抗-c、抗-E、抗-Jk^(a)和抗-Fy^(a)复杂联合抗体的鉴定

目的:探讨多种血型血清学方法的联合运用在复杂抗体鉴定中的作用。方法:采用盐水法和微柱凝集法检测患者的血型抗原,采用盐水法筛选及鉴定患者血清中的Ig M类抗体,采用凝聚胺法、抗球蛋白法、微柱凝集法、酶法和吸收放散法筛选及鉴定Ig G类抗体。结果:检出1例患者血型为B型/CCDee/Jk(a-b+)/Fy(a-b+)。患者血清与谱细胞反应,在盐水介质中呈抗-E格局;在微柱凝集卡中全阳性,但与经木瓜酶处理的谱细胞反应出现2个阴性。参照格局表考虑存在抗-c、E和抗-Jk^(a)抗体,以及1种易被木瓜酶破坏的血型抗原对应的抗体。选用特定表型的红细胞对患者血清进行吸收放散试验,检出Ig G类抗-c、抗-E、抗-Jk^(a)和抗-Fy^(a)抗体。结论:联合运用多种血型血清学方法证实该患者血清中存在Ig M类抗-E和Ig G类抗-c、抗-E、抗-Jk^(a)及抗-Fy^(a)联合抗体。

广西地区汉、壮和瑶族人群CD36缺失结构实验分析和特征研究

目的建立CD36缺失结构的试验鉴定方法,调查广西地区汉、壮、瑶族人群CD36缺失频率及分布特征。方法建立血小板流式细胞荧光免疫检测试验(PIFT-FC)对广西地区4 621名无血缘关系的汉、壮、瑶等民族献血者血小板CD36的表达作筛查,以血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定试验(MAIPA)对初筛CD36缺失者复检,以单核细胞流式细胞荧光免疫检测试验(MIFT-FC)检测CD36缺失者的单核细胞CD36的表达,对CD36缺失型个体作缺失型的亚型分型及CD36缺失结构的研究。结果 PIFT-FC和MAIPA筛查出广西汉、壮、瑶族个体CD36的总体缺失率是4.13%(191/4 621),其中汉族人群的缺失率为3.59%(109/3 036)、壮族为5.76%(80/1389)、瑶族为2.38%(2/84)。对其中117名CD36缺失个体分型检测:Ⅰ型CD36缺失的总体比例为41.03%(48/117),分别是汉族人群39.19%(29/74)、壮族43.90%(18/41)、瑶族50%(1/2);Ⅱ型CD36缺失的总体比例58.97%(69/117),分别是汉族人群60.81%(45/74)、壮族56.10%(23/41)、瑶族50%(1/2)。结论成功建立PIFT-FC、MAIPA和MIFT-FC试验;广西汉、壮、瑶民族人群间的CD36缺失结构有差异,壮族人群CD36缺失率较高,显示出其民族特征。

血小板免疫学实验室的建设及应用

目的建立血小板免疫学实验室,为临床提供血小板免疫学检测服务,并进行相关的研究。方法分别建立血小板血清学、流式细胞术及分子分型3个功能实验室,从血清学和分子生物学水平建立各种血小板抗原、抗体检测方法。结果建立了血小板抗原、抗体检测方法,共检测标本426份,解决55例患者血小板输注无效的临床问题。结论成功地建立了血小板免疫学实验室,为临床提供血小板免疫学检测相关服务,科研成果在国际上产生了一定的影响。

常温和冰冻保存条件下单采血小板制品凝血功能的差异

目的探讨常温(22±2)℃振荡、-80℃冰冻保存下单采血小板制品凝血功能的差异。方法随机选取16份单采血小板,应用无菌接管技术将每份单采血小板样本分成8份。其中4份于(22±2)℃常温振荡保存,分别在采集当日、第3天、第5天、第8天进行检测;另4份置于冻存管中-80℃保存,分别在采集后第3天、第5天、第8天及1年进行检测。采用血细胞计数仪检测血小板计数、平均血小板体积(MPV),采用血栓弹力图检测凝血时间、α角、最大振幅、凝血指数,采用流式细胞术检测血小板CD62P表达水平、膜联蛋白V(Annexin V)结合率。结果采集后各时点,随着保存时间增加,常温保存的血小板凝血时间延长而凝血指数降低,但冰冻保存的血小板凝血时间缩短而凝血指数增高;与常温保存的血小板比较,冰冻保存的血小板的各时点凝血时间更短,而采集后第5天、第8天的凝血指数更高(均P<0.05)。采集后各时点,两种保存条件下血小板的CD62P表达水平和Annexin V结合率均随着保存时间增高;与常温保存的血小板比较,冰冻保存的血小板各时点的Annexin V结合率更高,采集后第5天、第8天的CD62P表达水平更低(均P<0.05)。采集后各时点,两组的血小板计数、MPV、最大振幅、α角差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论冰冻保存的单采血小板具有更稳定的凝血功能,保存期长,可作为常温保存单采血小板制品的补充。

