长爪沙鼠速发型高脂血症模型的初步建立

目的建立长爪沙鼠速发型高脂血症模型的方法。方法用含1%胆固醇高脂饲料分别饲养大鼠、小鼠和沙鼠,检测其血清TC、HDL-c、LDL-c、TG,比较三种动物对饲料反映的特点。结果沙鼠组的TC、HDL-c及LDL-c在第1周时明显的升高,并且平稳的保持此升高趋势到第四周。而TG数值相对平稳,没有变化。而大鼠和小鼠的TC、HDL-c、LDL-c、TG值没有变化。结论通过饲喂高脂饲料可快速诱发长爪沙鼠形成高脂血症模型。

香菇C_(91-3)菌丝发酵液蛋白口服液抗肿瘤免疫机制的探讨

[目的]探讨香菇C91-3菌丝发酵液蛋白(LFP91-3)口服液的抑制肿瘤作用及机制。[方法]取60只昆明小鼠,随机分6组后进行S180荷瘤,并对荷瘤小鼠分别给予蒸馏水和不同剂量的LFP91-3口服,观察剂量对小鼠生存期的影响,确定LFP91-3的最适剂量。同时观察口服最适剂量后荷瘤小鼠淋巴细胞增殖反应,血清IL-2和TNF-α含量的变化,以蒸馏水口服组为对照。[结果]LFP91-3口服液能延长荷瘤小鼠的生存期,且存在一定的剂量依赖关系。LFP91-3最适剂量组小鼠淋巴细胞增殖率,血清IL-2和TNF-α水平分别为(44.11±14.4)%(,48.33±16.7)pg/mL和(84.27±16.88)pg/mL,明显高于对照的蒸馏水组(18.04±8.72)%(,30.5±3.58)pg/mL和(35.05±17.29)pg/mL,P<0.05。[结论]LFP91-3口服液具有体内抑瘤作用,其抑瘤作用可能与机体免疫能力提高有关。

长爪沙鼠的高脂血症与动脉粥样硬化相关性分析

目的探讨沙鼠高脂血症与动脉粥样硬化的相关性。方法用含1%胆固醇+10%猪油+10%蛋黄粉的高脂饲料饲养沙鼠120 d,检测血清总胆固醇(TC),高密度脂蛋白胆固醇(HDL_c),低密度脂蛋白胆固醇(LDL_c),血清甘油三酯(TG)的变化,在120 d时处死动物,取各组织作形态学观察。结果高脂组沙鼠的TC、HDL_c、LDL_c的值一直都明显高于对照组,以LDL_c升高为主,且出现了严重的脂肪肝,肝硬化,脾脏肿大和主动脉根部粥样硬化。结论加重高脂血症的程度能导致长爪沙鼠形成动脉粥样硬化的病理改变,沙鼠可能是一种适合研究脂肪肝的实验动物。

基于Solexa高通量测序的香菇C_(91-3)功能基因的挖掘和开发

香菇是全球人工种植最为普遍的食用菌,近年来,国内外的研究者对香菇进行了深入的研究,发现香菇在预防、治疗恶性肿瘤方面都具有重要的药用价值。尤其是香菇多糖制剂现已正式作为辅助化疗药物应用于临床。但是对香菇中蛋白质生物学活性的研究以及从蛋白质水平去发掘其抗肿瘤活性的功能基因却鲜有报道。本文拟就香菇的基因组、转录组及功能基因挖掘和开发现状进行简要论述。

香菇C91-3 cDNA文库的构建及鉴定

目的构建香菇C91-3 cDNA文库。方法低速离心法收集香菇C91-3菌丝体发酵液中的菌丝,提取总RNA,巢式PCR扩增5SrRNA非转录间隔区2片段并测序鉴定。纯化mRNA,以mRNA为模板进行反转录反应;产物与pBlue-Script II SK(+)载体连接,并转化E.coil DH10B,检测库容及插入片段。结果香菇C91-3cDNA文库初始库容为7.2×106cfu,插入片段长度0.4～3.4kb,平均1.5kb。结论成功构建香菇C91-3 cDNA文库,适合用于研究香菇蛋白的编码基因。

