中草药黄嘌呤氧化酶抑制剂的筛选与作用机制研究

研究8种梅州客家地区常用中草药水提物对黄嘌呤氧化酶活性的抑制作用.研究测定了中草药提取物中的黄酮含量,抗氧化活性,黄嘌呤氧化酶抑制率,并对抑酶效果最好的鸡骨草进行网络药理学分析.结果表明,8种中草药水提物对黄嘌呤氧化酶具有不同程度的抑制作用,其中鸡骨草抑制效果最好,在药物浓度400μg/mL时对酶的抑制率达到46.65%,IC50为201.2μg/mL.其可能通过β-sitosterol、Sophoradiol、Abrisapogenol G、Stigmasterol和Taraxasterol 5种主要成分影响ESR1、PTGS2、RXRA、CYP27B1和AR等靶点,调控pathways in cancer、small cell lung cancer、Lipid and atherosclerosis、Estrogen signaling pathway、Thyroid hormone signaling pathway等通路发挥痛风的治疗作用.研究为客家常用中草药药效物质基础的进一步研究及其降尿酸应用提供参考,并为其治疗痛风的相关作用机制提供理论基础.

柚果醇提物的体外抗氧化及改善肝细胞脂质堆积的研究

为探究柚果醇提物抗氧化及对油酸钠诱导的HepG2细胞内脂质堆积作用,对柚果醇提物主要成分含量进行测定,采用1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)清除试验评价提取物的抗氧化潜力.通过CCK-8法检测不同浓度油酸钠和柚果醇提物对HepG2细胞活力的影响并选择适宜浓度进行后续试验.通过油红O染色法判断油酸钠诱导构建的脂质堆积模型是否成功,并采用试剂盒测定柚果醇提物对甘油三酯含量的影响.柚果醇提物的黄酮、总酚含量分别为380.13、30.16 mg/g.其中柚皮苷、橙皮苷和野漆树苷的含量为128.57、2.21和4.58mg/g.柚果醇提物DPPH自由基清除能力具有浓度依赖性.一定剂量(0.125~0.5 mg/mL)柚果醇提物对HepG2细胞存活无影响,可以降低油酸钠所致的肝细胞胞内甘油三酯含量.柚果醇提物具有抗氧化价值,可以改善油酸钠诱导的HepG2细胞脂质堆积.

不同直径及黑曲霉对柚果总黄酮、柚皮苷、橙皮苷和野漆树苷含量的影响

研究不同直径大小柚果中总黄酮、总酚、柚皮苷、橙皮苷和野漆树苷含量的变化及黑曲霉对柚果黄酮类成分的影响.无菌柚果接入黑曲霉,恒温恒湿培养下于不同时间点进行取样.采用紫外分光光度法和高效液相色谱法分别测定不同直径大小柚果及黑曲霉发酵后柚果中总黄酮、柚皮苷、橙皮苷和野漆树苷的含量.不同直径大小各柚果总黄酮、总酚和柚皮苷的含量随柚果直径的增大而下降.黑曲霉反接后,发酵组总黄酮、柚皮苷和野漆树苷含量呈下降趋势,橙皮苷含量先增后减,在发酵第36 h达到最高.柚果直径、黑曲霉发酵均对柚果总黄酮、柚皮苷、橙皮苷和野漆树苷有影响,为柚果合理利用提供参考价值.

氧载体对茯苓菌液态深层发酵的影响

目的:探讨氧载体对茯苓菌液态深层发酵的调控效应。方法:采用单因素试验设计分别考察氧载体种类、浓度和添加时间对茯苓菌液态深层发酵的影响,进而确定氧载体添加策略,并分析氧载体对茯苓菌在10 L生物反应器中的代谢调控过程。结果:氧载体最佳添加方案为接种48 h后添加1.0%(V/V)吐温-80,此时10 L反应器中茯苓菌细胞干重可达13.43 g/L,胞外多糖和茯苓酸产量分别为8.58 g/L、989.52μg/L,明显高于未添加氧载体发酵体系。结论:吐温-80可显著提高液态深层发酵体系中茯苓菌细胞生长、胞外多糖合成及茯苓酸积累水平,为解决高等真菌液态发酵过程中因溶氧限制引起的菌体生长和产物抑制问题提供了参考。

