不同禽源副鸡禽杆菌的人工交叉致病试验

为探讨鸡源和鹅源副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum,Apg)对鸡、鹅的跨禽种感染致病力情况,试验将3株鹅源Apg和4株鸡源Apg培养物经鼻窦腔接种60日龄鸡和鹅,观察接种禽的临床症状并进行表征评分。通过组织病理学检查、细菌分离培养和Apg种特异性PCR鉴定,研究鸡源和鹅源Apg对不同宿主的致病性情况。结果显示:鸡源和鹅源Apg均可导致鸡、鹅出现典型症状与病变,且对原宿主禽种致病性高于非原宿主禽种;发病鸡、鹅的病理变化相似,以面部皮下和鼻窦黏膜水肿、充血出血、纤维素性渗出,鼻甲骨变形为特征;发病鹅和鸡组织病理变化相似,鼻窦黏膜与鼻甲黏膜出现大量炎性细胞浸润,黏膜上皮水肿、坏死、崩解脱落,固有层结构疏松,局部可见纤维结缔组织增生;3株鸡源Apg接种鸡试验组能从鼻窦部、肝脏和脾脏中重新分离到接种菌,而接种鹅试验组仅从鼻窦部分离接种菌,未能从其他组织中分离到。研究表明,鸡源和鹅源Apg均可感染鸡或鹅并引起发病,但在致病程度上以本禽源菌株强于非本禽源菌株。

鹅源副鸡禽杆菌全基因组重测序及比较基因组学分析

为了分析鹅源副鸡禽杆菌(Apg)与鸡源菌株的基因组差异,对3株鹅源Apg和4株鸡源Apg进行全基因重测序及基因组分析。全基因重测序结果显示7株菌株基因组片段大小为2.567 832~2.607 127 Mb, GC含量介于40.80%~40.93%之间。SNPs同源性分析结果显示,3株鹅源菌株和鸡源C-AP3株聚集在p4chr1株的小分支上,另外3株鸡源菌株分布在其它国内菌株分支上。基因同源性分析结果显示鹅源菌株特有基因76个,鸡源菌株特有基因37个。对鹅适应性基因的筛查共聚类出79个基因,其中编码已知蛋白的基因有22个,其余编码假定蛋白;对鸡适应性基因的筛查聚类出39个基因,其中10个编码已知蛋白,29个编码假定基因。通过比较基因组学发现与Apg宿主适应性有关的基因为118个,为进一步阐释Apg跨物种感染的分子生物学机制奠定了基础。

广东鹅源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定、耐药表型和耐药基因的检测及相关性分析

为了解广东地区鹅源多杀性巴氏杆菌(Pm)的流行情况、药物敏感性、耐药基因的携带情况以及耐药表型与耐药基因的相关性,本实验对2019年~2022年从广东地区采集的193份疑似感染Pm病鹅的心脏血液和肝脏组织划线接种于不同的培养基分离细菌,对分离菌纯化后采用PCR扩增分离菌的KMT1基因并测序,采用多重PCR扩增分离菌的5个荚膜基因及8个脂多糖基因,分析分离菌的荚膜分型与脂多糖(LPS)分型。结果显示分离到83株鹅源Pm,其中82株为荚膜A型,1株无法通过荚膜定型;LPS分型为L1型。采用K-B纸片扩散法检测分离菌的药物敏感性;通过PCR检测分离菌7类药物的15种耐药基因,包括β-内酰胺类(bla_(CTX-M)、bla_(TEM)、bla_(OXA))、氨基糖苷类(aadA1、aph(3’)Ila)、喹诺酮类(qnrA、qnrB、qnrS)、酰胺醇类(floR)、四环素类(tetM、tetX)、大环内酯类(ermF、ereD)、磺胺类(sul1、sul3)耐药基因。采用统计学软件SPSS22中的完全随机设计两样本率的卡方检验分析分离菌的耐药表型和相应耐药基因的相关性。药敏试验结果显示,83株鹅源Pm对多种药物敏感性较高,其中对喹诺酮类的环丙沙星和氧氟沙星、氨基糖苷类的丁胺卡那和大观霉素、β-内酰胺类的头孢曲松、磺胺类的复方新诺明、大环内酯类的阿奇霉素敏感的菌株占比均在63%以上;对氨基糖苷类的链霉素和卡那霉素耐药的菌株占比高于50%,对氨基糖苷类的新霉素和四环素类的四环素耐药的菌株分别占49.40%(41/83)和46.99%(39/83)。耐药基因的检测结果显示,分离菌检出耐药基因qnrB、sul3、blaTEM、aadA1、aph(3’)Ila、ereD、ermF、tetM、floR,检出率分别为9.63%(8/94)、27.71%(23/83)、28.92%(24/83)、48.19%(40/83)、14.46%(12/83)、49.40%(41/83)、3.61%(3/83)、1.20%(1/83)、32.53%(27/83),未检出耐药基因qnrA、qnrS、sul1、tetX、bla_(CTX-M)、bla_(OXA)。相关性分析结果显示,aadA1基因与Pm对新霉素、链霉素、卡那霉素、大观霉素的耐药性具有极显著的相关性(P<0.001);bla_(CTX-M)基因、floR基因分别与Pm对头孢拉定、氟苯尼考的耐药性具有显著相关性(P<0.05)。上述结果表明,广东地区鹅源Pm主要为A∶L1基因型,对多种药物敏感,耐药基因携带率不高,部分药物的耐药表型与耐药基因具有相关性。本研究为广东地区鹅源Pm病的监测和防治提供参考依据,为Pm耐药机制的研究奠定基础。

