COPD大鼠气道黏液分泌调控机制及“从肠论治”干预作用

目的:探讨"从肠论治"抑制慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠气道黏液高分泌的调控机制,从黏液高分泌角度探讨COPD"从肠论治"的效应机制。方法:采用气管注射脂多糖加熏香烟联合造模方法建立COPD大鼠模型,随机分为正常组、模型组、治肺组、治肠组及肺肠同治组。正常组、模型组灌胃生理盐水,各给药组灌胃相应中药,连续14d。RT-PCR法检测支气管组织表皮生长因子受体(EGF-R)mRNA及白介素-13(IL-13)mRNA表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠气道EGF-R mRNA、IL-13 mRNA表达增加(P<0.01);与模型组比较,治肠组EGF-R mRNA、IL-13 mRNA表达减少(P<0.05);与治肺组比较,肺肠同治组EGF-R mRNA、IL-13 mRNA表达减少(P<0.01)。结论:通利大肠或在治肺的基础上增加通利大肠,均能降低EGF-R mRNA、IL-13 mRNA表达,从而抑制气道黏液高分泌信号传导通路,这可能是COPD"从肠论治"效应产生的作用环节之一。

“通利大肠”对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠SIgA含量的影响

目的:观察"通利大肠"对COPD模型大鼠分泌型免疫球蛋白A(SIgA)的影响,从黏膜免疫角度探讨COPD"从肠论治"的效应机制。方法:采用气管注脂多糖加熏香烟联合造模方法建立COPD大鼠模型,随机分为正常组、模型组、治肺组、治肠组及肺肠同治组。正常组、模型组灌胃生理盐水,各给药组灌胃相应中药,连续14天。放射免疫法检测肺泡灌洗液、肠黏膜组织SIgA含量。结果:与正常组比较,模型组大鼠肺泡灌洗液、肠黏膜组织SIgA含量减少(P<0.05)。与模型组比较,治肠组肺泡灌洗液、肠黏膜组织SIgA含量增加(P<0.05)。与治肺组比较,肺肠同治组肺泡灌洗液、肠黏膜组织SIgA含量有所增加(P<0.01)。结论:通利大肠,或在治肺的基础上增加通利大肠,能提高COPD模型大鼠肺泡灌洗液和肠黏膜中SIgA含量,改善COPD大鼠呼吸道和肠道黏膜防御功能,这可能是COPD"从肠论治"效应产生的作用环节之一。

痰热清注射液对ANIT诱导大鼠急性肝损伤的防护作用

目的探讨痰热清注射液对ANIT诱导大鼠急性肝损伤的影响。方法采用α-异硫氰酸萘酯(ANIT)灌胃诱导大鼠急性肝损伤,检测大鼠血清ALT、AST、TBA、TBIL、DBIL和IBIL水平,HE染色观察肝组织病理变化。结果痰热清注射液各剂量组均可明显降低ALT、AST、TBIL、DBIL和IBIL水平;痰热清注射液中、低剂量组均可明显降低TBA水平;痰热清注射液各剂量组能明显改善肝细胞组织坏死损伤。结论痰热清注射液对ANIT诱导的大鼠急性肝损伤具有保护作用。

清开灵有效组分对大鼠缺血脑组织星形胶质细胞活化的影响

目的 :探讨清开灵有效组分对大鼠缺血脑组织星形胶质细胞活化的影响。方法 :参照Longa法复制大鼠脑缺血模型 ,清开灵有效组分干预 ,免疫组化分析缺血脑组织胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)、酸性钙结合蛋白 (S 1 0 0 β)表达的组间与时效特征。结果 :脑缺血后GFAP、S 1 0 0 β表达增强。用药可增强缺血 1 2hGFAP、S 1 0 0 β的表达 ,促进星形胶质细胞的激活 ,对受损神经元发挥保护作用 ;至缺血 2 4h ,除珍珠母水解液组外 ,其余用药组促进GFAP、S 1 0 0 β表达的作用减弱。结论 :清开灵有效组分促进星形胶质细胞活化的作用具有明显时效性和相对特异性 ,黄芩苷、栀子苷的作用在于促进星形胶质细胞的反应性增生 ,而胆酸、珍珠母水解液则表现为对星形胶质细胞功能活化的促进作用。