南宁地区壮族人群ABO和Rh血型分布调查与分析

目的通过调查南宁地区壮族人群ABO和Rh血型的分布情况,指导本地区科学地进行无偿献血招募及合理储存血液。方法对2 052份南宁地区壮族人群的血样进行ABO和Rh血型鉴定,采用χ2检验是否符合Hardy-Weinberg平衡法则,并与其他地区、民族的分布特征相比较。结果南宁地区壮族人群ABO血型分布特征为O>B>A>AB,O型比例最高(46.78%),AB型比例最低(4.34%),A、B、O基因频率分别为0.131 9、0.181 5、0.686 6,血型分布符合Hardy-Weinberg平衡法则;RhD阳性比例为99.90%,阴性比例为0.10%,且低于汉族人群;未发现表型为ccdE、CcdE、CCdee、CCdE、CCDEE和ccDee。结论南宁地区壮族人群ABO和Rh血型分布保留着自身独有的特征,极低的RhD阴性比例将给长期反复输血的患者带来严重的输血困难。

造血干细胞移植术后抗-CD36抗体介导的血小板输注无效症和相关病例的实验研究

目的:对造血干细胞移植术后由抗-CD36抗体介导血小板输注无效症和相关病例进行实验研究,对患者和造血干细胞供者的CD36表型和CD36基因,以及相关抗体的特征进行分析和鉴定,探讨患者的血小板输注治疗效果。方法:采用流式细胞术检测患者及造血干细胞供者CD36在血小板及单核细胞上的表达;采用本实验室建立的快速血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测技术(fast monoclonal antibody-specific immobilization of platelet antigen,F-MAIPA)鉴定患者血清中的血小板抗体;采用测序(polymerase chain reaction sequence-based typing,PCRSBT)方法分析患者及供者CD36基因序列及HPA序列;应用STR-PCR(short tandem repeat polymerase chain reaction,STR-PCR)技术监测患者植入的证据。从CD36缺失血小板库中挑选CD36表达缺失的供者血小板给予患者输注,并监测其血小板计数。结果:造血干细胞供者为CD36+,而患者为I型CD36缺失者。患者移植后血清中存在抗-CD36抗体并排除HLA及HPA相关抗体;患者CD36外显子测序提示为1个新的CD36突变基因,即CD36Exon 6-1G>C纯合子(突变位于剪切位点)突变基因所致的CD36缺失。移植后18 d患者的STR位点、HPA以及CD36型别已完全转化为供者型别(完全嵌合),移植后96 d患者血小板、单个核细胞上已有CD36表达。给该患者输注CD36缺失血小板后血小板计数明显提高。结论:对造血干细胞移植术后由抗-CD36抗体引起的输血小板无效症,须对CD36在移植中的同种免疫反应给予足够重视。为了确保血小板输注有效,对CD36缺失患者需给予CD36缺失血小板输注。

抗-CD36介导血小板输注无效的实验研究——附4例病例报告

目的对CD36(GPⅣ)同种抗体介导血小板输注无效(PTR)的4例中国广西病例作确诊试验。方法应用血小板流式细胞荧光免疫检测技术(PIFT-FC)和血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定试验(MAIPA)检测及鉴定4名临床PTR患者血清中的抗-HPA和抗-CD36;以PIFT-FC试验和单核细胞检测流式细胞荧光免疫检测技术(MIFT-FC)检测CD36抗原在患者血小板及单核细胞上的表达情况和作CD36缺失的表现型分型。对患者CD36作基因序列分析和以DNA为基础的PCR-SSP技术鉴定并确认CD36基因突变点,以证实患者CD36的缺失。结果 4名PTR患者体内都含抗-CD36且均为CD36Ⅰ型缺失者,患者CD36基因检测分别为1例380C>T、2例329-330 del AC和1例1156C>T基因突变。结论确诊4例PTR均为抗-CD36介导;提示在临床遇到PTR病例时,鉴于中国人群有较高的CD36缺失率特征,除考虑HPA及HLA等的免疫因素外,应对抗-CD36介导的同种免疫反应而产生的血小板免疫异常予以重视,并给予针对性的诊断和治疗。

