原发性非小细胞肺癌p16基因的丢失研究

原发性非小细胞肺癌ｐ１６基因的丢失研究＊钟晓松１许凯黎１廖美琳２丁嘉安３关赛芳１周瑾目的近年文献报道在不同来源的肿瘤细胞中发现ｐ１６基因（系抑癌基因）出现高频率缺失，本文探讨非小细胞肺癌的发生与ｐ１６丢失的关系。方法收集上海地区６２例原发性非小细胞肺...

T细胞受体与肿瘤免疫治疗

肿瘤免疫治疗已明确有大量Ｔ淋巴细胞浸润到肿瘤组织，在一定肿瘤中Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）Ｖ区受体库（ｒｅｃｅｐｔｏｉｒｅ）明显表达与识别肿瘤相关抗原（Ｔｕｍｏｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄａｎｔｉｇｅｎＴＡＡ）有关，形成的ＴＣＲ－ＭＨＣ－肽三元复合物，在共刺激因子（Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ）参与下发挥细胞毒效应，本文进一步评估了用Ｔ细胞进行免疫治疗的前景。

细胞凋亡荧光染色法在检测TIL细胞毒效应中的应用

细胞毒细胞杀伤肿瘤细胞主要通过细胞凋亡机制。用传统的MTT法探讨了肿瘤浸润淋巴细胞TIL细胞杀伤活性最佳条件，同时采用凋亡荧光染色法（AFS）检测TIL的生物学效应。结果发现AFS法比MTT法更能准确地反映TIL对靶细胞的杀伤，杀伤率与效靶比呈良好的线性关系（r=0．89）；且该法简便、快速、敏感、重复性好，能同时观察活细胞、凋亡及坏死三种细胞的形态特征。

细胞凋亡荧光染色法检测肿瘤化疗药物敏感性并与MTT法的比较

本文根据化疗药物诱导肿瘤细胞产生凋亡的机制,采用细胞凋亡荧光染色法(AFS)分别检测了卵巢癌细胞株(3AO)、部分肺癌患者分离的癌细胞药物敏感性,并和传统的ATT法进行比较.用不同浓度的顺铂诱导3AO凋亡、两种方法学之间没有显著性差别(P>0.05);但用于肺癌患者分离的肿瘤细胞进行药物的筛选时,有显著性差别(P<O.05);AFS避免了MTT多种影响因素,比MTT快速、准确、敏感、重复性好,同时能观察凋亡、坏死及活细胞,有可能成为一种新的用于肿瘤化疗药物的筛选方法.

原发性非小细胞肺癌(NSCLC)中MTS2/p15基因丢失的研究

目的探讨ＭＴＳ２／ｐ１５基因缺失与人体非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）的发生及发展的相关性。方法采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术，分别检测１６０例不同病理类型及分期的肿瘤组织，１０例非癌性肺组织及２例胎肺组织中ｐ１５基因的纯合性丢失。结果１６０例ＮＳＣＬＣ组织中ｐ１５基因的丢失率以腺癌为最高６４．７％，鳞癌其次４３．９％，混合型鳞腺癌为最低３７．０％，１０例非癌性肺组织及２例胎肺组织均未见有ｐ１５基因的丢失。经ＴＮＭ分期分析表明，Ⅰ期ｐ１５基因丢失率为３４．６％，Ⅱ期为４７．４％，Ⅲ期为６１．４％，Ⅲ期的ｐ１５丢失率明显高于Ⅰ期（Ｐ＜０．００５）。结论ＭＴＳ２／ｐ１５基因缺失除与ＮＳＣＬＣ的发生相关外，还可能涉及到患者病程的进展。

尼古丁对小鼠巨噬细胞凋亡的影响

目的:研究尼古丁对小鼠巨噬细胞(Mφ)凋亡的影响。方法:用不同浓度(10-8～10-2mol/L)的尼古丁与小鼠腹腔Mφ体外共同培养,测定Mφ存活率;采用荧光染色和流式细胞术观察Mφ凋亡的发生情况。结果:一定浓度(10-4～10-8mol/L)的尼古丁对Mφ凋亡具有抑制作用。结论:尼古丁可能通过抑制Mφ凋亡在肺气肿的发病中起重要作用。