宣白承气汤“承顺胃气”以“宣肺”的生物学机制

承气汤出自仲景《伤寒论》,是治疗阳明腑实证的主方。吴鞠通化裁承气汤,创制了"肺肠同治"的代表方剂宣白承气汤,被广泛用于治疗痰热壅肺、腑气不通等肺系疾病。作者的研究团队开展了多中心随机对照的临床研究,为宣白承气汤治疗慢性阻塞性肺疾病痰热壅肺证提供循证医学证据。在此基础上,系统探讨了宣白承气汤"承顺胃气"以"宣肺"的生物学机制。历经多年的RCT研究证实了宣白承气汤可有效治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重痰热壅肺证,创新了COPD中医新治法,提高了临床疗效。宣白承气汤"承顺胃气"以"宣肺"的生物学机制与调节肺组织氧化/抗氧化失衡、黏液高分泌、黏膜免疫、气道重构、炎症反应、神经肽分泌等密切相关。尤其是对神经肽通路的研究,为揭示宣白承气汤"承顺胃气"以"宣肺"的机制及本方临床应用治疗肺系疾病提供了实验依据。

黄芩苷的体外抗氧化研究

目的研究黄芩苷体外抗氧化作用。方法取不同浓度的黄芩苷溶液,采用DPPH法测定黄芩苷自由基清除能力,用试剂盒测定黄芩苷抗超氧阴离子和总抗氧化能力,通过检测尿酸生成来测定黄芩苷对黄嘌呤氧化酶活性的影响等。结果黄芩苷具有显著的总抗氧化能力,且呈明显的量效关系;黄芩苷对自由基和超氧阴离子有较好的清除能力;另外,黄芩苷对黄嘌呤氧化酶(XOD)有抑制作用,黄嘌呤氧化酶催化黄嘌呤氧化生成尿酸的含量随黄芩苷浓度升高而降低。结论黄芩苷可以直接清除自由基、超氧阴离子等氧自由基,抑制黄嘌呤氧化酶活性,是良好的抗氧化剂。

三种神经功能评分在鼠类局灶性脑缺血模型评价中的比较

目的:比较Garcia JH、Clark和Bederson3种神经功能评分对鼠类局灶性脑缺血模型的评价意义。方法:采用线栓法阻塞大鼠和小鼠大脑中动脉,造成局灶脑缺血模型,并采用脑缺血治疗药物清开灵注射液进行干预。24h后,分别采用3种神经功能评分方法进行评价,测定脑梗死体积比例;分析神经功能评分与脑梗死体积比例的相关性及不同评分间的相关性,并进行比较。结果:大脑中动脉阻塞模型(MCAO)术后,动物均出现了脑梗死病灶及神经功能的损伤,清开灵注射液治疗可显著减小脑梗死体积并改善神经功能。采用相关性分析发现,大鼠实验中GarciaJH评分和Bederson评分与梗死体积显著相关,且两种神经评分之间显著相关;小鼠实验Clark局灶性功能损伤评分与梗死体积显著相关,Bederson评分和Clark一般功能损伤评分未显示与脑梗死体积相关,但局灶性功能损伤评分与一般功能损伤评分和Bederson评分均显著相关。结论:同Bederson评分相比,Garcia JH评分和Clark局灶性功能损伤评分与脑梗死体积具有更好的相关性,更适合作为脑缺血治疗药物疗效评价的指标。

