大鼠骨髓间充质干细胞培养鉴定及复方扶芳藤合剂含药血清对细胞增殖的影响

目的:建立SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分离培养方法,观察不同浓度的复方扶芳藤合剂大鼠含药血清对大鼠BMSCs增殖的影响。方法:通过全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化BMSCs,对其进行细胞形态学观察,将BMSCs进行成骨、成脂定向诱导分化,采用流式细胞仪检测其表面标志物,分析其细胞周期,进行BMSCs鉴定;采用不同浓度(20%、10%和5%)的复方扶芳藤合剂含药血清和空白血清连续7 d对大鼠BM SCs进行干预,以CCK-8法检测其吸光度值,对比各组细胞生长情况。结果:BMSCs具有典型的成纤维样细胞形态,集落生长呈漩涡状。BMSCs成脂、成骨诱导后,油红O染色和茜素红染色均呈阳性。第3代BMSCs表型CD29、CD44、CD34、CD44表达分别为99.645%、99.677%、0.016%、0.133%;不同浓度的复方扶芳藤合剂含药血清和空白血清连续干预7 d后,CCK-8法检测显示:20%浓度的复方扶芳藤合剂含药血清组,其1~7 d的吸光度均值均高于20%浓度的空白血清组(P<0.05);10%的含药血清组的吸光度均值在3~7 d,高于10%的空白血清组(P<0.05);5%的含药血清组与5%的空白血清组比较无明显差异(P>0.05)。结论:全骨髓贴壁法分离、培养BM SCs,操作简单,方法稳定,可大量扩增BMSCs。扩增后的BMSCs具有间充质干细胞的生物学特性,具有多向分化潜能。复方扶芳藤合剂含药血清干预后的BMSCs增殖能力增强,其中20%浓度的复方扶芳藤合剂含药血清在本实验中为最佳干预浓度。

肾素-血管紧张素系统基因多态性与糖尿病及合并肾病的关系

目的探讨血管紧张素I转换酶(ACE)基因及血管紧张素原(AGT)基因与2型糖尿病(DM)及合并糖尿病肾病(DN)的相关性。方法分别用PCR、突变基因分离聚合酶链反应(MS-PCR)技术对195例2型DM患者和136例正常对照者的ACEI/D与AGTM235T多态性进行检测。结果(1)DM组ACE-DD基因型和D等位基因频率均比对照组显著增高(P<0.001)。(2)DN(+)组ACE基因型和等位基因频率与DN(-)组比较无显著性差异。(3)AGT基因型分布与等位基因频率在3组中均无显著性差异。(4)联合分析ACE-DD型及AGT-TT型对DN(+)、DN(-)的OR分别为4.17和3.16;均高于单基因DD型及TT型的OR值。结论(1)ACEDD基因型和D等位基因可能是广西地区人群2型DM的易感因素。(2)未发现ACEI/D或AGTM235T多态性单一因素与2型DM患者中DN的发生有关联。(3)ACE-DD基因型与AGTM235T-TT基因型在2型DM及DN发生中有协同作用。

基于科研能力培养的文献研讨式教学探索与实践——以医学分子生物学课程为例

文章结合课程特点和培养目标,在研究生医学分子生物学理论课中开展文献研讨式教学,总结教学效果,并提出教学反思和建议。文献研讨式教学有助于促进学生对知识的理解与掌握、增强学生理论联系实际的应用能力、激发学生学习的积极性与主动性、拓宽学生的专业视野、提高学生的科研能力。高校应努力加强师资力量培训,优化实施方案,强化师生合作,以充分发挥文献研讨式教学的优势,不断提高课堂效率。

中药防治糖尿病肾病的机制研究概况

本文概述了中药防治糖尿病肾病的机制,内容涉及糖代谢紊乱、氧化应激、脂代谢紊乱、肾血流动力学改变、细胞因子异常分泌等,并提出应将作用机制研究与中医基础理论紧密联系,揭示中药防治糖尿病肾病的整体作用机制。

