提高大鼠原位肝移植成功率的技术细节及围手术期处理

目的探讨提高大鼠原位肝移植(rat orthotopic liver transplantation,ROLT)成功率的相关技术细节及围手术期处理的正确方法。方法以Kamada建立的"双袖套"法为基础,通过反复练习,逐步改进麻醉、肝上下腔静脉吻合、供肝灌洗、供肝冷保存、术后补液、动物饲养等方法。结果完成ROLT达270余例,建模的学习曲线非常陡峭,分作探索期、突破期、成熟期,手术成功率分别为0%、71.1%、94.5%,后期达到90%以上的成功率。肝上下腔静脉的吻合是大鼠原位肝移植建模过程中最为关键的步骤和难点。结论通过对显微外科技术细节的精益求精的训练及细致的围手术期处理,才能提高ROLT手术成功率和术后存活时间。

肝移植术后稳定生存者外周血中差异表达miRNA及其功能预测

目的寻找肝移植术后长期稳定生存者外周血中有意义的生物学标志物。方法纳入肝移植术后稳定存活患者29例(STA组),反复排斥反应者10例(RJ组),健康对照者17例(HC组),利用芯片检测各组PBMCs中micro RNAs的表达谱,并用Real-time PCR对差异表达的micro RNAs进行验证。结果芯片结果显示STA组对比于RJ组共13个micro RNA表达明显下调,经Real-time PCR验证3个micro RNA(mi R-106b,mi R-18b,mi R-340)表达下调。结论肝移植患者外周血mi R-106b、mi R-18b、mi R-340可作为肝移植术后潜在标志物。

BNIP3在rhEPO促进大鼠部分肝切除后肝再生中的作用

目的由BNIP3介导的线粒体动态平衡在肝脏的脂肪代谢及糖代谢中起重要作用,而肝再生与线粒体代谢密切相关。有研究表明EPO可促进肝脏再生,但具体机制不明。本文研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)对大鼠部分肝切除后肝功能及肝再生的影响,以及BNIP3和TNF-αmRNA在再生肝组织中的表达。方法36只Wistar大鼠随机分为rhEPO组和空白组,建立大鼠70%肝切除,肝切除后经门静脉注射3000IU/kg rhEPO,空白组注射等剂量生理盐水。术后1d、3d、5d各处死6只大鼠采集血清及肝脏标本,全自动生化分析仪测定血清谷丙转氨酶(ALT),免疫组织化学染色法检测Ki-67表达,ELISA法检测血清TNF-α、IL-6,荧光定量PCR检测肝组织BNIP3和TNF-αmRNA。结果肝切除术后1d rhEPO组的谷丙转氨酶(ALT)显著低于空白组(P<0.05)。肝切除术后1、5d rhEPO组Ki-67标记率显著高于空白组(P<0.05)。肝切除术后1d rhEPO组TNF-α显著高于空白组(P<0.05),肝切除术后1d 3d rhEPO组IL-6显著高于空白组。肝切除术后1d 3d rhEPO组BNIP3和TNF-αmRNA显著高于空白组(P<0.05)。结论门静脉注射rhEPO具有肝保护和明显的促肝再生作用,其机制可能与BNIP3和TNF-α有关。

索拉菲尼治疗肝癌肝移植术后肿瘤复发患者的疗效及安全性分析

目的探讨索拉菲尼治疗原发性肝细胞癌肝移植术后肿瘤复发患者的临床疗效和安全性。方法 10例肝移植术后肿瘤复发患者,确诊复发后即口服索拉菲尼400 mg,每日两次治疗（A组）;8例未接受索拉菲尼治疗的肝癌肝移植术后肿瘤复发患者（B组）;同期接受相同剂量的索拉菲尼治疗的肝癌患者25例（C组）。比较3组患者的带瘤生存时间、索拉菲尼的毒副作用及其他不良反应发生情况。结果 3组患者的带瘤生存时间分别为5~22个月（中位数10个月）、1~8个月（中位数4个月）和2~21个月（中位数4个月）,三组之间整体间差异有统计学意义（K-M法,以log-rank检验,P=0.045）。两组肝移植患者没有发生急性排斥反应,但服用索拉菲尼组有1例患者因上消化道出血而死亡,服用索拉菲尼的两组患者不良反应发生率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论索拉菲尼能明显延长肝癌肝移植术后肿瘤复发患者的生存期,并不增加排斥反应发生率。