国内首例抗HPA-5b引发的新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜的检测、诊断及分析

本研究旨在探讨抗HPA-5b抗体引发的新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜(NAITP)的实验检测及临床诊断。临床监测患儿血小板计数及其他临床表现;多重PCR及DNA测序检测患儿及其父母HPA-1-21bw系统基因型;流式细胞术(FCM)和血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测技术(MAIPA)检测及鉴定患儿及其母亲血清中的血小板特异性抗体。结果表明:患儿临床症状较轻,基因分析显示患儿为HPA-5ab,父亲为HPA-5ab,母亲为HPA-5aa;患儿母亲血清中含与父亲血小板反应的血小板特异性抗体为抗HPA-5b抗体。结论:该病例为抗HPA-5b抗体引起的新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜。

第2胎抗HPA-3a抗体可使新生儿同种免疫血小板减少症患儿病情加重

目的 观察1例第2胎抗HPA-3a抗体致新生儿同种免疫血小板减少症（NAIT）患儿的病情与治疗情况。方法 观察患儿症状和体征,并记录血小板（PLT）;筛查并鉴定患儿及其母亲血清中血小板特异性抗体;检测患儿及其父母HPA-1~21bw系统基因分型;监测患儿体内抗体效价波动情况并筛选配合性血小板给予输注治疗。结果 患儿出生后15 min内出现瘀斑、皮下出血点,脑部B超提示左侧室管膜下出血。患儿及母亲血清中均含与患儿父亲血小板反应的特异性抗体,经鉴定为抗HPA-3a抗体。HPA-1~21bw系统基因分析显示患儿与其父母HPA-3不相容：母亲为HPA-3bb、父亲为HPA-3aa、患儿为HPA-3ab。患儿共输注了4次相容血小板（HPA-3bb）,并给予静脉输注γ球蛋白及类固醇激素治疗,于出生后第29天PLT恢复正常后出院。结论 第2胎抗HPA-3a抗体致NAIT患儿经对症治疗及输血治疗PLT恢复正常后出院,但临床表现及诊治过程较该产妇上一个患儿严重及复杂。

ITP患者血小板特异性自身抗体的检测及意义

目的检测特发性血小板减少性紫癜(ITP)与非ITP患者血浆及血小板膜上糖蛋白特异性自身抗体,评价其应用价值。方法应用PAKAUTO试剂盒分别检测20例ITP和31例非ITP患者血小板特异性自身抗体。结果 ITP组血小板特异性自身抗体阳性率为55.0%,显著高于非ITP组的6.5%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血小板自身抗体检测在ITP的诊断中有较大的应用价值。

南宁地区血小板输注无效患者血小板同种抗体检测及特异性分析

目的分析血小板输注无效(PTR)患者血小板同种抗体的特异性,以便更好的为临床服务。方法检测并鉴定72例PTR患者血小板同种抗体的特异性;采用流式细胞术(FCM)对其中4例患者进行血小板、单核细胞膜上的CD36抗原检测;基因测序法对上述4例患者进行CD36抗原缺失分型。结果 72例PTR患者中有22例产生血小板同种抗体,其中18例为抗HLA抗体,3例为抗CD36抗体,1例为抗CD36及抗HLA抗体并存;4例含抗CD36抗体的患者经证实均为Ⅰ型CD36缺失个体,基因检测也证实为CD36基因突变所致的CD36抗原缺失。结论 PTR患者血小板同种抗体以抗HLA多见,其次为抗CD36;应对CD36抗原给予足够重视。

国际各类品种血小板膜糖蛋白单克隆抗体试剂对血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测技术的影响