2型糖尿病肾病患者ACE基因I/D、AGT基因T174M多态性分析

目的：探讨ACE基因I／D及AGT基因T174M多态性与2型糖尿病肾病的关系。方法：研究对象分为2型糖尿病组（DM组）和正常对照组，其中DM组根据有无肾病分为DN（＋）组和DN（-）组。分别用PCR技术、PCR-限制性片段长度多态性技术对ACEI／D、AGTT174M多态性进行检测。结果：（1）DN（＋）、DN（-）组的ACE-DD基因型（18.87％、14.81％）和D等位基因频率（48.11％、42.59％）均比对照组（8.09％、29.41％）显著增高（P〈0.05）；（2）DN（＋）组与DN（-）组比较，ACE、AGT T174M基因型分布、等位基因频率差异均无统计学意义；（3）联合多态分析显示，同时具有ACE-DD和AGT T174M-MM型对DN的0R值为4.21（95％CI：1.14-15.59）。结论：（1）ACE-DD基因型和D等位基因可能是广西地区人群2型糖尿病发生的易感因素；（2）ACEI／D、AGT T174M多态性单一因素与DN的发生无关联；（3）ACE-DD和AGT T174M-MM基因型同时存在可能是DN的易感联合基因型。

广西地区人群AGT基因多态性与2型糖尿病肾病关系的研究

[目的]探讨血管紧张素原(AGT)基因M235T及T174M多态性是否与广西地区人群2型糖尿病肾病(DN)的发病有关。[方法]243例研究对象分为2型糖尿病病例组(DM组,n=107)和正常对照组(n=136);DM组根据有无并发肾病分为DN(+)组(n=53)与DN(-)组(n=54)。分别用突变基因分离聚合酶链反应(MS-PCR)和PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对AGT M235T及AGT T174M多态性进行检测。[结果]AGT基因M235T多态位点在DN(+)、DN(-)及正常对照组中均以TT型多见,分别为0.717,0.667,0.640;三组间基因型分布构成比比较及等位基因频率构成比比较均无显著性差异。三组间AGT T174M基因型构成比比较及等位基因频率构成比比较均无统计学意义。[结论]未发现AGT基因M235T或T174M多态性与广西地区2型DN的发生有关联。

蛋白质组学技术在中药作用机理研究中的应用

介绍了蛋白质组学研究的主要技术,包括双向凝胶电泳、质谱分析、二维色谱与质谱联用技术、生物信息学,并从中药单体研究、单味中药研究、中药复方研究等方面介绍了蛋白质组学技术在中药作用机理研究领域的应用和前景。

复方扶芳藤合剂含药血清对大鼠体外模拟“造血龛”中造血干细胞增殖的影响

目的:通过体外共培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)和造血干细胞(HSC)模拟"造血龛",观察BMSCs+HSC Transwell共培养和BMSCs+HSC接触共培养模拟的"造血龛"中BMSCs对HSC生长的影响;将复方扶芳藤合剂含药血清及空白血清加入模拟的"造血龛"中,观察药物对HSC生长的影响。方法:采用全骨髓贴壁法体外培养SD雄性大鼠骨髓间充质干细胞至P3代,流式细胞仪检测其表面标志物,进行BMSCs鉴定。用MACS磁珠分选仪分选SD大鼠骨髓CD90.1+细胞(造血干细胞),流式细胞仪检测其表面标志物,进行HSC鉴定。将BMSCs和HSC共培养:Transwell共培养组(上室接种HSC、下室接种BMSCs),2D接触共培养组(在24孔板同时接种HSC与BMSCs),均连续培养7 d,期间每隔两天使用荧光显微镜观察"龛"中HSC的形态及细胞数量,使用CCK-8法检测"龛"中HSC吸光度值,绘制生长曲线;采用20%浓度的复方扶芳藤合剂含药血清和空白血清连续7 d对各组"龛"中干细胞进行干预,期间每隔两天用使用荧光显微镜观察各组"龛"中HSC的形态及细胞数量,CCK-8法检测各组"龛"中HSC吸光度值,绘制生长曲线,对比各组生长曲线的变化,分析各组"龛"中HSC生长情况。结果:BMSCs具有典型的成纤维样细胞形态,集落生长呈漩涡状。P3代BMSCs表型CD29、CD44、CD34、CD45表达分别为99.709%、99.734%、0.114%、0.013%。HSC在荧光显微镜下激发呈绿色荧光的均一圆形。HSC荧光显微镜下观测及生长曲线显示:各组"龛"中HSC数量均随着培养时间的增加而增加(P<0.05);自第5 d起,Transwell共培养组、2D接触共培养组的HSC吸光度值高于HSC单独培养组(P<0.05);含药血清Transwell共培养组的HSC吸光度值高于空白血清Transwell共培养组(P<0.05),含药血清2D接触共培养组HSC吸光度值高于Transwell共培养组(P<0.05)。结论:全骨髓贴壁法分离培养的BMSCs具有间充质干细胞的生物学特性。MACS磁珠分选可快速获得高纯度HSC;与单独培养的HSC组相比,Transwell共培养模拟"龛"组、2D接触共培养模拟"龛"组内的BMSCs均能促进HSC增殖,2D接触共培养组更为明显;复方扶芳藤合剂含药血清能进一步增强模拟"龛"中BMSCs促进HSC增殖能力,对2D接触共培养组促HSC增殖强度比对Transwell共培养组更为明显。