C-IAP2在肝细胞肝癌中的表达及与临床预后的关系

目的探讨C-IAP2 mRNA和蛋白在肝细胞癌中的表达及其与临床预后的关系。方法采用荧光定量PCR和免疫组化方法检测肝细胞癌组织及对应的非癌组织中C-IAP2 mRNA和蛋白的表达水平并分析肝癌组织中C-IAP2的表达和临床病理特征之间的关系。结果肝细胞肝癌中C-IAP2 mRNA的表达是非癌组织的2.70倍(P<0.001)。C-IAP2蛋白在肝癌组织阳性表达率为70.8%,显著高于非癌组织中的阳性表达率27.8%(P=0.001)。C-IAP2 mRNA和蛋白在肝癌组织中的表达与术前有无癌栓、有无淋巴结转移、甲胎蛋白水平、肿瘤病理分化类型、TNM分期以及术后复发转移时间有关(P<0.05),而与患者性别、年龄、乙型肝炎表面抗原、肿瘤大小、肿瘤数目、肝硬化以及包膜完整性无关(P>0.05)。结论 C-IAP2表达水平与原发性肝癌的转移、复发有关,可作为原发性肝细胞癌预后的新生物学指标。

SENP-1和HIF-1α在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

【目的】探讨SENP-1和HIF-1α在肝细胞肝癌组织,癌边缘组织及非癌组织中的表达与肝癌发展的关系和在肝癌新生血管生成中的作用。【方法】应用RT-PCR、荧光定量PCR和免疫组织化学方法检测57例肝癌组织,癌边缘组织,非癌组织中SENP-1和HIF-1α的表达,用CD34多克隆抗体标记新生血管内皮细胞,计数微血管密度(MVD),分析三者表达的相关性及与相关临床病理参数的关系。【结果】肝癌组织与癌边缘组织SENP-1、HIF-1αmRNA表达显著高于非癌组织,SENP-1和HIF-1α在癌边缘组织及癌组织细胞的胞浆内有明显表达,癌边缘组织的表达强度及阳性率显著高于癌组织(P<0.05),且表达阳性率随肝癌组织分化程度降低而增高,而在非癌组织的实质细胞中则不表达;在癌边缘组织及癌组织中SENP-1与HIF-1α蛋白表达正相关(r=0.761,P=0.000;r=0.346,P=0.008),HIF-1α蛋白表达与MVD负相关(r=-0.684,P=0.000;r=-0.808,P=0.000)。【结论】SENP-1和HIF-1α的表达可能是肝癌细胞适应缺氧微环境的重要调节机制,与肝癌新生血管生成密切相关。

肝癌手术切缘Nusap1基因蛋白表达与早期复发的关系

目的检测Nusap1基因蛋白在肝癌手术切缘中的表达情况及其与肿瘤早期复发的关系。方法选择常规病理学检查手术切缘为阴性的原发性肝癌标本61例,用免疫组化法检测手术切缘Nusap1基因蛋白表达情况。结果肝癌手术切缘中Nusap1蛋白表达阳性有21例,其中15例术后早期复发(71.4%);阴性40例,术后仅12例出现早期复发(30%);阳性组术后早期复发率明显高于阴性组,差异有显著性(P<0.05)。结论肝癌手术切缘中Nusap1蛋白表达与术后早期复发明显相关,可预测肝癌术后早期复发高危患者及指导术后辅助治疗。