大黄黄芪药对对慢性肾衰竭大鼠的肾保护作用与胃肠激素水平变化的相关性研究

目的:为了探讨胃肠激素与慢性肾衰竭大鼠肾功能损伤的相关性及大黄黄芪药对对慢性肾衰竭肾功能损伤可能的保护机制。方法:本研究采用5/6肾切除法复制慢性肾衰大鼠模型,按大鼠24 h尿蛋白(UPr)水平分为假手术组、模型组、贝那普利组、大黄组、黄芪组、大黄:黄芪1:1组、大黄:黄芪1:2组、大黄:黄芪1:4组和大黄:黄芪1:6组,5周后,检测24 h UPr、血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)的水平,及血清与胃窦中胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)、血管活性常肽(VIP)和生长抑素(SS)的含量。结果:与假手术组比较,模型组大鼠体重下降(P<0.01)、肾脏系数上升(P<0.01)、24 h Upr、Scr、Bun、GAS、VIP水平上升(P<0.01),MTL、SS水平降低(P<0.01);与模型组比较,除大黄组外,各给药组体重显著提高(P<0.01,P<0.05),大黄组、大黄:黄芪1:4组肾脏系数下降(P<0.01,P<0.05),24 h UPr、Scr、BUN水平下降(P<0.01,P<0.05),以大黄:黄芪1:2组最为显著,各治疗组胃肠激素水平得到适当的调整。结论:大黄黄芪可以使CRF大鼠体重恢复,抑制残肾的代偿性肥大,下调代谢毒素的水平,同时可以有助于胃肠动力的恢复,具有调节体内胃肠激素分泌的作用。推断其改善肾功能可能是通过调节胃肠激素水平,改善胃动力,恢复胃肠道运动,增加体内对代谢毒素的排除的方式来实现的。且配比给药疗效优于单味药,大黄:黄芪1:2组下调代谢毒素水平最为明显,疗效最优。

大黄与黄芪对慢性肾衰大鼠的肾保护作用及肠道屏障功能的影响

目的:研究大黄与黄芪对慢性肾衰(CRF)大鼠的肾保护作用及肠道屏障功能的影响,从中医"肠-肾轴"角度分析其药理学作用机制。方法:采用5/6肾切除法复制CRF大鼠模型。将大鼠随机分为假手术组(记为J组,n=6),模型组(记为M组,n=8)和给药组(n=9),即贝那普利组(记为Y组,阳性对照,2 mg/kg),大黄高、中、低剂量组(分别记为DH、DM、DL组,以生药量计分别为3、1.5、0.75 g/kg)和黄芪高、中、低剂量组(分别记为HH、HM、HL组,以生药量计分别为6、3、1.5 g/kg)。各给药组大鼠在成模1周后开始ig给药,每天1次,连续5周;J组和M组大鼠ig等体积蒸馏水。末次给药12 h后,检测大鼠24 h尿蛋白量和血清中肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)以及血浆中内毒素水平,计算大鼠肾指数,显微镜下观察大鼠肾组织及小肠黏膜组织肠道绒毛的变化和隐窝深度。结果:与J组比较,M组大鼠24 h尿量、24 h饮水量增加,24 h尿蛋白,血清SCr、BUN、UA,血浆内毒素水平和肾指数升高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);多数肾小球体积增大、硬化,间质有大量炎症细胞浸润;小肠黏膜组织的绒毛长度、绒毛宽度、黏膜厚度及绒毛长度/隐窝深度比均减小(P<0.05或P<0.01),隐窝深度增加(P<0.01)。与M组比较,DM、DL、HM、HL组大鼠24 h尿量减少,HM组大鼠24 h饮水量减少,各给药组大鼠的24 h尿蛋白,血清SCr、BUN水平及肾指数均降低,除HH组外的其余各给药组大鼠的血清UA水平均降低,除HH、HM、HL组外的其余各给药组大鼠的血浆内毒素水平均降低,以上差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);各给药组大鼠肾组织与肠道绒毛的病理形态均得到不同程度的改善。结论:大黄与黄芪均能有效地降低大鼠代谢毒素水平、提高肾小球滤过功能、增强代谢物的排出;其可能是通过恢复CRF大鼠肠道的功能而达到治疗CRF的目的,且均以中剂量疗效最优。

