通过获得链霉素抗性基因突变株筛选小诺霉素高产菌株

通过链霉素对小诺霉素产生菌 (Micromonospora purpura) 49 1 2 #菌株孢子致死浓度的测定 ,采用诱变剂EMS 3种不同诱变剂量对菌株的孢子进行诱变处理 ,诱变处理的孢子涂布在含链霉素致死浓度的改良高氏平板上 ,获得大量的链霉素抗性基因突变株 ,然后从链霉素抗性基因突变株进一步筛选小诺霉素高产菌株 ,获得小诺霉素菌株 49 1 2 3菌株。在摇瓶条件下 ,其产小诺霉素生物活性单位比出发菌株 49 1 2 #的摇瓶发酵单位提高了 40 %以上。小诺霉素的组分比由出发菌株的C2b∶C1a的 5∶5提高到 8∶2。C2b有效组分提高了 30 %;链霉素抗性基因突变与小诺霉素发酵单位突变之间 ,小诺霉素正突变率达到 40 %,负突变率达 2 6%。

虫草菌粉对雏鸡脾脏和法氏囊发育的影响

虫草菌粉为蝙蝠蛾拟青霉Cs-4菌粉,或者又称为发酵虫草菌粉,俗称虫草粉,虫草菌粉,虫草提取物,发酵虫草粉等.蝙蝠蛾拟青霉菌粉是从新鲜冬虫夏草菌[cordyceps sinensis（Berk） sacc]中分离所得的虫草菌——蝙蝠蛾拟青霉（Paecilomyces hepiali Chen＆Dai）经液体深层发酵培养、过滤、干燥、粉碎制成的产品.蝙蝠蛾拟青霉菌种是江西国药有限责任公司与中国医学科学院药物研究所卫生部天然药物生物合成重点实验室经过10年时间从青海产天然冬虫夏草中分离纯化而得,该菌种生产的发酵虫草菌粉自1989年获得卫生部批准为一类原料药新药（文号：[89]卫药准字Z-17号）,在10多年的临床应用当中,其良好的临床效果以及可靠的安全性,深获国内外医药专家学者的认可.并于2001年3月23日被国家卫生部发文（卫法监发[2001]84号文）,确认为可用于保健食品的真菌名单.

虫草菌粉对雏鸡脾脏和法氏囊发育的影响

通过4个试验组,每组60羽雏鸡在全价料一致的基础上,添加0、0.2、0.6、1.8g/kg虫草菌粉,分别于10d、20d、30d剖解20只雏鸡取脾脏、法氏囊称重。结果表明,饲喂20d时中剂量组(0.6d/kg)和高剂量组(1.8 g/kg)脾脏、法氏囊重量均与对照组差异显著(p〈0.05);饲喂30d时。低剂量组与对照组脾脏与法氏囊重量、中剂量组与对照组脾脏重量、高剂量组与对照组脾脏、法氏囊重量均差异极显著(p〈0.01)。

小诺霉素产生菌斜面传代遗传稳定性及倒种效果评价

小诺霉素障碍突变株在斜面上经连续传代,变异菌落增加,产孢子能力明显下降,但产量和组份的变化不大,在液体培养中,以发酵液连续接种对产量和组份影响也不大,能保持一定的遗传稳定性。根据小诺霉素菌种的特点,在发酵工业生产上采用了倒种技术,并运用方差分析和Duncan多范围检验法的方法,分析了正常罐、母罐、子罐发酵效价的差异,表明正常罐和母罐并不显著,子罐与正常罐、子罐与母罐差异显著(α=0.05),但不是极显著(α=0.01),子罐的发酵效价高于两者,证明在小诺霉素发酵生产中用倒种的效果是好的。

发酵虫草菌粉中微量元素含量的测定

目的:对发酵虫草菌粉中微量元素的含量进行分析评价,为制定发酵虫草菌粉中微量元素质量标准提供参考依据。方法:采用原子吸收火焰法对发酵虫草菌粉中锌、铁、锰、铜、铅微量元素的含量进行分析。结果:发酵虫草菌粉中微量元素的含量顺序依次为Fe>Mn>Zn>Cu>Pb。各元素方法线性关系良好,相关系数均>0.999 4;重复性试验RSD为0.54%～0.86%;回收率为96.05%～101.71%,RSD为0.32%～1.91%。结论:该方法简单,精密度、灵敏度高,结果可靠。发酵虫草菌粉中微量元素含量均符合世界卫生组织对重金属限量的要求。

蝙蝠蛾拟青霉及金水宝胶囊的DNA条形码鉴定

目的:由于传统方法对发酵菌丝体鉴定困难,采用DNA条形码技术对金水宝胶囊原料菌种蝙蝠蛾拟青霉及相关产品进行快速鉴定。方法:采用内转录间隔区(ITS)序列对收集的蝙蝠蛾拟青霉及其易混淆物种共8种168份样品进行条形码鉴定,并基于ITS序列设计蝙蝠蛾拟青霉特异引物对相关产品进行快速鉴定。结果:44份不同来源蝙蝠蛾拟青霉的ITS序列长度均为499 bp,无变异位点。基于ITS序列可对蝙蝠蛾拟青霉及其7种易混伪品进行区别;通过ITS序列设计的蝙蝠蛾拟青霉特异性引物(ITS-BF/ITS-BR)可特异扩增得到长度102 bp的短片段,采用该片段可快速鉴别蝙蝠蛾拟青霉与其他虫草菌,并可区分市场上相关产品。结论:通过ITS序列及特异性引物可以实现蝙蝠蛾拟青霉及其相关产品的快速鉴定,为金水宝胶囊的生产及质量控制提供参考。

