调控叉头盒转录基因F1表达对非小细胞肺癌细胞上皮间质转化、迁移和侵袭的作用

目的通过慢病毒介导的shRNA敲低人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞株PC9中叉头盒转录基因F1(forkhead box-F1,FOXF1)的表达,研究FOXF1对细胞生长及侵袭迁移等能力的影响及可能的分子机制。方法慢病毒介导的shRNA敲低FOXF1的表达,采用实时荧光定量qRTPCR实验及Western Blot技术检测细胞中FOXF1 mRNA和蛋白的表达变化,平板克隆实验及CCK-8法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测FOXF1基因表达对迁移及侵袭的影响,Western Blot检测上皮间充质转化相关蛋白的表达。结果慢病毒介导的shRNA感染PC9细胞后,有效下调了PC9细胞中FOXF1 mRNA和蛋白的表达水平(P <0.05),细胞的增殖能力受到抑制,细胞体外迁移及侵袭能力明显降低;Western Blot结果显示,抑制FOXF1表达后β-Catenin、N-cadherin、Vimentin、Snail表达下调,E-cadherin、ZO-1表达上调。结论下调FOXF1表达可抑制非小细胞肺癌PC9细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能通过调控上皮—间充质转化相关蛋白的表达来实现。

下调ANKRD22表达对人肺腺癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的通过RNA干扰技术下调人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株H1975中锚蛋白重复系列22(ANKRD22)表达,观察其对细胞增殖、细胞凋亡及细胞周期的影响。方法体外培养H1975细胞,随机分为siRNA干扰组、阴性对照组、空白对照组,siRNA干扰组、阴性对照组分别转染ANKRD22-siRNA质粒和阴性对照质粒NC-siRNA,转染24 h;空白对照组不予转染。采用实时荧光定量qRT-PCR法检测各组ANKRD22表达,采用MTT法检测细胞培养24、48、72、96、120 h的细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期。结果 siRNA干扰组ANKRD22相对表达量低于阴性对照组和空白对照组(P均<0. 05),空白对照组与阴性对照组比较P> 0. 05。siRNA干扰组转染24 h再培养24、48、72、96、120 h细胞增殖能力均低于阴性对照组和空白对照组(P均<0. 05),空白对照组与阴性对照组比较P均> 0. 05。siRNA干扰组G0/G1期细胞所占比例高于空白对照组与阴性对照组(P均<0. 05),S期、G2/M期细胞所占比例低于空白对照组与阴性对照组(P均<0. 05),空白对照组与阴性对照组比较P均> 0. 05。siRNA干扰组细胞凋亡率高于空白对照组与阴性对照组(P均<0. 05),空白对照组与阴性对照组比较P> 0. 05。结论通过RNA干扰下调NSCLC细胞株H1975中ANKRD22表达后,可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,延长细胞周期。

SGOL1通过调节PKM2促进肺癌细胞增殖和侵袭

Shugoshin-1(SGOL1)是酵母Shugoshin的人类同源物之一,位于着丝粒区域,能够通过阻止着丝粒内聚复合物早熟分裂维持染色体稳定。近年来,SGOL1在肿瘤中的作用受到关注,但它在肺癌中的功能尚不清楚。本研究基于TCGA数据库分析发现,SGOL1在肺癌组织中高表达(n=529,P<0.00001),并与患者的不良预后呈正相关(P=0.0049)。qRT-PCR和Western印迹结果证实:SGOL1在肺癌细胞系表达水平均较正常肺上皮细胞的升高。在肺癌A549和NCI-H2405细胞系中,敲低SGOL1表达水平后,Cell Counting Kit-8(CCK8)实验、平板克隆实验、划痕愈合实验、Transwell实验结果分别提示,细胞的增殖、克隆形成、迁移、侵袭能力下降(P<0.05)。同时本研究发现,在TCGA数据中,丙酮酸激酶肌肉同工酶2(PKM2)和SGOL1的表达呈正相关性(r=0.38,P=0)。Western印迹检测显示,在肺癌细胞A549和NCI-H2405中,敲低SGOL1能下调PKM2的表达水平。此外,功能回补实验证实,过表达PKM2能部分逆转敲低SGOL1对肺癌细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力的抑制作用。因此,本研究表明,SGOL1可能通过调节PKM2促进肺癌细胞的增殖和侵袭。本研究为SGOL1在肺癌中的作用机制提供理论依据。