重组人IL-18对辐射损伤后小鼠脾细胞因子的免疫调节作用

目的探讨重组人白细胞介素18(IL-18)对辐射损伤后小鼠脾细胞因子的免疫调节功能。方法32只C57小鼠分对照组、单纯辐射组、IL-18+辐射损伤组和辐射损伤+IL-18组进行辐射损伤,2周后取小鼠脾淋巴细胞体外培养,用试剂盒测定其培养上清中IL-2、γ干扰素(IFN-γ)、粒细胞-巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)、IL-4和血清中IgG的含量,观察IL-18对辐射损伤小鼠脾细胞因子的免疫调节作用。结果与对照组比较,重组人IL-18能够提高辐射损伤前后小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ、GM-CSF和IL-2的能力,辐射损伤后应用IL-18组细胞因子的水平高于辐射损伤前应用IL-18组;但对IL-4分泌能力和血清中IgG含量没有调节作用。结论重组人IL-18具有促进辐射损伤小鼠脾细胞因子分泌IL-2、IFN-γ和GM-CSF的作用。

香菇C_(91-3)转录本Unigene14872基因Pkinase结构域的克隆表达及其生物信息学分析

旨在克隆香菇C91-3转录本Unigene 14872基因中的Pkinase结构域,并对其进行生物信息学分析。提取香菇C91-3菌丝体中总RNA,根据转录组测序结果,用3'-Full RACE、5'-Full RACE方法获得Unigene 14872基因全长。用NCBI对其进行生物信息学分析,预测其具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Pkinase)结构域。设计引物PCR扩增Pkinase结构域,然后克隆至pET32a(+)载体,再热转化至JM109中保存并进行质粒测序。重组质粒pET32a(+)-Pkinase构建成功,并成功诱导表达重组蛋白,初步鉴定该蛋白具有抗肿瘤活性,为进一步研究重组蛋白的活性及作用机制奠定基础。

香菇C_(91-3)转录本Unigene 24277基因克隆表达及其生物学活性的研究

通过对香菇C91-3转录本Unigene 24277基因的生物信息学分析,克隆表达含RCC1结构域的Unigene24277基因,并研究其抗肿瘤活性。从香菇C91-3菌丝体中提取总RNA,反转录合成c DNA,并利用Rapid Amplification of c DNA Ends(RACE)技术获得基因全长。NCBI数据库分析提示其含有RCC1结构域。PCR扩增RCC1结构域,将其克隆产物与p ET-32a(+)载体连接,热转化至E.coil Rosetta-gami(DE3)中诱导表达,纯化、复性后,通过MTT法研究其抗肿瘤活性。结果显示原核表达载体构建成功,重组蛋白成功诱导表达,并初步证明了重组蛋白具有抑制肿瘤细胞增殖活性的功能,为后续抗肿瘤机制的探究奠定了基础。

Synthesis, Structural Features and Evaluation of Antibacterial Activities of Two Schiff Bases Derived from 3,4-Dihydroxybenzhydrazide

A new Schiff base compound （I）, （E）-N＇-（2-hydroxy-3-methoxybenzylidene）-3,4-dihydroxybenzohydrazide-ethanol-water （1/1/1）, has been synthesized and characterized by elemental analysis, IR spectra, and single-crystal X-ray diffraction. The crystal belongs to monoclinic, space group P21/n with a = 7.459（4）, b = 18.316（10）, c = 13.638（7）, β = 101.585（9）o, V = 1825.2（17）3, Z = 4, μ = 0.104 mm-1, Dc = 1.333 g/cm3, F（000） = 776, the final R = 0.0635 and wR = 0.1302 for 3216 observed reflections with I 〉 2σ（I）. Another compound （Ⅱ）, （E）-N＇-（2,5-dimethoxybenzylidene）-3,4-dihydroxybenzohydrazide-ethanol-water （1/1/1）, has been synthesized and reported before. The antibacterial activities of these two compounds against seven bacteria were first evaluated, and one compound showed considerable antibacterial activity against S. aureus.