本研究按国际输血学会第14届国际血小板免疫学研讨会和合作研究项目的要求,分析比较国际常用血小板膜糖蛋白单克隆抗体(McAb)各类品种对血小板抗原McAb特异性免疫固定检测技术(MAIPA)检测血小板抗体结果的影响。向参加该研究的30个实验室发放10份含已知血小板抗体特异性的血清和1份阴性对照血清样本,以及9份不同类别(GPⅡb/Ⅲa、GPⅠa/Ⅱa、GPⅠb/Ⅸ及GPⅣ)及克隆编号的血小板膜糖蛋白McAb和统一的实验研究技术方案,各参加实验室按方案进行检测并反馈结果数据,比较同一糖蛋白种类不同的McAb对MAIPA检测结果的影响。结果表明:GPⅡb/Ⅲa中AP2,Gi-5,PL2-73等几种McAb的平均S/CO值较高;GPⅠa/Ⅱa的McAb中MBC202.2和143.1的平均S/CO值较高;GPⅠb/Ⅸ的McAb中142.11和CLB-MB45(CD42b)的平均S/CO值较高;GPⅣ的McAb中131.4的平均S/CO值较高。结论不同的McAb品种对样本的检测结果存在差异,McAb对MAIPA的灵敏度有重要影响。用MAIPA法检测血小板抗体时应同时使用相同糖蛋白种类而不同克隆号的McAb,以防止血小板抗体的漏检。

位于CD36基因剪切位点的2个新突变及其导致CD36缺失的分子基础

目的:对在广西人群中发现的2个位于CD36剪切位点的新基因突变,以及它们导致CD36缺失的分子基础和在人群中的发生率进行研究。方法:对在广西人群中发现的2例CD36缺失个体(HHC和WGM)使用DNA测序和cDNA克隆测序,检测他们的CD36外显子序列及mRNA蛋白编码区序列,对所发现的CD36 mRNA异常转录本建立真核表达细胞株并用Western blot实验验证异常转录本对CD36表达的影响。对所发现的新突变基因建立DNA PCR-SSP基因分型方法,在广西地区的110名CD36缺失个体群和广西地区随机的296名人群间展开人群分布调查。结果:在HHC和WGM个体中,发现了CD36剪切位点新突变CD36 c.430-1G>C,且在WGM个体中还发现了CD36 c.1006+2T>G的剪切位点新突变。cDNA克隆测序显示,CD36 c.430-1G>C可导致c.429_430ins[430-17_430-2;C](p.Ala144fsTer1)和c.430_609del(p.Ala144_Pro203del,GenBank注册号:HM217023.1)2种CD36 mRNA异常转录本的产生,而CD36 c.1006+2T>G可导致c.819_1006del(p.Ser274GlufsTer16)(GenBank注册号:HM217025.1)CD36 mRNA异常转录本的产生。通过建立的真核表达细胞株及Western blot实验验证了以上3种异常转录本均可导致CD36表达缺失。对所发现的2个剪切位点突变基因展开的人群发生率的研究显示,在110名CD36缺失个体群和随机的296名人群中,CD36 c.430-1G>C突变发生率分别为10.91%(12/110)和1.35%(4/296),而CD36 c.1006+2T>G突变的发生率分别为2.73%(3/110)和0(0/296)。结论:本研究发现了2个位于CD36基因剪切位点的新突变,初步阐明了它们导致CD36缺失的分子基础及在广西人群中的分布特征,为中国人群CD36缺失的分子机制及特征研究提供了实验和理论依据。

全球42个血小板免疫学实验室血小板同种抗体检测质量测评

目的主持国际输血学会第14届国际血小板免疫学研讨会和合作研究项目,对参加合作研究项目的全球42个血小板免疫学实验室的血小板抗体检测技术和质量状况进行测评。方法南宁输血医学研究所组织并向参加合作研究的各实验室提供9份含抗血小板特异性抗体的质控标本,各实验室以本室的技术或市场化的技术作检测,按所提供的记录表格对各质控标本的反应结果作报告。结果23个国家的36个实验室参加了本合作项目,35个实验室反馈了各自实验室的研究结果,9个质控标本抗体特异性鉴定的一致率为20%—97.14%,抗体特异性分别为抗-HPA-1a、抗-HPA-1b、抗-HPA-3a、抗-HPA-3a、抗-HPA-3b、抗-HPA-5b、抗-HPA-5a、抗-GPIV及抗-HPA-5b+15b,一致率最低为抗-HPA-3b,最高为抗-HPA-5b和抗-HPA-5a。各实验室采用的技术共计有10余种,血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测技术(MAIPA)是采用最多的技术。结论本合作项目成功地对35个国际血小板免疫诊断实验室的血小板特异性抗体的检测技术和质量进行了测评和分析报告。

