人视网膜母细胞瘤肿瘤干细胞的分离培养

目的:体外分离培养人视网膜母细胞瘤肿瘤干细胞(RTSC),建立RTSC的鉴定方法。方法:新鲜Rb组织经酶消化法获取单个瘤细胞,接种于无血清化学限定培养基培养。对培养7-15d的神经样球体,分别进行克隆形成、增殖能力、分化能力等干细胞特性鉴定;采用RT-PCR及免疫荧光等方法对RTSC及其分化细胞的特性进行鉴定。结果:Rb肿瘤在无血清培养基中可以形成神经球体样肿瘤球体,后者可以多次传代,具有自我再续能力。RTSC来源的神经球体表达神经干细胞或视网膜早期发育的相关基因Nestin、CD133、Bmi-1、Pax6、RX及Chx10。在分化培养基上,肿瘤球体内细胞可以向神经元和胶质细胞分化,形成神经网络样结构,该分化细胞部分表达GFAP、MAP2、GAP43、PKC-a、Syntaxin及Recoverin等。RTSC分化后的神经样细胞为谷氨酸能神经元细胞。结论:本结果揭示Rb中存在具有自我增殖及分化能力的视网膜前体细胞样的肿瘤干细胞。此类细胞可能是Rb恶性增殖的根源,也将成为Rb治疗的新靶点。

人胚胎视网膜前体细胞的体外培养条件及分化特性

背景：视网膜干细胞已在多种脊椎动物眼内发现，但目前对人类视网膜干细胞或前体细胞的生物学特性尚知之甚少。目的：探讨人胚胎视网膜前体细胞的体外培养条件及分化潜能。设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2005-03／2006-02在中山大学中山眼科中心完成。材料：人胚胎神经视网膜来源于4例流产胎儿。方法：分离胚胎眼球神经视网膜，经胰酶消化法制备单细胞悬液，加入含表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子、左旋谷氨酰胺的无血清高糖DMEM／F12培养基进行原代及传代培养。收集培养第1～3代的细胞克隆球体，接种到右旋多聚赖氨酸及层粘连蛋白预包被的6孔细胞培养板内，培养7d后行免疫细胞化学染色。主要观察指标：倒置显微镜下观察视网膜前体细胞分化前后的形态变化，免疫细胞化学法鉴定分化细胞特性。结果：部分人胚胎神经视网膜细胞呈神经球体样悬浮生长，细胞球体边界清楚，折光性强，表达视网膜前体细胞标签巢蛋白；将其接种到分化条件下培养7d后，细胞体积增大，变扁平，呈梭形、多角形，伸出大小不等的细胞突起，大部分细胞表达视网膜神经元细胞分子标签βⅢtubulin和胶质细胞标签胶质纤维酸性蛋白，少量细胞表达光感受器标签视紫红质。结论：人胚胎视网膜前体细胞可在体外扩增培养，在胎牛血清联合右旋多聚赖氨酸、层粘连蛋白特定诱导条件下，可以向视网膜神经元、胶质细胞及光感受器细胞分化。

PCR扩增抗人视网膜母细胞瘤单克隆抗体轻链可变区基因

目的:获得抗人视网膜母细胞瘤单克隆抗体轻链可变区基因。方法:从分泌抗人视网膜母细胞瘤单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA,逆转录形成cDNA,用扩增小鼠K轻链可变区基因的引物,通过RT-PCR方法,扩增基因,1.5％琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果:用轻链引物扩增获得340bp的基因片段。结论:从三株杂交瘤细胞中均获得高纯度的总RNA;用RT-PCR方法从一株杂交瘤细胞成功克隆了抗人视网膜母细胞瘤单克隆抗体轻链可变区基因,为基因工程抗体研究奠定了良好基础。眼科学报2001;17:194～197。

抗视网膜母细胞瘤单克隆抗体轻链可变区基因克隆及序列分析

目的：获得抗人视网膜母细胞瘤（RB）单克隆抗体轻链可变区基因序列，为进一步构建抗RB基因工程抗体奠定基础。方法：用扩增小鼠κ轻链可变区基因的一对引物，从分泌抗人视网膜母细胞瘤单克隆抗体的杂交瘤细胞株3C6中提取细胞总RNA，经RT－PCR扩增出3C6VL的cDNA片段，并将其克隆人pGEM -T Easy测序载体，用双脱氧链终止法测定其核苷酸序列，并进行计算机分析。结果：抗人视网膜母细胞瘤单克隆抗体轻链可变区基因由321bp组成，编码了107氨基酸残基，含有4个框架区及3个抗原互补决定区，并含有抗体特性的两个半胱氨酸残基，在基因数据库（Gene Bank 2000,4)中，未发现相同的基因。结论：从分泌抗人视网膜母细胞瘤单克隆抗体杂交瘤细胞中成功克隆了抗人网膜母细胞瘤单克隆抗体轻链可变区基因，为抗RB基因工程抗体研究及新一代抗RB肿瘤导向药物的研究奠定了坚实的基础。