香菇C91-3菌丝发酵蛋白对H22肿瘤细胞体内外抗肿瘤机制的初探

目的探讨香菇C91-3菌丝发酵蛋白(LFP91-3)对H22肿瘤细胞抑瘤作用及相关机制。方法应用不同剂量LFP91-3(50、100和150μg)对H22荷瘤小鼠腹水瘤模型和腋下实体瘤进行治疗,观察其生存期和体内抑瘤作用;并用MTT法(LFP91-3浓度5、10、15μg/mL)和流式细胞仪对经LFP作用的H22肿瘤细胞进行观察和检测。结果香菇C91-3菌丝发酵提取蛋白(LFP91-3)能延长H22荷瘤小鼠的生存期,对体外培养的H22有直接杀伤作用,抑瘤率出现对浓度和时间的依赖性。LFP91-3能将H22肿瘤细胞株细胞周期阻滞到S期并诱导出细胞凋亡。结论 LFP91-3在体内、外对H22肿瘤细胞有较好的抑瘤作用,主要是诱导其调亡。

浅谈对科研融入到医学微生物学教学中以提高培养大学生的科研创新能力的体会

1969年美国麻省理工学院（MIT）首倡的＂本科研究机会计划＂（The Undergraduate Research Opportu-nities Program,简称UROP）作为一种有效尝试,经过40年的发展与变革已成为世界诸多知名高校普遍效仿的做法。20世纪90年代以来,国内部分高校开始秉承这一思路,实施本科生科研训练计划（StudentResearch Training Plan,简称SRTP）,被普遍认为是一条培养创新人才的有效途径,

灵芝多糖对3T3-L1胰岛素抵抗细胞模型PI-3K p85和GLUT4蛋白表达的影响

目的研究灵芝多糖对3T3-L1胰岛素抵抗细胞模型PI-3K p85和GLUT4蛋白表达的影响,探讨灵芝多糖改善胰岛素抵抗的分子机制。方法 3T3-L1前脂肪细胞经1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤、地塞米松、胰岛素诱导分化成3T3-L1脂肪细胞,以葡萄糖氧化酶法测定培养液中残余的葡萄糖含量。比较二甲双胍组,检测培养液中葡萄糖含量及PI-3K p85和GLUT4蛋白表达变化。结果地塞米松联合胰岛素诱导3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗,细胞对葡萄糖的摄取量减少。灵芝多糖可改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗。胰岛素抵抗细胞的PI-3K p85和GLUT4蛋白表达明显减少;应用灵芝多糖后,相关蛋白表达增加。结论灵芝多糖通过提高PI-3K p85和GLUT4蛋白的表达,参与胰岛素抵抗状态下3T3-L1细胞的葡萄糖代谢。

CBL教学法在医学微生物学留学生教学中的构建与实践

目的在医学微生物学的留学生教学中探索与实践CBL教学法。方法通过案例设计,教师培训,课程设置及考核与评价,在我校留学生的医学微生物学教学中构建了CBL教学法。结果激发了学生的学习兴趣,拓宽了学生的知识面,学生分析问题解决问题的能力得到改善,同时也促进了教师的专业水平。结论 CBL教学法可以提高留学生医学微生物学教学效果。

医学微生物学设计性实验教学探索

医学微生物实验教学是医学微生物学的重要的组成部分,其教学效果的好坏直接影响到医学生今后的实践能力。而设计性实验有助于提高学生的动手能力、独立分析解决问题的能力,使学生对知识的掌握更加坚实本文从更新教师教学理念,科学设计实验课程体系、优化实验教学内容、实验平台同步对接四个方面阐述了设计性实验在医学微生物实验教学中的应用。