原发性上皮性卵巢肿瘤中P16基因的纯合性丢失

目的:探讨p16基因的纯合性丢失和原发性上皮性卵巢癌发生及发展的相关性。方法:本文采用PCR技术,分别检测了41例原发性上皮性卵巢癌、10例交界性及19例良性上皮性卵巢肿瘤p16基因的纯合性丢失。结果:70例原发性上皮性卵巢肿瘤中p16基因纯合性丢失率为20.0％(14/70),且此14例均为恶性,故原发性上皮性卵巢癌发生p16基因的纯合性丢失的频率为34.1％,其中以未分化型为最高达50.0％(6/12),而良性和交界性卵巢肿瘤无一例出现丢失(P<0.05),按FIGO分期,卵巢癌的基因的纯合性丢失频率Ⅰ期为16.7％、Ⅱ期为31.2％、Ⅲ期为42.8％、Ⅳ期为40.0％。结论;p16基因的纯合性丢失可能与卵巢癌的发生相关,并在早期及中晚期之间存在一定差异。

PCR-SSCP方法研究血液系统肿瘤的p53基因突变

目的 :探讨 p5 3基因突变在血液系统肿瘤发病及进展中的作用。方法 :采用 PCR- SSCP方法对 34例血液系统肿瘤患者 p5 3基因第 5、8外显子进行研究。结果 :从 1例急性粒细胞白血病 (AML ) (1/ 12 ,8.33% ) ,1例急性淋巴细胞白血病 (AL L) (1/ 5 ,2 0 % ) ,2例非霍奇金淋巴瘤 (NHL) (2 / 5 ,40 % ) ,2例多发性骨髓瘤 (MM) (2 / 8,2 5 % )中发现了 p5 3基因突变。其中 1例 AML,1例 NHL 及 1例 MM,均在检测后 3个月内死亡。结论 :p5

预防医学专业临床肿瘤学课程体系的开发与探索

恶性肿瘤发病率和死亡率逐年攀升,在人们中进行预防及健康宣教尤为重要。对承载着该项任务的预防医学专业临床肿瘤学教学课程进行开发性设置,确定所需的知识结构,探讨课程组合形式和教学方式。打破常规临床教学模式,突出预防医学专业特点,建立有预防医学专业特色的临床肿瘤学教学课程体系和教学模式。为培养合格的预防医学专业人才、进一步推动教学改革提供参考。

嵌合抗原受体T细胞治疗多形性胶质母细胞瘤的最新进展

多形性胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)是恶性程度最高的脑胶质瘤,传统手术结合放、化疗疗效有限。嵌合抗原受体是由单一分子组成的抗原重组受体,重新定向T细胞的特异性和功能,由CD28或4-1BB构成的第二代CAR-T能识别抗原,完全活化T细胞并增强T细胞功能和持久性,是新兴GBM疗法的关注焦点。本文从CAR-T研究现状出发,主要介绍其发展历程和GBM相关的有效靶点,综述其理论基础,着重以白介素13受体α2、表皮生长因子受体变异Ⅶ、人表皮生长因子受体2和酪氨酸蛋白激酶受体A2这四种胶质瘤相关抗原为例,探讨靶点的结构、功能特性、前期研究和临床研究前景。选择性表达在GBM的白介素13受体α2在临床Ⅰ期治疗复发性GBM是安全有效的;表皮生长因子受体变异Ⅷ只存在于癌细胞和胶质母细胞瘤干细胞,与预后不良密切相关,正在进行Ⅰ、Ⅱ期临床试验;表皮生长因子受体2和酪氨酸蛋白激酶受体A也取得重大进展。这些特异性CAR-T可能成为治疗相应靶向阳性的GBM的重要免疫疗法。本文集中总结了目前CAR-T治疗GBM的应用价值及挑战。