发酵虫草菌粉(Cs-4)对糖尿病肾脏疾病大鼠肾功能的保护作用及初步机制

目的:探讨发酵虫草菌粉(Cs-4)对糖尿病肾脏疾病大鼠肾功能的保护作用及初步机制。方法:采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(40 mg·kg^(-1))的方法复制糖尿病肾脏疾病大鼠模型。将所有模型大鼠随机分为模型组、Cs-4低(300 mg·kg^(-1))、中(600 mg·kg^(-1))、高剂量组(1200 mg·kg^(-1))及阳性药组(厄贝沙坦,mg·kg^(-1)),同时设正常组(给予普通饲料)和高糖高脂组(给予高糖高脂饲料),并均给予腹腔注射相同剂量的柠檬酸缓冲液。各组大鼠每天灌胃(ig)给药1次,连续8周。实验结束收集24 h内尿液,测定大鼠空腹血糖。收集大鼠血清、肾脏,以试剂盒法检测大鼠血清尿素氮、血肌酐、超氧化物歧化酶、丙二醛、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、白介素6、白介素8、肿瘤坏死因子α、超敏c反应蛋白、游离脂肪酸、糖化血清蛋白、单核细胞趋化蛋白1、转化生长因子β1及尿液尿肌酐、尿蛋白、尿微量白蛋白含量,以苏木精-伊红染色观察大鼠肾组织病理形态学变化。结果:与模型组相比,Cs-4各剂量组在不同程度上可降低肾重、肾重/体重、空腹血糖、尿素氮、血肌酐、尿蛋白、尿微量白蛋白、总胆固醇、低密度脂蛋白、丙二醛、白介素6、白介素8、肿瘤坏死因子α、超敏c反应蛋白、游离脂肪酸、糖化血清蛋白、单核细胞趋化蛋白1、转化生长因子β1水平,增加体重,提高尿肌酐、内生肌酐清除率、高密度脂蛋白、超氧化物歧化酶水平(P<0.05,P<0.01),且Cs-4高剂量组作用更显著,在不同程度上能改善肾组织形态损伤。结论:Cs-4对糖尿病肾脏疾病大鼠肾功能损害具有一定的保护作用,其机制可能与降低血糖、调节血脂、改善氧化应激及炎症水平、抑制肾脏纤维化程度有关。

发酵虫草菌粉(Cs-4)对慢性阻塞性肺疾病大鼠及肺组织蛋白质组学的作用

目的探讨发酵虫草菌粉(Cs-4)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺功能保护作用及初步机制。方法采用香烟烟雾熏染联合气管内滴注脂多糖复制COPD大鼠模型。SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性组(地塞米松混悬液0.09 mg·kg^(-1)),发酵虫草菌粉(Cs-4)低剂量组(0.3 g·kg^(-1))、中剂量组(0.6 g·kg^(-1))、高剂量组(1.2 g·kg^(-1)),除第1天和第14天气管内滴注脂多糖不给药外,实验第2~13天,第15~28天每天烟熏前30min灌胃给药。收集大鼠血清、肺泡灌洗液、肺,以试剂盒法检测大鼠血清白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α);肺组织匀浆白细胞介素4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)含量;血清、肺泡灌洗液丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)含量。以HE染色、AB-PAS染色观察肺组织病理形态学变化。以蛋白质组学技术鉴定筛选差异蛋白。通过Uniprot、String、KEGG、DAVID数据库对差异蛋白进行注释、GO分析、信号通路分析及蛋白质相互作用分析。结果与模型组相比,发酵虫草菌粉(Cs-4)各剂量组均不同程度降低血清IL-8、IL-6、TNF-α、肺组织匀浆IL-4、血清MDA含量;升高肺组织匀浆IFN-γ、血清、肺泡灌洗液SOD、CAT含量。结论发酵虫草菌粉(Cs-4)对COPD有一定保护作用,其机制可能是通过降低体内炎症因子水平、改善机体氧化损伤程度来完成的。

金水宝胶囊生产过程中质量控制方法的建立

目的:完善金水宝胶囊生产过程中的质量控制体系,为该制剂的后续研究与应用提供实验依据。方法:采用高效液相色谱法(HPLC),Ultimate AQ-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),腺苷、鸟苷、尿苷含量测定的色谱条件为流动相甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0~14 min,100%~99%B;14~19 min,99%~89%B;19~39 min,89%~85%B),流速0.4 m L·min^-1,柱温30℃,进样量10μL,检测波长260 nm。麦角甾醇含量测定的色谱条件为流动相甲醇-水(98∶2),流速1 m L·min^-1,柱温25℃,进样量10μL,检测波长283 nm。结果:发酵虫草菌粉不同生产阶段样品的指纹图谱中主要色谱峰差异性较小。腺苷、鸟苷、尿苷的线性关系良好(R2均>0.999);三者的加样回收率分别为106.06%,101.25%,105.88%,RSD均<3.0%。于2016-2018年各抽取的20批样品中腺苷、麦角甾醇的含量均符合2015年版《中国药典》的要求,鸟苷、尿苷的质量分别为0.97~1.36,0.67~1.38 mg/粒。结论:市面所售金水宝胶囊质量较为稳定。建立的方法可用于检测金水宝胶囊的质量,且操作简便、稳定可靠,可为发酵虫草菌粉类产品的检测提供参考。