铁皮石斛提高小鼠运动能力、抗疲劳能力和免疫水平的量效关系分析

【目的】明确铁皮石斛的最低起效剂量,为铁皮石斛保健产品的研发提供参考依据。【方法】根据《中华人民共和国药典》推荐量设5个不同剂量组(推荐量组、1/2倍推荐量组、1/4倍推荐量组、1/8倍推荐量组和1/16倍推荐量组)和对照组,以不同剂量铁皮石斛提取原液给小鼠灌胃,持续灌胃30 d后分别测定小鼠的负重游泳时间、游泳后血清乳酸与尿素水平、碳粒廓清指数等指标。【结果】推荐量组和1/2倍推荐量组的小鼠负重游泳时间显著高于对照组(P<0.05,下同),其小鼠游泳后血清乳酸水平显著低于对照组。在1/8倍推荐量以上的各剂量组小鼠碳粒廓清指数均显著高于对照组。即铁皮石斛提高小鼠运动能力和抗疲劳能力的最低剂量50.00 mg/kg·d(折合石斛多糖8.18 mg/kg·d),提高小鼠免疫力的最低剂量12.50 mg/kg·d(折合石斛多糖2.05 mg/kg·d)。【结论】铁皮石斛在低于《中华人民共和国药典》推荐量的情况下仍然具有具有一定的保健功能。

天麻钩藤饮与高血压病肝阳上亢证方证相关的蛋白质组学初步研究

目的揭示天麻钩藤饮与高血压病肝阳上亢证"方证相关"的现代生物学基础。方法制作高血压病肝阳上亢证细胞模型,用天麻钩藤饮含药血清干预细胞模型,利用双向凝胶电泳(2-DE)技术筛选差异表达的蛋白点。结果高血压病肝阳上亢证组与健康对照组比较,差异蛋白有25个,其中,有13个蛋白上调,12个蛋白质下调;天麻钩藤饮组与高血压病肝阳上亢证组比较,差异蛋白有12个,其中,有5个蛋白上调,7个蛋白质下调。结论基于细胞模型的中医"方证相关"蛋白质组学研究是可行的;调节这12个差异蛋白点,可能是天麻钩藤饮治疗高血压病肝阳上亢证疗效的重要分子基础。