绿色荧光蛋白-荧光素酶标记的人源化非小细胞肺癌原位动物模型建立方法

目的采用绿色荧光蛋白-荧光素酶(GL)标记的人类非小细胞肺癌(NSCLC)细胞建立人源化NSCLC原位动物模型。方法制备GL逆转录病毒液。将上述病毒液转染至处于对数生长期的人类NSCLC细胞株(H460细胞)后进行流式分选,从而构建稳定的GL阳性H460细胞(H460-GL细胞)。将15只Nod-Scid小鼠随机分为低剂量组(n=5)、中剂量组(n=5)、高剂量组(n=5),分别以H460-GL细胞1.0×10^(4)个/20μL、1.0×10^(6)个/20μL、1.0×10^(8)个/20μL的密度进行小鼠肺组织原位注射。实验期间观察各组小鼠的一般情况及存活情况。每周通过荧光活体成像观察各组小鼠体内肿瘤的成活、生长情况。造模后第35天处死成瘤小鼠,取肺组织进行病理组织学观察。结果(1)大部分小鼠出现呼吸系统肿瘤相关症状;濒死期小鼠胸腔内均出现不规则形状的白色肿瘤组织,且其与周围肺组织及心脏粘连严重。(2)造模后第22天开始各组小鼠逐渐死亡,于造模后第35天低剂量组、中剂量组、高剂量组小鼠的存活率分别为80%(4/5)、20%(1/5)、0。(3)在低剂量组中,于造模后第14天仅有1只小鼠出现H460-GL细胞荧光,造模第28天的成瘤率为60%(3/5),且成瘤小鼠体内的荧光强度大小不一;在中剂量组、高剂量组中,所有小鼠在造模后第7天均出现H460-GL细胞荧光,且荧光均逐渐增强,在造模后第14天、第21天成瘤小鼠体内的荧光强度相似且较为均匀。结论该造模方法可获得稳定的人源化NSCLC原位动物模型,且操作简便、易于复制,可在动物体内模拟人类NSCLC发生、发展、转移过程,并能实时观察肿瘤大小与转移路径。

浒苔生长-衰亡过程中氮形态的迁移转化过程

针对浒苔氮吸收代谢机制,通过连续培养实验研究浒苔生长-衰亡过程中不同形态氮在藻体和培养液中的分布和迁移.结果表明,浒苔在生长期吸收NO_3^--N(17.37μmol/(g·d))而衰亡期向胞外释放NH_4^+-N(0.84μmol/(g·d));在生长期胞内NO_3^--N占无机氮(DIN)73.75%～92.15%,在衰亡期NH_4^+-N占无机氮60.87%～92.13%;培养液中溶解有机氮(DON)浓度持续增加,其中<1kDa组分占64%～98%,> 1kDa组分占2%～36%.在培养期藻体细胞吸收DIN速率平均为8.96μmol/(g·d),释放DON的平均迁移速率约为59.57μmol/(g·d).通过收支模型计算,浒苔将近60%DIN转化为以<1kDa组分占优的DON并分泌到胞外.由此可以推测,近海浒苔爆发可以在月际尺度上对水体生源要素结构产生显著影响.

CAR-T/TCR-T特异性肿瘤免疫治疗(详见光盘)

肿瘤免疫治疗是指直接或间接利用人体免疫系统对肿瘤患者进行有效治疗的方法,主要包括肿瘤疫苗、免疫检查点抑制剂、细胞免疫治疗以及细胞因子类等。伴随着全球首个CAR-T疗法的上市,活细胞作为一种全新的药物形式用于肿瘤治疗,预示着肿瘤免疫治疗经历百年发展终成“主角”。我们成功构建和完成30多种CAR-T功能测试,正在开展四种血液肿瘤的临床试验,具体包括:复发难治的急性淋巴细胞白血病;复发难治的B淋巴瘤;复发难治的多发性骨髓瘤;复发难治的粒细胞白血病和其它的血液肿瘤。

