猪肠道非致病性且无耐药性大肠杆菌的分离鉴定、生长特性和基因组进化分析

【目的】从猪肠道中分离出无毒力基因且无抗生素耐药性的大肠杆菌,并分析其生长性能和遗传进化规律,以期为开发猪用微生态制剂或口服疫苗奠定基础。【方法】采集广东省2个地区养猪场的11头和15头健康成年猪的粪便样本。首先,采用培养方法从麦康凯培养基中分离出疑似大肠杆菌的菌株,通过16S rRNA序列分析鉴定其是否为大肠杆菌菌株;然后,采用PCR方法验证所选大肠杆菌是否含有13种常见的猪致病性大肠杆菌毒力基因,并以7类(14种)抗生素进行药敏试验;最后,对筛选出的优质大肠杆菌菌株进行生长动力学分析,并提取其全基因组DNA,构建全基因组系统进化树。【结果】在260株疑似为大肠杆菌菌株中,经16S rRNA序列分析确认后有206株属于大肠杆菌。其中,107株大肠杆菌不含13种常见毒力基因,25株大肠杆菌对7类(14种)抗生素敏感。在这25株菌株中,有23株非致病性且无抗生素耐药性大肠杆菌(编号为2-9、3-2、3-4、5-1、6-1、6-2、6-9、6-10、8-2、8-9、10-5、B-4、B-6、B-7、B-10、D-10、E-2、E-10、J-1、J-4、K-6、L-6和O-9)的生长性能与大肠杆菌Nissle1917、MG1655相似,其他2株大肠杆菌(编号为6-4和5-2)的生长速度高于Nissle 1917和MG1655。此外,有10株菌株(编号为E-10、E-2、6-4、6-9、8-2、O-9、3-2、6-2、J-1、K-6)耐酸性能较好,可能适合长期定殖于猪胃肠道内。基于SNP核心基因组系统进化树分析,发现这25株菌株中有9株菌株(编号为3-2、6-10、10-5、6-1、8-9、5-2、L-6、O-9、K-6)在系统进化树开端处属于同一大类群,表明它们极可能为猪原生大肠杆菌的祖先群。【结论】综合上述大肠杆菌的抗生素敏感性、生长性能和全基因组进化树和胃液环境耐受性能分析,菌株O-9在这4个方面均具备优势,该菌株与大肠杆菌Nissle 1917、MG1655的生长动力学相似甚至更优,意味着O-9菌株可能是优质的猪肠道原生大肠杆菌,具有极大研究潜力。

仔猪阶段使用过抗生素的陆川猪母猪肠道和乳汁中大肠杆菌的耐药性及毒力基因分析

【目的】尽管替抗减抗政策已出台多年,但为预防和治疗疾病,在仔猪早期使用抗生素仍然是集约化养殖场养殖管理的一个重要环节。研究养殖场中仔猪阶段使用过抗生素的母猪体内不同部位(肠道和乳腺)大肠杆菌的耐药性和毒力差异情况,为集约化养殖场抗生素使用的优化提供科学依据。【方法】记录广东省湛江市某集约化陆川猪场母猪从仔猪出生后至约420日龄的抗生素使用情况,从同一批次约420日龄的健康母猪中收集初乳(分娩后2 h内)、常乳(分娩后24~72 h内)及肛门内新鲜粪便样品,通过麦康凯鉴别培养基分离出疑似大肠杆菌。通过药敏试验分析大肠杆菌耐药性和PCR检验毒力基因存在情况。【结果】通过麦康凯鉴别培养基分离出疑似大肠杆菌共704株,其中粪便大肠杆菌300株、初乳大肠杆菌220株、常乳大肠杆菌184株。药敏试验显示,粪便大肠杆菌对氨苄西林和四环素的耐药率为96.3%(289/300),对其他常规抗生素的耐药率为63.6%(7/11),总耐药率98.7%(296/300);初乳大肠杆菌对氨苄西林和四环素的耐药率为99.5%(219/220),对其他常规抗生素的耐药率为100%(1/1),总耐药率100%(220/220);常乳大肠杆菌对氨苄西林和四环素的耐药率为40.8%(75/184),对其他常规抗生素耐药率为67.9%(74/109),总耐药率81.0%(149/184)。最终鉴定出39株无耐药性的大肠杆菌。PCR检测显示,39株无耐药性的大肠杆菌中大多数不含猪致病性大肠杆菌常见毒力基因(占比89.74%,35/39)。此外,无耐药性常乳大肠杆菌中含毒力基因的菌株占比仅为2.86%(1/35),无耐药性粪便大肠杆菌中含毒力基因的菌株高达75.0%(3/4)。【结论】仔猪阶段使用过抗生素防控病害的陆川猪,到生长成初产母猪后,从其肛门和乳腺中分离的大肠杆菌菌株中仍存在少数无耐药性且无毒力基因的大肠杆菌菌株。其中,粪便中的无耐药性且无毒力基因大肠杆菌占比极少,仅为0.33%(1/300);分娩2 h内的初乳中未能分离出无耐药性且无毒力基因的大肠杆菌,占比0%(0/220);但分娩后24~72 h内的常乳中仍存在较高比例的无耐药性且无毒力基因的大肠杆菌,占比18.48%(34/184)。

25株猪肠道无毒力且不耐药大肠杆菌的分离鉴定、生长特性及遗传进化分析

该研究旨在从猪肠道中分离出无毒力基因且无耐药性的大肠杆菌菌株,分析其生长性能和遗传进化关系,进行致病性大肠杆菌常见的13个毒力基因的PCR检测和7类(14种)抗生素敏感性试验。测定无毒力且不耐药菌株的生长曲线,构建16S rRNA基因系统进化树。结果显示,该研究共分离鉴定出206株大肠杆菌,107株大肠杆菌不含13种常规毒力基因,其中25株对7类(14种)抗生素敏感,这25株无毒力且不耐药大肠杆菌的生长曲线与3株典型大肠杆菌相似。16S rRNA进化树分析显示,有4株大肠杆菌与典型益生菌菌株的进化关系接近。综合生长曲线和16S rRNA进化树的结果,4株大肠杆菌可能是优质的猪肠道原生大肠杆菌菌株,具有研究潜力。

基于嵌入式系统的红外通讯解码应用

红外遥控是目前无线通讯中使用较为广泛的一种,具有协议简单、功耗低、适应性强的优点.基于红外遥控的通信协议,提出一种基于嵌入式系统的红外通讯方法,将波形采集和数据分析解码工作各自独立,具有波形采集完整、兼容性高和移植性强等优点.