鹅源副鸡禽杆菌的分离鉴定及致病性研究

【目的】了解广东地区鹅源副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum,Apg)的生物学特性及其与国内外Apg菌株的差异。【方法】于2019年12月―2022年1月从广东地区采集疑似鹅传染性鼻炎病例,通过特异性PCR扩增、细菌分离纯化及16S rRNA基因测序鉴定后进行比对并构建系统进化树,确定分离菌株种类并对其进行药敏试验和动物回归试验。【结果】本试验共分离鉴定获得3株鹅源Apg,分别命名为G-AP1、G-AP2、G-AP3,均属于NAD依赖型菌株。分离菌株发酵葡萄糖、蔗糖产酸不产气,氧化酶试验阳性。系统进化树结果显示,3株分离菌株血清型均为A型且亲缘关系较近,与国内大部分分离株亲缘关系较近,与国外分离株亲缘关系较远。分离菌株接种试验鹅,24 h后鹅出现面部肿胀与流鼻液,48 h后挤压肿胀部位可见乳白色絮状的黏稠鼻液流出,剖检病鹅可见肿胀部皮下和鼻窦、鼻甲黏膜水肿、出血、纤维性渗出,鼻窦腔蓄积干酪样渗出物。药敏试验结果表明,头孢噻呋、头孢噻诺、阿米卡星、喹诺酮类药物、氟苯尼考和克林霉素对3株分离菌株具有较强的体外生长抑制作用。【结论】本试验成功分离3株鹅源Apg菌株,可引起鹅群感染发病且具有传染性,研究结果为广东地区防治鹅传染性鼻炎提供了参考依据。

鹅源副鸡禽杆菌的分离鉴定及致病性试验

研究从面部肿胀的成年狮头鹅眶下窦中分离到一株细菌,经生长特性、菌体染色镜检、生化试验、16 S rDNA测序比对及HMTp210基因扩增方法对其进行鉴定,确定分离菌株为血清型B型的副鸡禽杆菌,具有NAD依赖性;副鸡禽杆菌hagA基因系统进化树显示分离株与国内大部分副鸡禽杆菌分离株的亲缘性相近,与国外副鸡禽杆菌分离株的差异较大;药敏试验结果显示喹诺酮类药物和氟苯尼考的MIC较低,分别为0.25μg/mL和4μg/mL,氨苄西林等6种药物的MIC值均大于128μg/mL,表明菌株具有较强的耐药性;分离纯培养物人工感染7日胚龄鸡胚后24~48 h内致死鸡胚,经眶下窦感染80日龄乌棕鹅,48 h鹅开始出现流鼻液、鼻窦部肿胀,72 h剖检可见眶下窦有干酪样渗出物,从渗出物中又重新分离出副鸡禽杆菌;表明分离到的副鸡禽杆菌对鹅具有较强的致病力。

番鸭源基因Ⅶ型新城疫病毒的生物学特性和免疫原性评价

为了解我国近年水禽主要流行的基因Ⅶ型新城疫病毒的生物学特性和免疫原性,通过攻毒试验和免疫保护试验测定了1株本实验室分离保存的番鸭源基因Ⅶ型新城疫病毒MDK/FS-SS/E/2007的致病指数、雏番鸭致病性和免疫保护性等特征。致病指数评价结果显示,该毒株符合新城疫病毒强毒株标准。雏鸭致病试验结果显示,攻毒组动物均出现沉郁、瘫痪和扭颈等神经症状,剖检可见脑部充血、出血,胰腺、脾脏和肝脏等器官出现变性坏死等典型新城疫临床特征。免疫保护试验结果显示,以该毒株制备的油乳灭活疫苗对雏番鸭进行3次免疫,免疫后42 d血清HI抗体几何平均滴度水平可达1∶238.9,能为番鸭提供有效保护。研究结果为水禽新城疫诊断与免疫防控研究提供了参考资料。