高架车站抗震设计实例分析

以东莞市轨道交通一号线道滘站高架车站为背景,建立三维有限元模型,对其进行了抗震性能分析验算。结果表明:在本地区多遇地震作用下,该高架车站墩柱强度满足规范要求;在罕遇地震作用下,该高架车站墩柱位移延性比及强度满足规范要求。计算结果为该高架车站的抗震设计提供依据,分析方法可为同类结构提供参考。

夏季南黄海颗粒氮同位素分布特征及影响因素研究

黄海是人类活动影响显著的半封闭陆架边缘海,在夏季存在特征鲜明的冷水团结构。为研究南黄海颗粒态氮的循环转化过程,本文通过分析2016年夏季南黄海水体颗粒物和表层沉积物的碳、氮含量及同位素,探讨南黄海近岸海域和冷水团海域颗粒物和表层沉积物氮含量、同位素的分布差异和影响因素。近岸海域颗粒氮(Particulate Nitrogen,PN)呈现出含量较高、氮同位素值(δ15NPN)垂向差异较小、沉积物总氮(Total Nitrogen,TN)含量较低且氮同位素值(δ15NTN)偏负的分布特征;冷水团海域PN呈现出含量低、δ15NPN垂向差异显著、沉积物TN含量高且δ15NTN偏正的分布特征。通过海底边界剪切应力模拟、环境因子分析并结合颗粒物与沉积物δ15N示踪分析,发现南黄海海域颗粒态氮及同位素分布主要受到水体/底边界动力过程影响,陆源输入和矿化过程亦共同参与调控。

黄芩苷联合小檗碱干预非酒精性脂肪性肝炎两种动物模型的病理学研究

目的从病理学的角度探讨黄芩苷联合小檗碱对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)两种动物模型的干预作用。方法选用6周龄SD大鼠及C57BL/6小鼠各40只,按随机数字表法各分为4组:正常对照组、NASH模型组、小檗碱组、黄芩苷+小檗碱组,每组10只。除正常对照组外,其他三组分别制备高脂饮食诱导的SD大鼠NASH模型及蛋氨酸-胆碱缺乏饮食诱导的C57BL/6小鼠NASH模型,小檗碱组造模的同时灌胃给予小檗碱,黄芩苷+小檗碱组造模的同时灌胃给予黄芩苷及小檗碱,大鼠持续8周后取材,小鼠持续2周后取材。肝组织制成石蜡切片进行HE染色,制成冰冻切片进行油红O染色,经光镜观察摄片后,采用非酒精性脂肪性肝病活动度积分表(NAS)对各组进行NASH评估。结果两种动物模型的NASH模型组肝脂肪变、小叶内炎症、肝细胞气球样变评分及NAS总分均显著高于正常对照组(P<0.01)。两种动物模型的小檗碱组、黄芩苷+小檗碱组肝脂肪变、小叶内炎症、肝细胞气球样变评分及NAS总分均显著低于NASH模型组(P<0.05或P<0.01)。结论黄芩苷及小檗碱可显著抑制NASH相关病理变化的发生、发展,对NASH具有一定的干预作用。

CAR-T治疗B细胞淋巴瘤不良反应的Meta分析

背景与目的:复发、难治性B细胞淋巴瘤患者常规治疗方案难以奏效,研究新的治疗技术和改善预后迫在眉睫。近年来,嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell,CAR-T)技术在B细胞淋巴瘤治疗中的突破,为复发、难治性B细胞淋巴瘤患者带来了新的希望。探讨在CAR-T技术治疗B细胞淋巴瘤的过程中,细胞因子释放综合征(cytokine release syndrome,CRS)和神经毒性等不良反应的发生率,为更加合理、安全地应用CAR-T提供理论依据。方法:检索PubMed数据库和Cochrane Library数据库的英文文献,研究从建库至2018年1月为止公开发表的CAR-T治疗B细胞淋巴瘤的10篇文献。发生率作为结局指标,按照不良反应(CRS和神经毒性)的不同,采用Meta分析汇总发生率。结果:CAR-T治疗B细胞淋巴瘤的过程中CRS的总发生率为57%(95%CI:0.25~0.90),神经毒性的总发生率为48%(95%CI:0.30~0.66)。结论:CAR-T治疗B细胞淋巴瘤的过程中CRS和神经毒性均有较高的发生率,需要引起足够重视。

