-
题名缢蛏SRAP-PCR体系的正交优化
- 1
-
-
作者
钟玉民
刘达博
冯冰冰
陈慧
林国文
李家乐
-
机构
上海海洋大学水产与生命学院农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室
福建省闽东水产研究所
-
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期99-103,共5页
-
基金
国家"863"计划项目(2006AA10A410)
福建省海洋与渔业局重点项目(闽海鱼2007015)
-
文摘
运用L_(16)(4~5)正交设计对影响缢蛏SRAP-PCR反应的5个因素:Taq酶浓度、Mg^(2+)浓度、模板DNA浓度、dNTPs浓度和引物浓度在4个水平上进行了优化试验,PCR结果采用SPSS v16.0软件分析。结果表明,各因素对SRAP-PCR反应的影响依次为:引物>Taq酶>模板DNA>Mg^(2+);缢蛏SRAP反应最佳体系为:在20μL PCR反应体系中,引物0.3μmol/L、Taq酶0.5 U、模板DNA 50 ng、dNTPs 0.2 mmol/L及Mg^(2+)2 mmol/L。用不同缢蛏的基因组DNA两次SRAP-PCR扩增,8对引物均能扩增出清晰且重复性好的谱带。因而建立的缢蛏反应体系稳定可靠。
-
关键词
缢蛏
SRAP
正交设计
优化
-
Keywords
Sinonovacula constricat SRAP Orthogonal design Optimization
-
分类号
S917.4
[农业科学—水产科学]
-
-
题名缢蛏ScHsc70 cDNA的分子特性和表达分析
被引量:11
- 2
-
-
作者
冯冰冰
牛东红
钟玉民
陈慧
林国文
李家乐
-
机构
上海海洋大学水产与生命学院
福建省闽东水产研究所
上海市高校水产养殖学E研究院
-
出处
《中国水产科学》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期33-44,共12页
-
基金
国家高技术研究发展计划项目(2006AA10A410)
福建省海洋与渔业局重点项目(闽海鱼2007015)
+1 种基金
上海高校创新团队建设项目
上海高校选拔培养优秀青年教师科研专项基金(SSC09016)
-
文摘
从缢蛏(Sinonovacula constricta Lamarck)cDNA文库中筛选出一条热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)同源序列,采用EST扩增和5′RACE(rapid amplification of cDNA ends,RACE)扩增方法获得全长cDNA序列,共2 335 bp,包括76 bp的5′非翻译区和309 bp的3′非翻译区,以及1 950 bp的开放阅读框。阅读框共编码649个氨基酸,推算的分子量约为70.89 kD,理论等电点为5.28。氨基酸序列分析结果表明,该基因的氨基酸序列含有HSP70家族的3个签名序列,2个糖基化位点,1个ATP-GTP结合位点,且C末端具有GGXP四肽重复序列以及细胞质特异性调控基序EEVD。该基因是组成型HSC70(Heat shock cognate 70)亚家族基因成员,被命名为ScHsc70。基于氨基酸序列的双壳贝类聚类分析表明,缢蛏与南极帽贝(Laternula elliptica)、文蛤(Meretrix meretrix)的亲缘关系最近。荧光定量表达分析显示,ScHsc70 mRNA在缢蛏水管、鳃、斧足、外套膜、肝和性腺等组织中以不同水平存在,其中在外套膜中的表达量最低,而在水管和肝中的表达量最高。经副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)和副鳗弧菌(V.anguillarum)诱导后,ScHsc70 mRNA在缢蛏肝中的水平呈现先升高后下降的变化趋势,且分别在感染后的第20小时和第30小时达到最高。结果提示,缢蛏ScHsc70基因可能参与了对细菌感染的防御反应。
-
关键词
缢蛏
热休克蛋白70
序列分析