健脾益肺化痰方通过抑制TNF-α信号通路改善COPD大鼠气道黏液高分泌的实验研究

[目的]探讨健脾益肺化痰方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道黏液高分泌的改善机制。[方法]采用烟熏法建立COPD大鼠模型,随机分为正常组、模型组、健脾益肺方组、化痰方组、健脾益肺化痰方组及羧甲司坦组。正常组、模型组灌胃生理盐水,各给药组灌胃相应药物,连续28 d。酶联免疫吸附(ELISA)法检测肺泡灌洗液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,蛋白质印迹(Western Blot)法检测肺组织表皮生长因子受体(EGFR)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和丝氨酸苏氨酸激酶(AKT)磷酸化水平。[结果]与正常组比较,模型组大鼠TNF-α含量升高,EGFR、PI3K和AKT磷酸化增强(P<0.01);与模型组比较,各给药组TNF-α含量显著下降(P<0.01或P<0.05),EGFR、PI3K和AKT磷酸化显著下降(P<0.01)或有下降趋势。[结论]健脾益肺化痰方改善COPD大鼠气道黏液高分泌,与抑制TNF-α等信号分子有关,且"标本兼治"的作用优于单一"治本"、"治标"。

基于黏液分泌特性差异的“肺”与“大肠”津液相求的内涵探讨

"肺与大肠相表里"是中医的重要基础理论,肺主行水,大肠主津,肺与大肠在"津液"代谢方面密切相关。"肺"与"大肠"表里机制的实质研究中,黏液在肺病和肠道疾病中所发挥的作用越来越受到重视,尤其是对肺及肠道不同部位(空肠、回肠、结肠)黏液分泌特性的差异研究逐渐深入,而这恰好与中医"肺"与"大肠"表里之"津液相求"不谋而合。通过比较肺与肠道在杯状细胞、黏蛋白、水通道蛋白和黏液屏障方面的差异,从"津液相求"角度,更好地诠释"肺"与"大肠"的关系。

“从肠论治”对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺组织病理学影响

目的:建立慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型,观察"从肠论治"对COPD模型大鼠肺组织病理结构变化,寻找中医"从肠论治"肺病理论的形态学证据。方法:采用气管注脂多糖加熏香烟联合造模方法建立COPD大鼠模型,随机分为正常组、模型组、治肺组、治肠组及肺肠同治组。正常组、模型组灌胃生理盐水,各给药组灌胃相应中药,连续14天。采用常规光镜、电镜方法比较各组肺组织病理学变化。结果:与正常组相比,模型组具备COPD的病理特征。与模型组比较,治肠组肺组织病变有所减轻。与治肺组比较,肺肠同治组的病变减轻最明显。结论:通利大肠,或在治肺的基础上增加通利大肠,均能减轻COPD肺组织损伤,"从肠论治"COPD存在形态学证据。

健脾益肺化痰方通过抑制IL-13信号通路改善COPD大鼠气道黏液高分泌

目的:探讨健脾益肺化痰方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道黏液高分泌的改善机制。方法:采用烟熏法建立COPD大鼠模型,随机分为正常组、模型组、健脾益肺方组、化痰方组、健脾益肺化痰方组及羧甲司坦组。正常组、模型组灌胃生理盐水,各给药组灌胃相应药物,连续28 d。ELISA法检测肺泡灌洗液IL-13含量,WB法检测肺组织STAT6磷酸化水平,实时定量PCR法检测MUC5AC mRNA。结果:与正常组比较,模型组大鼠IL-13、p STAT6、MUC5AC表达增加(P<0.01);与模型组比较,各给药组IL-13、pSTAT6、MUC5AC表达下降(P<0.01)。结论:健脾益肺化痰方可通过抑制"IL13-pSTAT6-MUC5AC"信号通路改善COPD大鼠气道黏液高分泌,且"治本"作用优于"治标"。

半夏泻心汤不同性味拆方对胃溃疡大鼠血清胃泌素的影响

为研究半夏泻心汤的配伍规律 ,按不同性味将该方拆成辛甘药 (半夏、干姜 ,X)组 ,苦味药 (黄芩、黄连 ,K)组 ,甘味药 (人参、炙甘草、大枣 ,G)组 ,并进行交叉组合成XK、XG、KG组 ,及全方 (Q)组。Wistar大鼠按改良Okabe法制作慢性胃溃疡模型并分组后 ,分别给予相当于成人用量 10倍的上述各组药物 ,连续用药 3周后 ,比较各组大鼠血清胃泌素的水平。结果 :X、K、G、KG组药物对胃泌素无明显影响 ;XK、XG组药物对胃泌素有明显影响 ,其中XG组的作用与Q组相近。提示 :不同辛味药物之间的配伍 。