优化第三代慢病毒载体稳定表达β-珠蛋白治疗β-地中海贫血的研究

目的:优化第三代慢病毒载体HS4区实现β-珠蛋白稳定表达,为β-地中海贫血安全有效的细胞治疗提供研究依据。方法:优化第三代慢病毒表达载体HS4区构建lenti-HBB;转染小鼠红白血病细胞系MEL后,通过RT-PCR、Western-blot分析β-globin基因转录及翻译情况;进一步通过正常人脐带血及重型β-地中海贫血患者外周血CD34^(+)细胞感染lenti-HBB,经克隆形成实验、细胞涂片实验及流式细胞术检测CD34^(+)细胞是否发生红系分化;通过NSG小鼠体内实验验证lenti-HBB的安全性及有效性。结果:小鼠MEL细胞感染优化后的lenti-HBB后能稳定表达β-珠蛋白;正常人脐血及重度β-地中海贫血患者外周血CD34^(+)细胞感染优化后的lenti-HBB后可分化为红细胞;人CD34^(+)细胞感染优化后的lenti-HBB移植NSG小鼠3.5个月后表达β-珠蛋白。结论:通过优化第三代慢病毒载体HS4区稳定表达CD34^(+)细胞β-珠蛋白,对重型β-地中海贫血及其他β-珠蛋白异常疾病是安全有效的。

信号增强技术在超深管道检测中的重要性

目前行业内针对大埋深穿越管段检测的有效技术手段十分匮乏,无法进行有效的管道定位、埋深测量及防腐层状况检测。在超深管线探测项目中,管道运营方更多关注管线的路由位置,检测仪发射机可采用卫星同步的方式为管道加载多个检测信号产生叠加效果,有效增加了信号强度,为高精度定位管线奠定了坚实的基础。设备还可以通过测量管道上施加电流信号的衰减情况来评估管道防腐层的质量,管道运营方对防腐层薄弱位置予以有效保护。

一种基于突变型IgG4长铰链区和4-1BB共刺激域的靶向CD19 CAR-T细胞构建及抗白血病的功能研究

目的:构建一种基于突变型IgG4长铰链区和4-1BB共刺激域的靶向CD19 CAR-T细胞(CART19),并在体内和体外证明其抗肿瘤的能力。方法:构建CD19 CAR的逆转录病毒载体,逆转录病毒转导植物血球凝集素(PHA)刺激的健康志愿者T细胞,从而获得CART19细胞;采用流式细胞术和Western blot检测转导效率;采用流式细胞术检测细胞内CD107a和IFN-γ水平,以及CFSE染色后的细胞增殖情况;4 h荧光杀伤实验评估CART19细胞的体外抗肿瘤能力;ELISA法检测共培养上清液的IFN-γ释放水平;建立白血病小鼠模型评估CART19细胞的体内抗肿瘤作用。结果:成功构建了一种新的CART19细胞;CD19^(+)细胞可以特异性刺激CART19细胞表达CD107a和IFN-γ、促进CART19细胞增殖以及分泌IFN-γ;4 h共培养荧光杀伤实验显示CART19细胞对NALM6-GL具有良好的体外抗肿瘤活性;CART19细胞可以显著提高白血病小鼠的生存率。结论:成功构建了可以有效治疗CD19^(+)肿瘤的基于突变型IgG4长铰链区和4-1BB共刺激域CART19细胞,为下一步临床治疗奠定了基础。