四分位极差在血站ELISA质控的应用研究

目的使用四分位极差和中位数计算标准比值(稳健Z-分数),提高Z-分数图识别质控离群值的能力。方法基于四分位极差对参数σ进行估计具有稳健性的特点,结合实例和模拟数据,使用四分位极差和中位数计算稳健标准比值(稳健Z-分数),同时使用标准差和均值计算标准比值(Z-分数),并比较两种分数图识别质控离群值的能力。结果 4组质控数据的离群值,稳健Z-分数图检出离群值的例数与探索性统计一致,Z-分数图则仅能检出1例。结论应用四分位极差和中位数指标构成的稳健Z-分数图在非正态分布的质控数据中,对离群值的检出能力优于应用标准差和均值指标构成的Z-分数图。

血小板抗原谱细胞的建立在血小板同种抗体检测及鉴定中的应用

目的：建立血小板抗原谱细胞并应用于血小板同种抗体检测及鉴定。方法采用 PCR-SSP方法对南宁地区1500名无偿献血员做HPA 1-16基因分型，根据结果挑选O型血小板建立一组血小板抗原谱细胞，并用第14届ISBT血小板免疫学研讨会参比血清验证该组血小板抗原谱细胞的表型。后应用于临床血小板同种抗体检测及第14～15届 ISBT血小板免疫学研讨会样本检测。结果挑选了6个表型与基因型一致、覆盖 HPA 1-5和15系统的血小板建成血小板抗原谱细胞并成功应用于临床、科研样本检测及鉴定工作。结论成功建立血小板抗原谱细胞，为血小板同种免疫异常性疾病的诊断和研究提供了实验依据。

四种经血传播病原体对人类血清新蝶呤水平的影响

目的：研究乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、梅毒螺旋体（TP）和艾滋病病毒（HIV）感染对人体血清新蝶呤（neopterin，Npt）水平的影响，探讨在国内无偿献血人群中开展Npt水平检测意义。方法：收集医院乙型肝炎、丙型肝炎、梅毒和艾滋病患者（或混合感染患者）血清并检测其血清Npt水平，以健康无偿献血者血清Npt水平为对照，分析各组人群Npt水平差异。结果：无偿献血人群Npt平均水平为5．56nmol／L，HBV、HCV、TP和HIV等四种经血传播病原体感染者Npt平均水平分别为10．79nmol／L、19．46nmol／L、19．42nmol／L、43．06nmol／L，高于健康无偿献血人群且有统计学意义，特别是HIV患者或者合并感染患者，Npt水平为正常值的6倍左右。结论：乙型肝炎、丙型肝炎、梅毒和艾滋病患者血清Npt水平显著高于健康无偿献血人群．在国内无偿献血人群中开展Not水平检测具有一定的临床意义。

酶联免疫吸附试验与流式细胞术检测血小板自身抗体的比较

目的比较酶联免疫吸附试验(ELISA)与流式细胞术(FCM)检测血小板自身抗体的特点,探讨其对特发性血小板减少性紫癜(ITP)的诊断意义。方法 42例ITP患者,分别采用FCM和ELISA检测血小板表面及血浆中的抗血小板自身抗体。结果 FCM检出血小板自身抗体阳性36例,阳性率为85.7%;ELISA检出血小板自身抗体阳性30例,阳性率为71.4%,两种方法阳性率差异无统计学意义(P>0.05),但是FCM和ELISA检测血小板表面抗体阳性率均高于血浆中自身抗体阳性率(P均<0.05)。结论 FCM和ELISA检测结果均准确可靠,且各具特征。FCM具有快速、方便的特点更适合初筛使用,与ELISA联合检测可提高ITP诊断水平。

血细胞多态性细胞工程实验室的建立

目的建立稀有型血细胞永生化细胞株,探讨血细胞多态性细胞工程实验室建立的方法。方法采用EB病毒转化技术,把携带稀有血型抗原的红细胞、已知抗原特异性的粒细胞,罕见特异性抗原的血小板及CD36缺失型的血小板的外周血淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞株,采用培养法和PCR法对细胞株进行支原体检测,染色体核型分析细胞株的稳定性。结果共建立稀有型血细胞LCLs 211株,其中稀有红细胞血型抗原LCLs 64株、已知抗原特异性的粒细胞抗原LCLs 8株、罕见特异性抗原的血小板LCLs 15株及CD36缺失型血小板LCLs 124株,总转化成功率为91%;所有的细胞株传代、冻存和复苏均成活,无基因突变、无支原体污染。经20代传代后未发现染色体突变。结论传代培养、细胞冻存、复苏和支原体污染防范等一整套技术过程基本满足建库要求,为血细胞多态性细胞工程实验室的建立提供科学依据。