基因表达
-
Keywords
Sinonovacula constricta
heat shock protein 70
sequence analysis
gene expression
-
分类号
S917
[农业科学—水产科学]
-
-
题名缢蛏β-ACTIN1基因的分子特性及其表达分析
被引量:4
- 3
-
-
作者
冯冰冰
钟玉民
牛东红
陈慧
林国文
李家乐
-
机构
上海海洋大学水产与生命学院
福建省闽东水产研究所
上海海洋大学水产与生命学院
-
出处
《水产学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第5期650-659,共10页
-
基金
国家“八六三”高技术研究发展计划(2006AA10A410)
福建省海洋与渔业局重点项目(闽海鱼2007015)
上海高校创新团队建设项目
-
文摘
为研究缢蛏功能基因的表达调控,利用SMART cDNA文库构建试剂盒成功构建了缢蛏肝脏组织的标准化cDNA文库。对随机选取的5 679个克隆进行随机测序,比对、筛选出2条β-actin同源序列,对其中一条EST序列两端进行扩增、测序,然后进行5′RACE(rapidamplification of cDNA ends,RACE)扩增、测序,拼接得到全长cDNA序列,命名为β-ACTIN 1。该序列全长为1 552 bp,包括73 bp的5′非翻译区和348 bp的3′非翻译区,以及1 131 bp的开放阅读框。阅读框共编码376个氨基酸,推算分子量约为41.95 ku,理论等电点为5.23。与其他7种软体动物的氨基酸序列进行比对发现,β-ACTIN1基因的氨基酸序列中Ile179、G lu229、Ser232、Pro236、Ile248、Asn272、Cys273、Val283、Ser320、Ser325、Val330、Pro339等12个氨基酸残基具有特异性;同时发现缢蛏β-ACTIN 1氨基酸序列与其他软体动物的相似性高达97%以上。系统进化分析显示,缢蛏首先与软体动物聚在一起,然后与节肢动物聚在一起,再依次与鱼类、两栖类、哺乳类聚在一起。荧光定量PCR检测结果显示,β-ACTIN1基因在缢蛏各组织中的表达及鳗弧菌诱导后的表达均不稳定,不适合作为内参基因。
-
关键词
缢蛏
CDNA文库
β-ACTIN1基因
序列分析
基因表达
-
Keywords
Sinonovacula constricta
cDNA library
β-ACTIN 1 gene
sequence analysis
gene expression
-
分类号
Q786
[生物学—分子生物学]
S917
[农业科学—水产科学]
-
-
题名带压漏点手工电弧焊堵漏方法探讨
被引量:1
- 4
-
-
作者
钟玉民
-
机构
黑龙江省鸡西市大盛(供热)集团热网建设管理处
-
出处
《河南科技》
2011年第4X期66-66,共1页
-
文摘
在连续生产的企业中,压力容器和管道在生产过程中是不可缺少的,这就不可避免地会产生管路渗漏问题。为了不影响生产,技术人员需经常处理带压堵漏问题。笔者经过长时间的摸索实践,总结出一套行之有效的焊接方法,可以有效地在不同介质、不同压力的漏点焊接堵漏。一、电源、焊接材料和电源的选用手工电弧焊电源选用直流焊机,焊接材料根据母材的不同进行选用,一般选用碱性低氢型焊条(此焊条黏性较大。
-
关键词
手工电弧焊
堵漏方法
低氢型焊条
焊接材料
带压
熔滴
立焊
生产过程
泄漏点
焊接电流
-
分类号
TG444.1
[金属学及工艺—焊接]
-
-
题名综合水灰比对水泥土工程性质的影响
被引量:2
- 5
-
-
作者
杨庆丰
柯云姝
钟玉民
-
机构
黑龙江建筑职业技术学院
哈尔滨天值混凝土有限公司
黑龙江省体育局
-
出处
《低温建筑技术》
2004年第2期62-63,共2页
-
文摘
深层搅拌法是当前应用非常广泛的一种地基加固技术。本文提出了一个新的参数即为 :综合水灰比 (WC C) ,作为影响水泥搅拌桩桩身材料的工程性质的主要因素。
-
关键词
综合水灰比
胶结强度
屈服面
三轴压缩试验
-
分类号
TU473.13
[建筑科学—结构工程]
-