香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414在毕赤酵母GS115中的表达与鉴定

目的通过构建毕赤酵母表达载体将香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414在毕赤酵母GS115中进行表达,同时对表达产物进行鉴定。方法从香菇菌C91-3菌丝体中提取总RNA,根据转录组测序结果,用3'-Full RACE、5'-Full RACE方法获得24414基因,并将其克隆到毕赤酵母的表达载体pPIC9K中,构建真核重组表达质粒pPIC9K-24414。用电转化的方法将此质粒转化到毕赤酵母GS115中并进行诱导表达,对表达产物用Westen-blot方法进行鉴定。结果通过菌落PCR和基因序列分析确定插入pPIC9K中的片段为24414基因片段,通过Westen-blot方法确定所表达蛋白为目的蛋白。结论重组质粒pPIC9K-24414成功构建,目的凋亡相关蛋白24414在毕赤酵母GS115中成功表达,为进一步研究香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414的生物学功能奠定了基础。

香菇C_(91-3)菌丝发酵液蛋白LFP_(91-3C)小鼠体内抗肿瘤免疫机制研究

目的探讨香菇C91-3菌丝发酵液蛋白LFP91-3C的体内抗肿瘤免疫机制。方法H22瘤细胞荷瘤纯系BALB/C小鼠建立动物模型,随机分为生理盐水(NS)对照组、环磷酰胺(CTX)治疗组和LFP91-3C治疗组,观察LFP91-3C对荷瘤小鼠生存期、实体瘤块生长抑制及病理、荷瘤小鼠免疫细胞(NK细胞活性、淋巴细胞增殖率)和免疫因子(血清IL-2、IFN-γ含量)的影响。结果LFP91-3C能显著延长荷瘤小鼠的生存期,抑制实体肿瘤的生长,可在病理切片看到大量的炎细胞浸润,以及NK细胞活性、淋巴细胞增殖率、血清IL-2和IFN-γ含量也显著提高。与NS对照组和CTX治疗组比较差异有显著性。结论LFP91-3C能通过激活机体免疫系统来实现其抗肿瘤的作用。

香菇提取物的生物作用概述

针对香菇提取物具有抗病毒、抗细菌、抗肿瘤以及调节免疫功能等特点,介绍了香菇提取物的多种生物作用和作用机制,最后指出香菇提取物在临床治疗和预防中的广阔应用前景。

桑螵蛸挥发油的提取及对MRSA体外抑菌效应的初步研究

目的研究桑螵蛸挥发油提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的体外抑菌效应。方法采用索氏提取法提取桑螵蛸中挥发油成分,在鉴定耐药基因基础上,再采用纸片扩散法(K-B法)、试管稀释法(MIC法)、吸光度值测定法来观察桑螵蛸挥发油提取物对MRSA的体外抑菌效应。结果桑螵蛸挥发油提取物对MRSA的生长表现出抑制效应。结论桑螵蛸挥发油提取物对MRSA具有一定的抑菌效应,为下一步研究其详细有效成分及开发提供数据和理论依据。

香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414对人肺癌细胞A549凋亡作用及其机制的研究

目的:研究香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414对人肺癌细胞A549的凋亡诱导作用,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法:将用毕赤酵母GS115体系进行诱导表达并已鉴定的香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414作用于人肺癌细胞A549,用MTT法测定目的蛋白的抑瘤率,用流式细胞术检测目的蛋白对肿瘤细胞的诱导凋亡作用,用ELISA法测定目的蛋白对肿瘤细胞Caspase-3活性的影响,同时用MTT法检测目的蛋白对正常鸡胚成纤维细胞的毒性作用。结果:流式细胞术与MTT法检测结果显示,终浓度为7.5、15和30μg/mL的此蛋白对A549细胞凋亡作用与对照组比较差异有统计学意义。ELISA法检测结果显示以上浓度的此蛋白对A549细胞Caspase-3活性影响与对照组相比较差异也有显著性意义(7.5μg/mL组vs对照组:t=8.787,P=0.000;15μg/mL组vs对照组:t=13.429,P=0.000;30μg/mL组vs对照组:t=36.908,P=0.000)。同时此蛋白对正常鸡胚成纤维细胞无毒性作用。结论:香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414在对正常鸡胚成纤维细胞无毒性作用的同时对人肺癌细胞A549具有诱导凋亡作用,其凋亡途径可能通过Caspase-3通路。