、18个月、24个月的生存率高于对照组,均有显著性差异(P<0.05)。结论:艾迪注射液联合微波凝固治疗肝癌不仅可以有效地消灭肿瘤及残癌细胞,防止肿瘤复发,而且可以增强机体的细胞免疫功能,是对失去手术治疗机会的中晚期肝癌的有效治疗方法之一。

长春花碱诱导MOLT-4细胞产生M期细胞阻滞的初步研究

本研究探讨化疗药物M期阻滞剂长春花碱(vinblastine,VLS)对MOLT-4急性淋巴细胞白血病细胞株产生的生物学影响并分析其意义。0.05μg/ml的VLS诱导MOLT-4细胞0-12小时产生M期细胞阻滞和/或细胞凋亡,流式细胞术检测DNA直方图和共聚焦显微镜观测细胞形态,采用阻滞增长率、阻滞效率、凋亡率及形态学指标分析阻滞前后的细胞周期分布、凋亡和细胞形态变化。结果表明,细胞阻滞可不伴随有凋亡率的显著增加;细胞阻滞的流式DNA直方图呈时间依赖的细胞周期分布动态改变,阻滞程度可量化;M期阻滞伴随有S期细胞堆栈;阻滞后细胞增殖率减低;M期阻滞细胞具有特征性细胞分裂的形态学特征。结论:长春花碱能单独诱导MOLT-4细胞M期阻滞,M期细胞阻滞的流式细胞检测和形态学特征的研究有助于进一步研究细胞阻滞与凋亡、检测点机制和抗癌新药开发提供参考。

从更换Gate选取来评估“API技术”中的凋亡细胞存在

目的:研究“API技术”中的凋亡细胞存在并评估“API技术”和常规亚G1峰细胞凋亡检测法的一致性。方法:以0.15μmol· L-1喜树碱诱导MOLT 4细胞凋亡,结果分析从流式细胞术的 FL2 W/FL2 A坐标和 DNA直方图中选取细胞凋亡域Gate来评估“API技术”中细胞凋亡域的存在。并分别比较由“API技术”分析获得的细胞凋亡率和由DNA直方图分析得到的细胞凋亡率之间的差别。结果:采用不同的 Gate选取方法在“API技术”中找到相同的细胞凋亡域,而“API技术”中的细胞凋亡域与前述两种方法找到的细胞凋亡域并不吻合,由“API技术”分析的细胞凋亡率为(24.75±3.45)%,由传统DNA直方图获得的细胞凋亡率为(5.56±1.17)%,两者之间差异存在极显著性(n=8, P<0.01)。结论:“API技术”和亚 G1 峰检测法的细胞凋亡域不一致,“API技术”对细胞周期特异性凋亡的检测结果与亚G1峰检测结果也不一致。

射频消融联合肝动脉栓塞化疗对无手术切除机会原发性肝癌的治疗价值

目的探讨经皮射频消融(RFA)联合肝动脉栓塞化疗术(TACE)对无手术切除机会原发性肝癌的治疗价值。方法 74例原发性肝癌患者,41例行单纯TACE治疗,33例行RFA联合TACE治疗,治疗后定期复查B超、CT或MRI,确定肿瘤坏死范围,应用流式细胞术检测治疗前和治疗后4周两组外周血CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的变化,采用酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测治疗后12周患者血清甲胎蛋白(AFP)的情况,Kaplan-Meier法计算预期生存率并预测平均生存期。结果 TACE组治疗前CD4+为27.23%±6.63%,治疗后为29.15%±6.15%,二者之间差异无显著性意义(P>0.05)。TACE组CD8+、CD4+/CD8+治疗前后均无显著性差异(P>0.05)。联合组治疗后CD4+、CD4+/CD8+明显高于治疗前(P<0.05)。联合组治疗后CD8+显著低于治疗前(P<0.05)。TACE组和联合组术后肿瘤坏死范围分别为(0.27±0.06)cm和(2.06±0.24)cm,二者之间差异有显著性(P<0.01)。联合组术后血清AFP含量为(53.24±7.92)μg·L-1,与TACE组术后血清AFP含量(374.72±23.11)μg·L-1相比差异有显著意义(P<0.01)。联合组术后平均生存时间明显长于TACE组(P<0.01)。结论对无手术切除机会原发性肝癌,经皮射频消融联合肝动脉栓塞化疗可明显改善患者免疫功能以及提高临床疗效。

