lncRNA NEAT1在乳腺癌肿瘤相关巨噬细胞中的表达及作用机制

目的探究长链非编码RNA NEAT1(lncRNA NEAT1)在乳腺癌肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)中的表达,并初步探究其对TAMs极化的调控和功能影响。方法收集30例自2019年10月至2021年1月于海口市妇幼保健院确诊的乳腺癌患者肿瘤组织样本,葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离乳腺癌组织中的TAMs(TAMs组),同时以健康志愿者的外周血单个核细胞(PBMC)做为对照(PBMC组),RT-PCR检测两组巨噬细胞中M2型标记分子精氨酸-1(Arg-1)、CD206和CD163与M1型标记分子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和人类白细胞抗原DR(HLA-DR)的mRNA表达水平。使用LPS和IFN-γ诱导人单核细胞系THP-1和小鼠巨噬细胞Raw264.7分化为M1型,IL-4进行M2型诱导分化。RT-PCR检测lncRNA NEAT1在诱导后M1、M2型巨噬细胞中的表达;在Raw264.7细胞中转染沉默lncRNA NEAT1表达和阴性对照慢病毒(LV-shNEAT1与LV-NC),并使用Transwell共培养体系将转染后的Raw264.7与乳腺癌细胞MCF-7进行共培养,并将共培养体系分为3组:control组、LV-NC组(转染LV-NC)与LV-shNEAT1组(转染LV-shNEAT1)。RT-PCR检测共培养体系中Raw264.7细胞中M1型巨噬细胞标记分子TNF-α、HLA-DR和M2型巨噬细胞标记分子Arg-1、CD206及CD163的表达。使用EdU染色检测各培养体系中MCF-7细胞的增殖;Western blot实验检测各培养体系中MCF-7细胞上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达;Transwell侵袭实验检测各培养体系中MCF-7细胞的侵袭能力。以雌性BALB/c裸鼠为研究对象,并将其分为3组:control组(注射含MCF-7细胞的PBS悬液),LV-NC组(联合注射感染LV-shNC的Raw264.7与MCF-7细胞),LV-shNEAT1组(联合注射感染LV-shNEAT1的Raw264.7细胞与MCF-7细胞),取各组裸鼠的移植瘤组织,HE染色观察肿瘤细胞的生长,免疫组织化学染色观察肿瘤组织区增殖指标Ki-67的表达。结果与PBMC组相比,乳腺癌TAMs组中以M2型巨噬细胞为主,且lncRNA NEAT1表达明显升高(P<0.05)。体外诱导人源与小鼠源性巨噬细胞分化的结果显示,与M1型巨噬细胞相比,M2型中lncRNA NEAT1的表达显著增加(P<0.05)。与control组相比,LV-NC组和LV-shNEAT1组共培养体系中Raw264.7细胞中Arg-1、CD206及CD163的表达水平均显著升高(P<0.05),而TNF-α、HLA-DR表达水平却明显降低(P<0.05),同时LV-NC组和LV-shNEAT1组共培养体系中MCF-7细胞的增殖活性与侵袭能力增强(P<0.05),E-cadherin表达降低,N-cadherin、Vimentin和Snail的表达升高(P<0.05)。与LV-NC组相比,LV-shNEAT1组共培养体系中Raw264.7细胞中Arg-1、CD206及CD163的表达水平均明显降低(P<0.05),TNF-α、HLA-DR表达水平显著升高(P<0.05),而共培养体系中的MCF-7细胞的增殖活性和侵袭能力减弱(P<0.05),E-cadherin表达升高,N-cadherin、Vimentin和Snail的表达降低(P<0.05)。裸鼠皮下移植瘤实验结果表明,与control组相比,LV-NC组与LV-shNEAT1组MCF-7细胞的成瘤能力和移植瘤组织中Ki-67的阳性表达率均明显增强(P<0.05);而与LV-NC组相比,LV-shNEAT1组MCF-7细胞的成瘤能力和Ki-67的阳性表达率均明显降低(P<0.05)。结论lncRNA NEAT1在乳腺癌TAMs的表达水平明显升高,而沉默其表达可能通过抑制TAMs的M2极化抑制体内外乳腺细胞的增殖与侵袭能力。