半夏泻心汤及其拆方对慢性胃溃疡大鼠表皮生长因子的影响

目的 :对半夏泻心汤进行拆方研究 ,观察其对大鼠慢性胃溃疡模型的治疗作用。方法 :制备大鼠慢性胃溃疡模型 ,检测其表皮生长因子 (EGF)等指标的变化。结果 :半夏泻心汤及其拆方各组均有不同程度的调节胃液中表皮生长因子含量作用。拆方各组中 ,部分药组之间呈协同作用趋势 ,部分药组之间呈制约趋势 ,其中以甘补组 (人参、炙甘草、大枣 )的效果最为显著。结论 :扶正药物在半夏泻心汤中的抗溃疡作用不容忽视。

半夏泻心汤及其拆方对慢性胃溃疡大鼠溃疡灶形态变化的影响

目的 :对半夏泻心汤进行拆方研究 ,观察其对慢性胃溃疡 (CGU)大鼠模型的治疗作用 ,以便进一步指导临床实践。方法 :制备大鼠慢性胃溃疡模型 ,检测溃疡灶肉芽组织及溃疡灶表面黏膜厚度等指标的变化。结果 :半夏泻心汤及其拆方各组对慢性胃溃疡大鼠模型溃疡灶肉芽组织及溃疡灶表面黏膜生长均有不同程度的影响。拆方各组中 ,部分药组之间呈协同的作用趋势 ,部分药组之间呈制约趋势。结论 :半夏泻心汤能够促进溃疡灶肉芽组织的良好生长 ,促进溃疡灶表面黏膜的生长覆盖 ,从而达到促进溃疡愈合、降低愈合后溃疡复发的治疗作用。拆方分析显示 ,本方甘补组药物在促进溃疡愈合、降低愈合后溃疡复发方面发挥着主要作用 ,而全方组则表现出最佳效果 ,不仅印证了张仲景组方用药的合理性和科学性 ,也为进一步认识中医“辛开苦降甘补法”的作用机制提供了一定的实验依据。同时 ,对于指导临床治疗消化性溃疡中医用药以及新药开发等 ,都具有一定的参考价值。

半夏泻心汤及其拆方对胃电节律失常大鼠胃电慢波频率变异系数的影响

目的观察半夏泻心汤拆方对胃电节律失常大鼠的影响,探讨该方“消痞散结”的作用机制及其组方配伍规律。方法制备胃电节律失常大鼠模型,检测半夏泻心汤及其拆方对胃电慢波频率变异系数等指标的影响。结果半夏泻心汤及其拆方各组所测胃电慢波频率变异系数减少,与模型组比较,均存在显著差异(P＜0．05)。其中以辛苦组(半夏、干姜、黄芩、黄连)的效果最为显著。结论半夏泻心汤及其拆方各组药物均具有不同程度的纠正胃电节律失常作用,其中辛苦组的作用最强,为进一步认识本方苦降辛开,调畅气机的作用机制,提供了实验依据。

健脾益肺化痰方对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺组织病理的影响

目的:探讨健脾益肺化痰方对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)模型大鼠肺组织病理的影响。方法:60只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组、健脾益肺方组、化痰方组、健脾益肺化痰方组和羧甲司坦组,每组10只。除正常组外,其他各组采用单纯香烟烟熏法建立COPD大鼠模型。健脾益肺方组、化痰方组、健脾益肺化痰方组和羧甲司坦组大鼠分别给予相应的药物灌胃治疗,模型组和正常组给予等体积的纯净水。末次给药后,禁食12 h后取左肺中叶肺组织,采用常规光镜、透射电镜及AB-PAS特染法,观察比较各组大鼠肺组织病理变化。结果:与正常组相比,模型组具备COPD的病理特征。与模型组比较,健脾益肺方组、化痰方组、健脾益肺化痰方组的肺组织病理损伤明显减轻。其中,健脾益肺化痰方组大鼠肺组织病理改善最明显。结论:健脾益肺化痰系列方有效改善COPD大鼠肺组织病理损伤,可能是通过"化痰"作用,抑制了杯状细胞化生及黏液高分泌,进而减轻炎症损伤等。其中,健脾益肺化痰方改善肺组织病理损伤最明显,这可能与其标本兼治"痰"的作用有关。