视网膜母细胞瘤SO-RB_(50)瘤细胞NOD-SCID鼠皮下异位移植全身转移瘤模型的建立

目的:建立人视网膜母细胞瘤(RB)的严重联合免疫缺陷(severe combined immunodeficent)小鼠(NOD-SCID鼠)皮下移植模型,并探讨RB转移的发生、分布规律.方法:NOD-SCID小鼠皮下接种人视网膜母细胞SO-RB50细胞,定期观察小鼠的行为及肿瘤的形成、生长、转移.采用HE,免疫组织化学染色方法,对皮下肿瘤原发灶及远处转移灶行病理组织学研究.结果:皮下接种小鼠肿瘤生长的潜伏期为12～19d,成瘤为100%,5只鼠有远处转移灶,发生转移的时间在32d后,时间分布不一,肿瘤转移灶主要分布在腹腔和肾旁,小鼠的异种移植瘤和转移灶组织形态上与人类的RB一致,光镜下细胞胞质少、核深染、可见病理性核分裂,为未分化型.结论:NOD-SCID小鼠的荷瘤人视网膜母细胞瘤模型,成瘤率高,成瘤潜伏期短,较高转移率的特点.

Bmi-1基因沉默对人视网膜母细胞瘤SO-RB_(50)细胞生长的体外抑制作用

【目的】探讨体外沉默Bmi-1基因对人视网膜母细胞瘤SO-RB50瘤细胞增殖和凋亡的影响。【方法】免疫组织化学和RT-PCR分别检测Bmi-1基因在人视网膜母细胞瘤瘤组织和SO-RB50瘤细胞中的表达。体外化学合成法合成的靶向Bmi-1基因的siRNA双链转染培养的人SO-RB50瘤细胞。荧光定量RT-PCR和western-blot分别检测转染Bmi-1 siRNA后的人SO-RB50瘤细胞中Bmi-1 mRNA和蛋白水平的变化。MTT法测定Bmi-1基因干扰后SO-RB50瘤细胞增殖情况。流式细胞仪检测Bmi-1 siRNA对人SO-RB50瘤细胞凋亡的影响。【结果】免疫组化和RT-PCR显示Bmi-1基因在人视网膜母细胞瘤瘤组织和SO-RB50瘤细胞中表达。人SO-RB50瘤细胞经Bmi-1沉默处理后,与阴性对照组相比,Bmi-1在mRNA和蛋白水平抑制率分别为(83.9±3.2)%和(82.8±1.1)%。MTT结果显示干扰组细胞在第3天增殖抑制作用最明显,抑制率达(52.5±1.9)%。干扰组人SO-RB50瘤细胞凋亡率为(20.7±1.1)%,阴性组细胞凋亡率为(1.9±0.2)%,两者有统计学差异。【结论】Bmi-1特异性siRNA能显著抑制人SO-RB50瘤细胞Bmi-1基因的表达,抑制细胞生长,可能通过促进瘤细胞凋亡而起作用,Bmi-1基因可能为RB治疗的新靶点。

胚胎干细胞裸鼠眼内诱导形成髓上皮瘤

目的 :观察小鼠胚胎干细胞在裸鼠眼内生长的形态变化。方法 :将胚胎干细胞在体外培养 ,并维持在未分化的状态 ,再移植到Balb/c裸小鼠眼内。 6 - 45d处死裸鼠 ,形态学和免疫组化观察其变化。结果 :胚胎干细胞移植到裸小鼠右眼后 ,在眼前房和玻璃体腔内生长。形态学检查在前房和玻璃体腔内见到各种形态的细胞 ,出现囊样、腺样、管样、菊花样等结构。免疫组化NSE染色多数细胞呈强阳性反应 ,部分细胞GFAP也呈中强度阳性反应。结论

HE和Giemsa染色在结膜刮片检测嗜酸粒细胞的染色比较

目的:通过HE和Giemsa对嗜酸粒细胞的染色效果比较,寻找最佳染色方法。方法:对春季结膜炎20例病人进行结膜刮片,并分别作HE和Giemsa染色,最后用光学普通显微镜观察。结果:在显微镜下,Giemsa染色的嗜酸粒细胞比HE染色的嗜酸粒细胞清晰。结论:实验表明,检测嗜酸粒细胞,采用Giemsa染色,可获得满意的染色效果。