实时荧光定量检测肝细胞肝癌SATB1 mRNA的表达及其临床意义

目的探讨肝癌中核基质结合区结合蛋白-1的表达及其临床意义。方法用TRIZOL提取102例肝癌组织及对应的癌旁组织,并将其逆转录为cDNA。用实时荧光定量PCR方法检测肝细胞肝癌中SATB1mRNA的表达,并分析SATB1基因的表达程度与患者临床病理参数、术后复发与转移的关系。结果肝细胞肝癌组织中SATB1的表达是癌旁组织的3.27倍(P<0.001),有统计学差异。癌组织中SATB1mRNA表达的高低与肝硬化、AFP、肿瘤大小、癌栓、病理分化、TNM分级、术后复发转移有关系(P<0.05)。与性别、年龄、乙型肝炎表面抗原、丙型肝炎抗体、肿瘤的数目、包膜无关(P>0.05)。SATB1mRNA显著高表达组、高表达组、低表达组的复发率分别为82.68%,0,0;而三组的一年累计生存率分别为0,52.63%,100%。结论 SATB1mRNA的表达与肝癌的复发转移有关,SATB1有望成为肝癌复发与转移的一个新的预后指标。

肝细胞肝癌中Galectin-9 mRNA表达及其临床意义

目的:探讨Galectin-9 mRNA在肝细胞肝癌(简称肝癌)中的表达及其临床意义。方法:用TRIZOL法从89例肝癌患者手术切除的肝癌组织及癌旁组织中提取总RNA并反转录成cDNA,荧光定量PCR检测其Galetin-9 mRNA的表达量。结果:癌组织中的Galectin-9 mRNA表达较癌旁组织表达下降,仅为癌旁组织的0.504倍,两者比较差异有统计学意义(P<0.001);癌组织中的Galecin-9 mRNA表达的程度与肿瘤的大小、术前转移、病理分化、TNM分级、术后复发存在相关性(P<0.05);而与性别、年龄、HBsAg、AFP、肝硬化、包膜完整性无相关性(P>0.05)。结论:Galectin-9 mRNA的表达水平与肝癌的病理分化、转移、复发有关,可能成为诊断肝癌及判断预后的新生物学指标或治疗肝癌的潜在靶点。

SATB1在不同侵袭潜能肝癌细胞株的表达

目的研究SATB1在不同侵袭潜能的人肝癌细胞株表达状况。方法分别用荧光定量PCR,RT-PCR,Western blotting及免疫荧光方法,检测人永生化肝细胞株HL-7702及肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721、MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3中SATB1的表达。结果相对于HL-7702,SATB1 mRNA在其余5种肝癌细胞株中都有较高程度的表达,其中高侵袭性HCCLM3、MHCC97H表达最高,MHCC97L次之,SMMC-7721、HepG2最低(P<0.001);Western blotting分析HepG2、SMMC-7721、MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3肝癌细胞株的蛋白相对表达量分别为0.271±0.002;0.351±0.023;0.621±0.026;0.878±0.026;1.236±0.006,高侵袭性HCCLM3相当于HepG2的4.6倍(P<0.001);免疫荧光显示SATB1在5种肝癌细胞株的胞浆和胞核内均有分布,高侵袭性细胞株HCCLM3、MHCC97H表现强阳性染色。结论 SATB1在不同侵袭潜能肝癌细胞株中的表达有差异,与肝癌转移密切相关。

双mTORC1/2抑制剂AZD2014可抑制裸鼠体内的人肝细胞癌的生长

目的体内研究双mTORC1/2抑制剂AZD2014对肝细胞癌是否具有抗癌作用。方法将肝癌细胞HCCLM3接种至祼鼠皮下,待形成明显瘤块,随机分成2组(对照组和AZD2014组),每组各5只。AZD2014组腹腔内注射AZD2014,5 mg/kg体质量,1次/d;对照组腹腔内注射药物溶剂2.5 mL/kg体质量,1次/d。定期测量肿瘤大小,绘制肿瘤体积增长曲线。给药后第24天,剥离皮下肿瘤,测量肿瘤的体积,并行HE染色和免疫组织化学检测细胞增殖、凋亡和EMT相关蛋白。结果AZD2014组肿瘤的体积自给药后几乎未再增大,而对照组中的肿瘤体积随着时间的延长而不断增大(P<0.001)。HE染色显示AZD2014组中发生坏死的细胞显著多于对照组。免疫组化检测发现AZD2014组中细胞增殖核抗原Ki-67和血管内皮细胞标志蛋白CD31的表达量显著低于对照组,而促凋亡蛋白Cleaved caspase-3显著高于对照组;此外,AZD2014组间质细胞表型蛋白N-cadherin和Vimentin的表达水平显著低于对照组,而上皮细胞表型蛋白E-cadherin的表达水平则显著高于对照组。结论AZD2014可以抑制肝细胞癌的增殖、微血管形成和EMT进程,同时还可以促进肝癌细胞发生坏死和凋亡。