桑植县生态公益林建设现状与建议

从桑植县生态公益林的区划界定、建设发展、经营管理等方面进行分析和探讨。提出经营公益林,必须在严格保护的基础上,通过科学经营、综合开发来提高生态公益林的功能效益,以实现生态公益林建设的持续稳定健康发展。

原位肝移植术后胆道狭窄预防及治疗

目的探讨原位肝移植术后胆道狭窄的预防及治疗方法.方法回顾性分析我院2001年6月～2005年1月完成的16例原位肝移植的临床资料,总结术后胆道狭窄的防治经验.结果2例病人患者术后出现胆道狭窄,发生率为12.5%(2/16),均为胆总管端-端吻合术;发生时间在术后2～4个月内,平均狭窄胆管长度为3.01±0.39cm,主要临床表现为梗阻性黄疸,均经B超和/或MRCP证实,以ERCP放置/更换胆道内支架后治愈,成功率为100%(2/2).结论供肝缺血时间过长、胆管血供不良、胆道冲洗不够等是引起原位肝移植术后胆道狭窄的主要因素,经ERCP的综合内镜治疗是术后胆道狭窄的首选治疗措施,但应避免盲目扩大内镜治疗范围.

空、结肠黏膜细胞增殖过程中主要细胞周期蛋白表达规律的研究

目的研究正常空、结肠黏膜细胞增殖过程中的人类主要细胞周期蛋白Cyclins表达特征和变化规律。方法应用细胞免疫组织化学流式细胞术检测30例正常空、结肠黏膜不同层面、不同增殖阶段细胞主要细胞周期蛋白CyclinD1、E、A、B1及Ki-67的表达,以共聚焦显微镜观察证实检测结果。结果不同增殖阶段肠黏膜细胞Cyclins表达阳性率及相对表达水平不同,从底部→中间层→表层肠黏膜细胞增殖活性(以Ki-67为增殖指标)呈下降趋势,Cyclins(CyclinE、B1为主)表达阳性率及水平呈高→低→无的变化,差异有统计学意义(P<0.01);Cyclins表达与肠黏膜细胞增殖活性呈正相关(P<0.05);CyclinD1、A仅表达于底层增殖细胞,表层完全分化细胞不表达Cy-clins。结论正常空、结肠黏膜细胞增殖分化过程中Cyclins(以CyclinE、B1为主)呈高→低→无的规律性变化,参与细胞增殖的调控,其表达呈衰减变化与肠黏膜细胞有限增殖和定向分化有关。

流式细胞术检测胱氡肽酶3原位激活与两种检测细胞凋亡方法的比较性研究

目的 用一种新的荧光染色技术 (FLICA/PI)检测放射诱导T淋巴细胞白血病细胞(MOLT 4 )的细胞凋亡过程中胱氡肽酶 3(Caspase 3)原位激活及探讨其活性变化特点 ,并与亚G1峰和膜联蛋白V/碘化丙啶 (AnnexinV/PI)检测细胞凋亡方法的灵敏度进行比较性评价。方法 以放射诱导的MOLT 4细胞凋亡为模型 ,用荧光标记的Caspase 3抑制剂 (FLICA)标记原位激活的Caspase 3,然后 ,用流式细胞仪定量检测并分析其活性变化 ;同时 ,用亚G1峰法和AnnexinV/PI检测细胞凋亡。结果 FLICA/PI检测到的Caspase 3激活 ,在照射后 2h开始升高 (5 84 % ) ,而AnnexinV/PI在 4h时检测到的凋亡率为 5 35 % ,FLICA/PI比AnnexinV/PI可提前 2h检测到细胞凋亡 ,Caspase 3活性的出现早于细胞膜反转。FLICA阳性率在照射后 4h暴发性增高至 12 39% ,显示有时间效应。两种检测方法均比亚G1峰法敏感 ,但AnnexinV/PI检测的凋亡率低于FLICA/PI法。结论 X 射线能诱导MOLT 4细胞凋亡 ,并有明显的时间效应关系 ;Caspase 3激活有阈值效应 ,是照射后细胞发生凋亡过程中早于形态学变化的检测指标。用Caspase 3活性检测细胞凋亡更直接 ,更敏感。

