恒温实时荧光法快速检测不同样品中的单增李斯特菌

为实现乳制品中、临床病人腹泻物中单增李斯特菌的快速检测,选用外引物F3和B3、内引物FIP和BIP作为环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)的特异性引物,采用便携式荧光恒温扩增仪作为检测平台,选取单增李斯特菌标准菌株进行基因组DNA灵敏度和最低检测限测定;选用人工污染的15份乳制品样品和20份腹泻样品进行适用性实验;以上样品同时利用国标法GB4789.30-2010进行菌落计数。结果表明:恒温实时荧光法对纯培养的单增李斯特菌基因组DNA、乳制品和腹泻样品中的单增李斯特菌基因组DNA灵敏度均达到10~2CFU/mL、检测限均达到10~3 CFU/mL;阴性样本出现假阳性的概率分别为0、0.03%和0;单增李斯特菌污染浓度在检出限以上的阳性样本检出率分别为100%、99%和92%。研究表明恒温实时荧光法的检测结果与传统国标培养结果基本一致,恒温实时荧光法适用于乳制品中和临床腹泻样本中单增李斯特菌的快速检测。

等温荧光定量沙门氏菌快速检测试剂盒的评价与应用

食源性致病菌的快速检测一直是保障食品安全的关键。沙门氏菌(Salmonella)是重要的食源性致病菌之一。本研究以沙门氏菌人工污染的3种样品为对象,对一种基于环介导等温荧光扩增技术的沙门氏菌快速诊断试剂盒进行了灵敏度和准确性评估;再以该试剂盒对市售食品样品和临床腹泻样品适用性进行验证。结果表明,该等温荧光定量沙门氏菌快速检测试剂盒的检测限为10~3 CFU/mL,准确性96.7%以上。所有不同样品的结果显示:阴性样本的假阳性率分别为0.0%、3.3%和3.3%;阳性样本检出率分别为97.9%、100.0%和65.7%(含低浓度细菌污染样品)。该试剂盒具有检测周期短、操作简便、适用性广等特点。

副溶血性弧菌恒温荧光法检测及快速检测试剂盒的初步应用

【目的】采用恒温荧光PCR方法及快速检测试剂盒对副溶血弧菌的扩增结果进行实时检测,并对其检测限、灵敏度及特异度等进行测试。【方法】通过三个实验阶段(实验室自配阳性样品测试阶段、腹泻病人模拟生物样本测试阶段、市场食品样测试阶段),验证仪器及试剂盒的稳定性、对腹泻样本和市场食品样本检测的可靠性,及其适用范围。【结果】实验室自配样品检测结果较好,检测限达到7~100 cfu/m L;腹泻样和市场食品样的检测假阳性率较高,但灵敏度极好,三个阶段合计灵敏度为99.6%,特异度为55.9%,真阳性率为85.1%,真阴性率为98.3%。【结论】该恒温荧光PCR方法及快速检测试剂盒灵敏度高,稳定性好,适用范围广,在控制实验操作过程及实验条件,提高特异度后,值得进一步推广,对我国食源性副溶血性弧菌的检测具有重要意义。