COPD大鼠AQPs mRNA表达及“从肠论治”干预作用

目的:观察"从肠论治"对COPD模型大鼠AQPs mRNA表达的影响,从津液敷布角度探讨COPD"从肠论治"的效应机制。方法:采用气管注脂多糖加熏香烟联合造模方法建立COPD大鼠模型,随机分为正常组、模型组、治肺组、治肠组及肺肠同治组。正常组、模型组灌胃生理盐水,各给药组灌胃相应中药,连续14天。定时荧光定量PCR法检测肺组织AQP1、AQP3、AQP5mRNA表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠气道AQP1、AQP3、AQP5mRNA表达减少(P<0.01)。与模型组比较,治肠组AQP1、AQP3、AQP5mRNA表达增强(P<0.05)。与治肺组比较,肺肠同治组AQP1、AQP3、AQP5mRNA表达增强(P<0.01)。结论:通利大肠,或在治肺的基础上增加通利大肠,可增强AQPs mRNA的表达,改善肺脏津液敷布及宣肺功能,这可能是COPD"从肠论治"效应产生的作用环节之一。

桔梗对COPD大鼠不同组织肠三叶因子(TFF3)mRNA基因表达的影响

目的:探讨桔梗归肺经(肺靶向作用)的现代生物学机制。方法:观察桔梗对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠脑、肠、心、肝、肾、肺等组织中肠三叶因子(trefoil factor family3,TFF3)mRNA基因表达的影响。将实验大鼠分为假手术组、COPD模型组和桔梗组,分别取脑、肠、心、肝、肾、肺等组织,用RT-PCR技术测定不同组织中肠三叶因子(TFF3)mRNA表达。结果:①桔梗组与假手术组对照,脑、肠、肾、肺组织中TFF3mRNA基因表达虽有不同程度的升高,但无统计学意义;②桔梗组与模型组比较,脑、肠、心、肝、肾组织中TFF3mRNA基因表达有降低趋势,但无统计学意义;而肺组织TFF3mRNA基因表达显著上升,并具有统计学意义。结论:桔梗归肺经的作用机制,可能与其能够增加疾病状态下肺组织中TFF3mRNA基因表达有关。

仲景方中“石膏如鸡子大”的折算研究

采用文献考证结合实物测量的方法,对仲景方中实物类比计量药物"石膏如鸡子大"进行了折算研究。首先对鸡蛋的品种进行了考证,选用河南固始鸡蛋实测"鸡子大"的体积;其次对石膏的品种、产地进行考证,选用山东石膏实测其密度;最后用"鸡子大"的体积与石膏的密度乘积得出"鸡子大"的石膏的重量。并以大青龙汤为例对"石膏如鸡子大"的重量的合理性进行了讨论,方中"石膏如鸡子大"的重量应与麻黄六两接近,两者比例应为1:1,因此笔者认为"石膏如鸡子大"的重量厘定为90g为宜。

仲景方中枳实用药剂量古今折算研究

采用文献考证和实物测量的方法对仲景方中枳实进行了系统研究。从诸多本草文献的记载和相关附图的研究发现,仲景方所用枳实并非今之所用枳实,而是种属为芸香科植物枸橘的枳壳。随后对选用产自河南驻马店的枸橘枳壳作为仲景方枳实的实测药材进行了实物测量,得出枸橘枳壳一枚为12g。结合现代道地枳实、枳壳实测结果的对比,并运用所得实测结果对小承气汤全方剂量配伍比例的分析,认为仲景方中枳实为枸橘枳壳,其一枚的剂量为12g是合理的。该研究为今后建立仲景方的药物剂量和配伍比例标准提供研究基础。