广东地区8株鹅源基因Ⅻ型新城疫病毒F蛋白基因遗传进化分析

为了解当前广东地区鹅群新城疫病毒(NDV)遗传进化情况,本研究从广东养殖病死鹅组织样品中分离鉴定获得8株NDV,对分离株的F蛋白基因进行核苷酸及氨基酸序列分析。8株分离病毒之间F蛋白基因同源性较高,为96.3%-99.9%,但与当前国内NDV优势流行株及疫苗株同源性均较低。遗传进化分析结果显示所有新分离株均属于Ⅻ型NDVⅫb亚型分支,而当前国内NDV的优势流行株及常用疫苗株均属于Ⅶd亚型分支。氨基酸序列分析结果显示,本研究分离株F蛋白裂解位点氨基酸序列均为112K/RRQKR/F117,符合强毒株分子特征;与基因Ⅶ型代表株NDV/ZJ1相比,新分离株F蛋白B细胞中和抗原表位均出现D170N变异;而与2010年~2011年报道的广东Ⅻb亚型分离株相比,新分离株F蛋白疏水区、七肽重复序列等区域均出现氨基酸的变异。综上所述,本研究分离鉴定的8株鹅源NDV的F基因均属于Ⅻb亚型,与Ⅶd亚型流行株及常用疫苗株F基因同源性较低,且其多个氨基酸关键位点存在变异。本研究在国内首次从病死鹅体内分离到基因Ⅻ型NDV,为进一步了解基因Ⅻ型NDV在广东地区水禽中的流行、病原进化以及疫苗株更新提供参考。

基于射频及超声技术的室内二维定位系统设计

该文通过对比几种常用室内定位(In-location)方法,设计并实现了基于射频和超声波技术相结合的室内二维定位系统。系统采用C51系列单片机为主控芯片,n RF24L01芯片作为射频通讯芯片,结合超声波发射与接收电路,融合射频和超声技术对二维平面上一点的位置信息进行获取,并通过LCD12864进行测量结果的显示。文章详细的分析了系统的工作原理并进行了测量电路的设计,由实际测量的数据对结果进行误差分析可知,测量数据误差在2%以内。

20株禽多杀性巴氏杆菌的分离及荚膜与脂多糖的分型鉴定

为了解广东省主要养禽区域禽源巴氏杆菌的流行情况,本试验在2018~2019年期间对经临床症状与病理剖检作初步诊断为禽霍乱的临床病例,从心血和肝脏进行细菌分离并纯化出20株细菌,经培养特性与菌体形态观察、生化鉴定及种特异性PCR鉴定,确定20株分离菌株均为多杀性巴氏杆菌。采用荚膜多重PCR和脂多糖多重PCR对20株多杀性巴氏杆菌进行分型鉴定,结果荚膜型以A为主,脂多糖型以L1为主,表明目前广东家禽中的多杀性巴氏杆菌仍以A:1(NAMIOKA分型方法为A:5)为主要血清型。药敏结果显示有70%的分离菌对四环素耐受,对其他药物的耐药率均在15%以下。致病性试验结果表明,分离菌株对鹅具有强致病性,引起发病鹅的多种组织出血和坏死;经病理组织切片可见多杀性巴氏杆菌典型的病理组织学变化。试验结果为广东省部分地区禽霍乱的流行病学监测和防治提供参考依据。

15株鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定与耐药性测定及雏鸭致病性试验

为了解鸭疫里默氏杆菌在广东佛山地区养殖水禽群中的流行、耐药和对雏鸭的致病力等情况,本研究从该地区6个鹅场、9个鸭场共采集130份有疑似传染性浆膜炎临床症状的肝、脑样品,经分离、纯化和鉴定获得15株鸭疫里默氏杆菌。对新分离株的16S rRNA进行测序及遗传进化分析,并进一步检测新分离株的耐药性和对雏鸭的致病性。结果表明:所有分离株16S rRNA遗传进化上均与鸭疫里默氏杆菌血清Ⅰ型参考株TRa1处于同一进化分支;15株分离菌对阿莫西林、青霉素、链霉素等8种常用抗生素表现多重耐药,而对头孢唑啉、大观霉素和氟苯尼考敏感。选取一株鸭源菌株(Y15)进行雏鸭致病性试验,感染组雏鸭死亡率为60%,病死鸭表现典型鸭疫里默氏杆菌病临床症状。本研究结果为进一步了解鸭疫里默氏杆菌在广东地区水禽群中的流行、耐药性以及致病力情况提供参考依据。