当前易地扶贫搬迁工程质量安全监管中存在五大问题及对策

2016年易地扶贫搬迁建设项目已接近尾声,随州市住建委和随县住建局在联合调研中发现,当前在搬迁项目质量安全中还存在五大问题。根据这些问题,市住建委和随县住建局提出六条工作建议,供领导参谋决策。

盐酸小檗碱对大鼠体内他克莫司药动学的影响

目的:研究盐酸小檗碱单次、多次给药对大鼠体内他克莫司药动学的影响,为两者联合用药提供参考。方法:将30只大鼠随机分为5组,每组6只,第1组大鼠单次灌胃他克莫司;第2组大鼠每日灌胃他克莫司2次,连续给药1周;第3组大鼠先单次灌胃盐酸小檗碱,5 min后单次灌胃他克莫司;第4组大鼠先每日灌胃他克莫司2次,连续给药1周,第8天时先灌胃盐酸小檗碱5 min后再灌胃他克莫司1次;第5组大鼠每日灌胃盐酸小檗碱2次,每次间隔5 min后相应灌胃他克莫司1次,连续给药8 d。盐酸小檗碱给药剂量均为200 mg/kg,他克莫司给药剂量均为0.945 mg/kg。末次灌胃他克莫司后0、5、15、30 min和1、2、3、4、6、8、12 h,分别从各组大鼠的眼眶后静脉丛取血约0.3 m L,采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定大鼠全血中他克莫司的浓度,应用DAS2.0软件进行药动学研究。结果:与第1组比较,第3组大鼠体内的他克莫司药动学参数AUC_(0-12) h、AUC0-∞和MRT0-12 h显著降低(P<0.05),第4组大鼠体内他克莫司所有药动学参数差异均无统计学意义(P>0.05);与第2组比较,第4组大鼠体内他克莫司药动学参数AUC_(0-12) h显著降低、CLz显著升高(P<0.05),第5组大鼠体内他克莫司所有药动学参数差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:单次、多次灌胃盐酸小檗碱均对大鼠体内他克莫司的药动学有影响,表现在血药浓度有下降的趋势,需谨慎联用。

双mTORC1/2抑制剂AZD2014诱导的自噬对HCCLM3肝癌细胞增殖的影响

目的探讨双mTORC1/2抑制剂AZD2014诱导的自噬对人肝癌细胞株HCCLM3增殖的影响。方法体外培养人肝癌细胞株HCCLM3,培养过程中分别加入AZD2014、雷帕鸣或3-甲基腺嘌呤(3-MA),使终浓度分别为100 nmol/L、100 nmol/L和10 mmol/L。研究AZD2014对HCCLM3肝癌细胞自噬的影响时,按处理因素分为对照组、雷帕鸣组、AZD2014组、3-MA组、雷帕鸣+3-MA组和AZD2014+3-MA组,采用MDC染色法检测HCCLM3肝癌细胞中自噬囊泡的变化;研究AZD2014对HCCLM3肝癌细胞中自噬相关蛋白表达的影响时,按处理因素分为对照组、雷帕鸣组和AZD2014组,采用Western blotting检测HCCLM3肝癌细胞中自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ和Beclin-1的表达;研究AZD2014诱导的自噬对HCCLM3肝癌细胞增殖的影响时,按处理因素分为对照组、3-MA组、AZD2014组和AZD2014+3-MA组,采用CCK-8法检测HCCLM3肝癌细胞的增殖情况。结果MDC染色显示,与对照组比较,AZD2014处理后,HCCLM3肝癌细胞中自噬囊泡的数量较多、体积较大。Western blotting检测结果显示,AZD2014处理后,HCCLM3肝癌细胞中LC3B-Ⅱ和Beclin-1表达水平均明显高于对照组(P<0.05)。CCK-8法检测结果显示,自噬抑制剂(3-MA)可部分逆转AZD2014对HCCLM3肝癌细胞增殖的抑制作用。结论双mTORC1/2抑制剂AZD2014可通过诱导自噬抑制HCCLM3肝癌细胞的增殖,为AZD2014在肝癌分子靶向治疗中的临床应用提供了理论依据。