补阳还五汤与高血压病气虚血瘀证“方证相关”的蛋白质组学研究

揭示补阳还五汤与高血压病气虚血瘀证"方证相关"的现代生物学基础,制作高血压病气虚血瘀证细胞模型。用补阳还五汤含药血清干预细胞模型,利用双向凝胶电泳(2-DE)及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS/MS)技术筛选及鉴定差异表达的蛋白点。并对其进行生物学分析。结果高血压病气虚血瘀证组与健康对照组比较,差异蛋白质点有30个。其中,有16个蛋白上调,14个蛋白质下调。补阳还五汤组与高血压病气虚血瘀证组比较,差异蛋白质点有14个。其中,有9个蛋白上调,5个蛋白质下调。MALDI-TOF-MS/MS鉴定出:高血压病气虚血瘀证组与健康对照组差异蛋白点共有8个蛋白被成功鉴定出来。表达上调的蛋白有肽基脯氨酰异构酶A、肽基脯氨酸顺反异构酶A样1亚型、真核翻译起始因子5A-1 B亚型、微管蛋白beta-2C、CRA_b亚型、3-羟酰辅酶A脱氢酶2型异构体2。表达下调的蛋白有丙酮酸激酶同工酶M1亚型、抑制蛋白-1、抑制蛋白-1 1亚型、补阳还五汤组与高血压病气虚血瘀证组差异蛋白点共有3个蛋白被成功鉴定出来。表达上调的蛋白有丙酮酸激酶CRA_c亚型、热休克蛋白27;表达下调的蛋白有膜联蛋白A1,CRA_b亚型。这些蛋白多与促进或抑制细胞凋亡有关。说明高血压病气虚血瘀证存在着细胞凋亡,补阳还五汤可以纠正高血压病气虚血瘀证引起的细胞凋亡。这些差异蛋白可以作为高血压病气虚血瘀证的标志蛋白或补阳还五汤的作用靶点,抑制细胞凋亡可能是补阳还五汤与高血压病气虚血瘀证"方证相关"的现代生物学基础之一。

石斛多糖在饮料加工过程及货架期内的变化规律

[目的]研究石斛多糖在铁皮石斛饮料加工过程及成品货架期内的变化规律,为铁皮石斛功能产品的加工工艺优化提供科学参考.[方法]以铁皮石斛为原料、多糖提取率和多糖含量为指标,研究铁皮石斛饮料加工过程及成品存放对石斛多糖的影响.[结果]多糖提取率随粉碎粒度的增加而增加,铁皮石斛经超微粉碎（过300目）的多糖提取率最高（94.7％）;铁皮石斛超微粉末水煮沸10～40 min均能获得90.0％以上多糖提取率,但煮沸时间延长至60 min会造成多糖损失;洗涤滤渣可增加多糖回收;泵送操作对多糖含量无影响;高压灭菌导致石斛多糖损失约6％;无论冷藏与否,在180 d货架期内铁皮石斛饮料的石斛多糖含量无明显变化.[结论]粉碎粒度和煮沸时间是影响石斛多糖提取效果的关键因素,应作为铁皮石斛多糖饮料生产工艺的首选参数.

Ⅱ相代谢酶基因多态性与广西肝癌发生的关系

目的 探讨Ⅱ相代谢酶谷胱甘肽硫转移酶M 1、T 1(GSTM 1、GSTT1)及微粒体环氧化物水解酶 (mEH )基因多态性与广西肝癌易感性的关系 ,以及基因与基因间的相互作用。方法 采用多重PCR、PCR RFLP技术 ,对广西地区 10 5例肝癌患者及 15 1例健康对照的GSTM 1、GSTT 1、mEH基因型进行检测。结果 GSTM 1基因缺失率在病例组与对照组中分别为 64 .76%和5 0 .99% ,两者比较有显著性差异 (P <0 .0 5 ,OR =1.77) ;病例组GSTT 1基因缺失率 (4 0 .95 % )高于对照组 (3 3 .11% ) ,mEH 3种基因型频率在病例组分别为 2 7.62 %、2 1.90 %、5 0 .48% ,对照组则分别为 2 1.19%、3 4.44 %、44 .3 7% ,两组比较无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;GSTM 1、T 1基因同时缺失的个体患肝癌的危险性增大了 1.2 2倍。结论 GSTM 1、T1基因同时缺失是肝癌的易感因素 ,可作为肝癌高危人群筛选的标记物。