LED灯创意摆件

电灯被发明以来,照明技术进行了多次改进,不仅提升了灯泡的发光效率,还提高了适用性。此外,人们一直在探索如何用五颜六色的灯光来满足视觉上的享受。我们也加入这个研究的行列中。结合单片机技术,我们设计了一款利用LED灯作为装饰的创意摆件。

鹅源产气荚膜梭菌的分离鉴定与药物敏感性试验

对2020年7月至2021年6月临床症状与病理剖检初步诊断为鹅坏死性肠炎疑似病例肠道内容物和肝脏进行细菌分离并纯化,获得52株菌。分离菌株经培养特性、生化试验、种特异性PCR鉴定,确定52株菌均为产气荚膜梭菌;采用PCR对分离株毒素基因鉴定,结果显示分离株均为毒素型A型,其中cpβ_(2)基因的检出率为61.5%,未检测到肠毒素cpe基因和netB毒素基因。药敏试验结果显示,分离株对头孢噻肟(100%)、头孢噻呋(100%)、氟苯尼考(100%)和多西环素(94%)表现为高度敏感,其次为恩诺沙星(88%)和氧氟沙星(88%);而耐药率最高的药物为磺胺类药物,其中磺胺甲恶唑耐药率为100%,其次是林可胺类药物,林可霉素与克林霉素耐药率分别为58%和46%;中药体外抑菌试验结果显示,单味中药黄连、黄柏、黄芩和复方中药乌梅散、白头翁汤、郁金散对产气荚膜梭菌均有一定的抑菌作用,其中黄连的MIC值为1.57 g/L,远低于其他试验中药的MIC值,具有较强的抑菌作用。本试验为广东省主要鹅养殖区域鹅产气荚膜梭菌病的有效防治提供了参考依据。

广东地区禽源致病性大肠杆菌对5种β-内酰胺类抗生素的耐药情况与ESBLs基因的携带情况

为了解广东地区禽源致病性大肠杆菌(APEC)对5种β-内酰胺类抗生素的耐药情况和超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamases,ESBLs)基因(blaCTX-M、blaTEM、blaOXA)的携带情况,以更好地指导临床治疗,试验对2014-2019年从广东多地病死禽中分离鉴定得到的102株APEC采用PCR方法作系统进化分群与ESBLs基因检测,采用K-B纸片扩散法检测APEC对5种β-内酰胺类抗生素的敏感性,并分析不同禽源APEC对不同药物的耐药情况、102株APEC对5种抗生素的多重耐药性分布情况和耐药谱型,以及菌株耐药基因与耐药表型相关性。结果表明:A、B1、B2和D群比例分别为65.69%、9.80%、2.94%、21.57%。blaCTX-M、blaTEM、blaOXA基因的检出率分别是43.14%、35.29%、8.82%,组合blaCTX-M+blaTEM的阳性率为13.73%。APEC对2种青霉素类抗生素(阿莫西林、氨苄西林)和头孢拉定的耐药率均在85.71%以上,对头孢唑啉和头孢噻呋的耐药率分别为62.75%、47.06%。blaCTX-M基因与头孢唑啉和头孢噻呋的耐药率呈极显著相关(P<0.01),验证了blaCTX-M基因主要介导对头孢类抗生素的水解作用。说明广东地区APEC对5种β-内酰胺类抗生素的耐药情况较严重,耐药基因blaCTX-M、blaTEM的检出率要高于blaOXA基因。

水禽变形杆菌的分离鉴定与药物敏感性分析

本研究从临床疑似变形杆菌感染水禽病例中分离到17株细菌,对新分离菌株进行形态学、菌株生化特性、变形杆菌atpD基因特异性PCR鉴定以及菌株药物敏感性试验。结果显示:菌株镜检为革兰阴性菌,具有明显多形性;在鲜血琼脂培养基上有明显的迁徙现象;atpD基因特异性PCR扩增并测序比对确认分离株为变形杆菌;药敏试验结果表明,本研究分离的水禽变形杆菌具有多重耐药性,对常用抗生素表现低敏或耐药,仅对庆大霉素敏感。