双mTORC1/2抑制剂AZD2014可抑制大鼠肝移植后的急性排斥反应

目的在同种异基因大鼠肝移植模型中验证AZD2014是否具有抑制肝移植术后急性排斥反应的作用。方法采用Kamada提出的“二袖套”法建立Lewis→BN同种异基因大鼠肝移植急性排斥反应模型,随机分成对照组和AZD2014组,各4只。AZD2014组腹腔内注射AZD2014药物,5 mg/kg,1次/d;对照组腹腔内注射药物溶剂2.5 mL/kg,1次/d。不同时间点取外周血检测肝功能(丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶和总胆红素)。记录生存时间,进行生存分析。移植肝脏行免疫组化检测CD3和Foxp3的表达水平,评估T淋巴细胞和Treg淋巴细胞浸润的程度;移植肝脏行HE染色,采用Banff方案评估肝移植术后排斥反应的严重程度。结果对照组在术后14 d内有3/4的大鼠死亡,而AZD2014组在术后14 d内无大鼠死亡,AZD2014组与对照组相比生存时间明显延长(χ^(2)=4.213,P=0.040)。对照组血清中ALT、AST和TBIL进行性升高,上述指标均高于同时间AZD2014组(P<0.05)。病理检查显示对照组移植肝内排斥反应明显重于AZD2014组(排斥指数P<0.01),对照组中T淋巴细胞(CD3阳性)浸润相较于AZD2014组更为严重(P<0.01),而Treg细胞(Foxp3阳性)明显少于AZD2014组(P<0.01)。结论双mTORC1/2抑制剂AZD2014可以有效地抑制同种异基因大鼠肝移植术后的急性排斥反应。

体外肝脏灌注技术研究现状及展望

急性肝衰竭病死率高,肝移植是唯一有效的治疗方法,但由于肝源短缺,迫切需要有效的等待肝源或肝自我再生期间的“桥接治疗”技术。体外肝脏灌注技术作为生物人工肝的一种类型,被寄望于能够暂时替代体内衰竭的肝脏,延长患者生命,从20世纪50年代至今不断有学者对其进行研究改进,随着新材料、新技术以及基因编辑工程的发展,近年来呈现新的研究热潮。该文对体外肝脏灌注的研究历史、现状以及面临的问题进行综述,并对未来发展方向进行进一步展望。

“双提双促”塑城市建设新常态 2017年随州市住建系统工作侧记

仲秋时节,走进古城随州,绿意盎然美如画,水光山色与人亲,无不展现出现代都市的典雅神韵。今年初,随州市住建委开展了以＂提能力、促履职尽责,提效率、促作风转变＂为主要内容的＂双提双促＂活动,认真贯彻落实全面从严治党的新要求,彻底转变了住建系统的工作作风,提升了员工的工作能力,塑起城市建设的新常态。

撸起袖子加油干 务实重行敢担当 2017年上半年随州城乡建设实现“量”“质”双优

7月22日,随州市住建系统召开半年工作总结会,晒出了该市城乡建设半年成绩单。从半年数据来看,城乡建设成绩斐然,呈现＂量＂＂质＂双优,大项目、大治理、大生态、大民生等工作扎实推进,城市更宜居,居民满意度进一步提高。近日,《中华建设》杂志社记者深入随州,对随州城乡建设进行实地探访,并采访了随州市住建委主要负责同志。

汉襄咽喉、鄂北明珠“那点事” 随州住建委迎难而上创“双百”城市篇

西走川陕，北通中原，南望江汉，国家历史文化名城湖北随州，自古就是连接荆楚与中原的重填，这个素有“汉襄咽喉，鄂北明珠”之称的区域，也是湖北最年轻的城市。炎帝神农故里、编钟古乐之乡、中国历史文化名城、国家园林城市等标签记录着随州已存的光辉，9636平方公里的土地上，还在续写看别样的风采。