不同配比大黄黄芪对CRF大鼠TGF-β1/HGF因子表达的干预研究

目的:研究不同配比后的大黄黄芪对慢性肾衰竭(CRF)大鼠的肾间质纤维化程度及相关因子表达水平的影响,分析可能的相关作用机制。方法:采用5/6肾切除法复制慢性肾衰竭大鼠模型,模型大鼠按24h尿蛋白(UPr)水平分级后随机分为假手术组、模型组、贝那普利组(5×10^-3g/kg)、大黄组(1.5g/kg)、黄芪组(3g/kg)、大黄黄芪1:1(3g/kg)、1:2(4.5g/kg)、1:4(7.5g/kg)和1:6组(10.5g/kg),连续灌胃5周后,检查大鼠体质量、残余肾重及肾脏系数的大小,HE染色后观察肾组织形态学变化,检测各组大鼠24hUPr、血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、TGF-β1(转化生长因子β1)、TGF-β1mRNA、HGF(肝细胞生长因子)和C-Met(肝细胞生长因子受体)的水平。结果:①12周后模型制备成功,模型组大鼠体质量显著下降,肾脏系数、24hUpr、Scr、Bun水平显著升高;②给药5周后,各给药组大鼠体质量明显恢复,24hUPr、Scr、BUN和TGF-β1水平显著下降,肾脏组织损伤程度得到明显改善;大黄组和大黄黄芪1:2、1:4组肾重显著降低,且大黄:黄芪1:4组肾脏系数下降明显;各药物治疗组(除贝那普利组)C-Met的表达水平显著升高;大黄黄芪1:2、1:4与1:6组的TGF-β1mRNA表达显著降低;大黄黄芪1:2、1:6组大鼠的HGF蛋白量显著提高;综合以大黄:黄芪1:2组改善作用最为显著。结论:大黄黄芪不同配比后可以有效恢复慢性肾衰竭大鼠体质量,抑制残肾的代偿性肥大,下调代谢毒素的水平,同时可以调整TGF-β1/HGF的平衡,减轻肾纤维化程度。且配比给药疗效优于单味药,大黄:黄芪1:2组改善效果最为明显。

大黄黄芪不同配伍比例对慢性肾衰竭大鼠24hUPQ、Scr、BUN及肾脏形态学的影响

目的:探讨大黄黄芪不同配伍比例对慢性肾衰竭大鼠24h尿蛋白定量、血清肌酐和尿素氮以及肾脏形态学的影响。方法:SD大鼠采用5/6肾切除法建立慢性肾功能衰竭模型,随机分为正常组、假手术组、模型组、贝那普利组、大黄黄芪(1:1、1:4、1:6)组,连续灌胃给药40天,收集24h尿液量测定24h尿蛋白并测定血清肌酐和尿素氮浓度,光镜下观察肾组织并对病变进行分类评分。结果:1大鼠5/6肾切除后90d,慢性肾衰大鼠模型成功;2大黄黄芪(1:1)、大黄黄芪(1:4)和大黄黄芪(1:6)能明显减低慢性肾衰大鼠24h尿蛋白定量、血清肌酐和血清尿素氮水平,改善慢性肾衰大鼠的肾小管空泡变性和炎性坏死程。3相对于大黄黄芪(1:6)组,大黄黄芪(1:1)组降低大鼠血清Scr和BUN的作用具有统计学意义(P<0.05),肾脏病变改善效果最好。结论:大黄黄芪配伍能有效改善慢性肾衰大鼠蛋白尿的情况,增强肾小球的滤过功能,减轻肾脏病变程度,以大黄黄芪(1:1)组作用显著。