斑蝥酸钠联合多西紫杉醇诱导A_(549)细胞凋亡及对Caspase-8表达的影响

目的探讨斑蝥酸钠联合多西紫杉醇抑制人肺腺癌A549细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用,初步探讨其作用机制。方法采用MTT法测定细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI染色,流式细胞仪测定细胞凋亡率;Western印迹法测定Caspase-8活性。结果斑蝥酸钠和多西紫杉醇均能抑制人肺腺癌A549细胞的增殖(P<0.05),合用与单用相比抑制率明显提高,诱导12 h时CI值为0.88,24 h时为0.96,36 h时为1.02。Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测提示斑蝥酸钠可增强多西紫杉醇的凋亡诱导作用。Western印迹法显示多西紫杉醇、斑蝥酸钠及联合加药组均可见凋亡相关蛋白Caspase-8的裂解条带,联合加药组的裂解条带最明显。结论多西紫杉醇和斑蝥酸钠均可明显抑制人肺腺A549细胞增殖诱导细胞凋亡,联合使用作用更强,多西紫杉醇和斑蝥酸钠诱导细胞凋亡可能与促进Caspases-8表达有关。

肝脏淋巴上皮瘤样癌一例

资料：病人，男，53岁，以“发现乙肝30年，乏力、口干、身目尿黄10d”为主诉于2007年9月10日收住福建省厦门市中医院肝内科，诊断：慢性重度乙型肝炎。住院后给护肝、退黄、清热解毒利湿等处理，症状好转不明显。无诉头晕头痛，无鼻塞鼻衄，无畏冷发热，无恶心呕吐。于2007年9月11日查血常规示：WBC6．3×10^9／L，中性粒细胞61．3％，Hb143g／L，PLT112×10^9／L。查肝功能：ALB30g／L，

不同组织来源临床肿瘤主要细胞周期素表达类型的研究

目的观察人类主要细胞周期素(Cyclin D1、E、A、B1)在临床肿瘤细胞中表达特征并进行分类,探讨其对临床肿瘤分类的可行性及潜在意义。方法用流式细胞术(FCM)双参数法半定量检测161例恶性肿瘤手术切除标本细胞中Cyclin D1、E、A、B1表达,根据不同Cyclin在细胞周期中的作用及其异常表达特征,将肿瘤细胞主要Cyclin表达分为不同类型。结果细胞周期外Cyclin(D1)及周期内Cyclins(E、A、B1)在临床肿瘤细胞中表达无组织差异性(P>0.05)。其异常表达大致可归为5种类型:Ⅰ型Cyclin(D1、E、A、B1)均高表达;Ⅱ型Cyclin D1低表达,Cyclin(E、A、B1)不同形式高表达;Ⅲ型Cyclin D1不表达,Cyclin(E、A、B1)不同形式高表达;Ⅳ型Cyclin D1不表达,Cyclin(E、A、B1)不同形式低表达;Ⅴ型Cydin(D1、E、A、B1)均不表达;再根据各型中不同周期内Cyclin的优势表达分为相应不同的亚型。a亚型:Cyclin(E、B1)表达为主;b亚型:Cyclin E表达为主;C亚型:Cyclin B1表达为主;d亚型:Cyclin(E、A、B1)表达为主。肿瘤细胞主要Cyclin表达类型及相应亚型分布无组织来源的差异性(P>0.05)。结论主要Cyclins表达类型可以作为不同组织来源肿瘤分类的依据,可能是体现不同肿瘤细胞周期破坏共同特征较为客观分类方法。