人Cdc25C基因克隆及其原核表达载体的构建与表达

目的:构建人Cdc25C基因的克隆载体和原核表达载体,并诱导其在大肠杆菌中表达.方法:从人肝癌细胞株Bel-7404中提取总R N A,经RT-P C R法扩增人C d c25C c D N A后,将其正确插入克隆载体pMD18-T和表达载体pET-32a(+),并转化至BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS和Transetta(DE3)三种感受态大肠杆菌中,分别采用0.25 mmol/L IPTG和ArtMediaTM Protein Expression自动诱导表达培养基诱导表达,并对纯化的融合蛋白进行考马斯亮蓝染色和质谱分析鉴定.结果:成功扩增了Cdc25C基因,并获得p M D18-T-C d c25C克隆载体和p E T-32a(+)Cdc25C表达载体;重组质粒在BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS和Transetta(DE3)三种感受态大肠杆菌中均诱导表达出TRx-His-Cdc25C融合蛋白;考马斯亮蓝染色和蛋白质谱分析结果显示基因重组蛋白与目的蛋白相符.结论:获得肿瘤相关抗原Cdc25C重组蛋白,为后续研究奠定基础.

肝癌患者GSTM1、GSTT1基因多态性分析

目的:探讨谷胱甘肽硫转移酶G STM 1、G STT 1基因多态性与广西肝癌的关系。方法:应用多重PCR技术对广西地区105例肝癌患者和151例健康对照者的G STM 1、G STT 1基因多态性进行分析。结果:G STM 1空白基因型频率在病例组和对照组分别为6 4.7 6%和5 0.9 9%,二者差异有统计学意义(P=0.028 7),OR值为1.77。病例组G STT 1空白基因型频率为40.95%,高于对照组的33.11%,但二者差异无统计学意义(P=0.199),OR值为1.4。联合多态分析显示,同时携带G STM 1、GSTT1空白基因型的个体患肝癌的危险性增加了1.22倍。结论:GSTM1、GSTT1同时为空白基因型的个体是肝癌的易感人群,应注重个人防护。

载脂蛋白B基因第29外显子EcoRI位点基因变异与冠心病、脑梗死易感性的关系

[目的]探讨载脂蛋白B基因第29外显子EcoRI位点基因变异与冠心病、脑梗死易感性的关系。[方法]采用PCR(聚合酶链反应)技术体外扩增载脂蛋白B基因第29外显子EcoRI位点的基因片断,并用限制性内切酶消化,然后通过电泳判断。[结果]分别在94例正常对照组、55例冠心病组和45例脑梗死组中分别发现有6例、11例和8例个体发生突变,个体突变阳性率分别为6.315%、20%、17.778%,个体阳性率在正常组和冠心病组之间有显著性差异(P<0.05)。[结论]广西地区人群冠心病、脑梗死的发生与EcoRI位点基因突变有关联。

与临床紧密结合的生物化学教学方法实践与体会

当前，我国现行的医学教育基本上是采用基础、临床、实习三段式教学。这种传统的医学教育教学模式由于过度地强调课程知识的系统性和完整性，而忽略了课程的交叉渗透与融合，从而导致基础与临床脱节，理论与实践脱节，这是现行医学教育教学过程中遇到的最主要问题。由于基础与临床的脱节，给学生在学习过程中带来了两个不利影响：一是学生对基础课程的学习感到枯燥、乏味，感觉不到课程学习对将来所从事职业的帮助和价值，因而缺乏学习积极性和主动性；

高效液相色谱法测定大鼠体内复方扶芳藤合剂含药血清中人参皂苷Rb1的含量

[目的]建立SD大鼠体内复方扶芳藤合剂含药血清中人参皂苷Rb1的含量测定方法。[方法]用复方扶芳藤合剂原液对SD大鼠灌胃,制备大鼠含药血清。含药血清中加入乙腈使蛋白变性,离心后取上清液用氮吹法浓缩纯化制备检测样本。采用高效液相色谱法,色谱柱:welchΜltimate XB-C18柱(5μm,4.6 mm×250 mm);流动相:V(乙腈)-V(水)(33∶67),流速:1.0 ml/min,柱温:25℃,进样量:10μl,检测波长:203μm。[结果]人参皂苷Rb1在1.02~16.32μg范围内,其峰面积Y与进样量X(μg)呈良好线性关系,r^2=0.9995;平均加样回收率为102.4%;RSD为1.26%(n=6)。[结论]采用该方法对SD大鼠体内复方扶芳藤合剂含药血清中人参皂苷Rb1的含量进行测定,结果稳定,重复性良好。