大黄-黄芪不同剂量配比对慢性肾功能衰竭大鼠肠粘膜和肠道菌群移位的影响

目的:探讨大黄-黄芪不同剂量配比对慢性肾衰竭大鼠肠粘膜和肠道菌群移位的影响。方法:选取已建立慢性肾衰模型的大鼠分为模型组、贝那普利(5 mg/kg)组、大黄(1.5 g/kg)组、大黄-黄芪1:1(3.0 g/kg)组、大黄-黄芪1:2(4.5 g/kg)组、大黄-黄芪1:4(7.5 g/kg)组、大黄-黄芪1:6(10.5 g/kg)组。用显色基质鲎试剂终点显色法、生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法、蛋白免疫印迹法和细菌平板计数法分别检测血浆内毒素、血清D-乳酸、回肠组织中occludin蛋白相对表达量及肠道菌群移位量。结果:(1)慢性肾衰模型组大鼠较假手术组大鼠内毒素、肠道细菌移位率显著升高,occludin蛋白相对表达量显著降低,D-乳酸水平显著升高;(2)与模型组比较,各给药组大鼠内毒素含量显著降低,大鼠脏器肠道菌群移位率除大黄-黄芪1:2组外,各给药组细菌移位率降低显著差异,occludin蛋白相对表达量显著升高,D-乳酸值有所降低;(3)与大黄组比较,大黄-黄芪不同剂量配比组中大黄-黄芪1:4组降低内毒素作用最为显著。结论:慢性肾衰会使大鼠肠粘膜发生损伤,肠通透性增加,血浆内毒素和肠道菌群发生移位;大黄-黄芪不同剂量配比可以改善慢性肾衰大鼠的肠粘膜损伤,降低肠粘膜通透性,使内毒素和肠道菌群移位得到抑制,其中以大黄-黄芪1:4组改善作用显著。

茜草醇提物对大鼠肝、肾及结肠的毒性

目的:观察茜草70%乙醇提取物长期给药对大鼠肝、肾及结肠毒性的影响,为临床合理用药提供一定的依据。方法:在SPF级实验条件下,将48只Wistar大鼠随机分为空白组和茜草高、中、低剂量(30,10,5 g·kg^(-1),分别相当于临床人拟定剂量的36,12,6倍)组,每组12只,雌雄各半。空白组给予等体积蒸馏水,连续灌胃给药60 d。给药期间,观察记录大鼠的一般情况(行为活动,精神状态,饮食量,毛色光泽,大小便颜色);停止给药后,观察动物的血液生化指标、脏器系数及病理组织学变化等。结果:与空白组比较,茜草各剂量组大鼠肝,肾及脾脏器指数明显增大(P<0.05);丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平显著升高(P<0.01);雄性大鼠β2-微球蛋白(β2-MG)和胱抑素C(Cys-C)明显升高(P<0.05,P<0.01),雌性大鼠仅茜草高剂量组β2-MG显著升高(P<0.01),胱抑素C(Cys-C)与空白组比较无统计学差异。茜草各剂量组尿素氮(BUN)与空白组比较无统计学差异,茜草各组肝、肾组织形态与空白组比较没有明显的病理改变。茜草各剂量组雌雄大鼠的结肠组织形态、结肠黑色素染色和结肠上皮细胞凋亡率与空白组比较均无明显变化。结论:茜草70%乙醇提取物长期给药剂量≥5 g·kg^(-1),具有轻微的肝、肾毒性;对结肠无毒性作用,不能导致大鼠结肠黑变病的发生。

pH值对壳寡糖-柠檬酸盐-果胶自组装的影响

通过研究不同pH值条件下壳寡糖-柠檬酸盐-果胶复合溶液的浊度、宏观/微观状态,结合复合物红外光谱及扫描电镜超微结构分析,探讨了pH值对壳寡糖-柠檬酸盐-果胶自组装行为的影响。结果表明:pH值会影响壳寡糖、柠檬酸盐与果胶分子之间的静电与氢键作用,且随着pH值的提高,复合溶液浊度呈先上升后下降的趋势,当pH值为5时浊度高达89.72%,链状复合物相互交错叠加、出现沉淀物;当pH3或pH6时,复合溶液可保持均匀、稳定状态。该结果可为壳寡糖在果汁及其他含聚阴离子食品体系的运用提供参考。