小鼠骨髓树突状细胞的培养扩增及生物学特性分析

背景:树突状细胞是目前已知功能最强的专职性抗原递呈细胞,但树突状细胞在体内分布广泛且数量较少,获得大量的树突状细胞是研究树突状细胞特性和功能的前提。目的:建立小鼠骨髓源树突状细胞体外培养和扩增方法,观察其形态和相关特征。设计、时间及地点:树突状细胞形态学观察实验,于2006-08/2007-05在中山大学中山眼科中心实验室完成。材料:健康雌性C57BL/6小鼠。方法:在无菌条件下提取C57BL/6鼠骨髓细胞,分离单个核细胞,以小鼠重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素4协同诱导下培养,加用磷酸脂多糖刺激,分成磷酸酯多糖-树突状细胞和单纯树突状细胞组,前者在培养加入磷酸酯多糖,后者不加。主要观察指标:应用光镜和电镜下观察树突状细胞的形态,流色细胞仪检测鉴定其生物学特征。结果:体外培养2周后具有典型的树突状细胞形态,光镜下显示细胞表面不规则,呈树突状突起,电镜下可见培养的细胞具有典型树突状细胞的形态特征,流式细胞鉴定为髓系树突状细胞,高表达MHCII类分子及共刺激分子(MHCII,CD80,CD83,CD11c)。单纯树突状细胞组的细胞中度表达MHCⅡ类分子,低水平表达共刺激分子,刺激T细胞增殖的能力较弱;磷酸酯多糖-树突状细胞组细胞高水平表达MHCII类分子和共刺激分子。结论:实验所采用的树突状细胞体外原代培养的方法能在体外培养出大量的未成熟树突状细胞,具有典型树突状细胞的形态特征及较高的纯度。

胚胎干细胞向视网膜样结构分化的体内和体外研究

目的 研究鼠胚胎干细胞在裸鼠眼内发育分化成视网膜样细胞的体外生长特性。 方法 将体外培养的未分化胚胎干细胞移植到Balb/c裸鼠眼球内。第 14d处死动物 ,摘出眼球 ,在解剖显微镜下由眼球矢状面剖开眼球 ,一半制冰冻切片、HE染色。镜下见玻璃体腔中ES细胞已发育、分化成视网膜样结构后 ;从另一半眼球相应位置取这部分已开始向视网膜样结构分化的细胞进行培养 ,并做形态学观察和免疫组织化学鉴定。 结果从裸鼠眼球冰冻切片和HE染色观察定位后取出的已分化成视网膜样结构的细胞 ,在体外生长旺盛 ,呈梭形、星形 ,具有两个或多个突起。这些细胞聚积成排列整齐而规则的条带状 ,一侧伸出一些突起 ,类似视网膜的外颗粒层排列。免疫组织化学染色显示 ,这些细胞呈NSE强阳性反应。 结论 在裸鼠眼球内已分化成视网膜样结构的细胞经体外培养 。

白内障摘出术后角膜失代偿的病理形态学研究

目的探讨白内障摘出术后角膜失代偿的组织病理学改变。方法收集91例(91眼)白内障术后角膜失代偿行穿透性角膜移植的受体角膜标本,常规包埋切片,全部做HE染色,部分做PAS染色和胶性铁染色,光学显微镜观察。结果角膜上皮细胞水肿,细胞间隙增宽,上皮下大泡形成,表面不规则,部分病例角膜上皮内生。前弹力层肿胀,局部破坏消失。角膜基质层增厚水肿,基质纤维间隙增宽,部分病例有炎症细胞浸润,伴新生血管和纤维增生。后弹力层略增厚,板层样染色不均,部分形成双层后弹力层样外观。内皮细胞扩大、退变,稀疏甚至消失。部分病例角膜后膜形成。结论角膜内皮细胞大量减少、角膜上皮内生、角膜后膜形成是导致白内障术后角膜失代偿病理改变的原因。

人胚胎早中期肠壁黏膜层发育分化的研究

【目的】研究人胚胎早中期肠壁黏膜层及黏膜上皮杯状细胞的发育。【方法】采用形态学、组化及联合组化和免疫组化等方法对27例4～28周胚胎空肠、回肠及结肠肠壁黏膜层的发育进行观察。【结果】黏膜上皮PAS阳性的杯状细胞在10周时已经出现,爱茜蓝阳性的杯状细胞在12周出现;空肠、回肠的黏膜肌层在10周时已开始形成,起源于黏膜下层的肌肉干细胞,此后,随着胎龄的增加,杯状细胞的数目增加,黏膜肌层α-SMA阳性的细胞逐渐增多。【结论】肠黏膜上皮杯状细胞在10周时开始发育,可分为4类:①含中性黏多糖的杯状细胞;②含酸性黏多糖的杯状细胞;③既含中性黏多糖又含酸性黏多糖的杯状细胞;④既不含中性黏多糖也不含酸性黏多糖的杯状细胞。黏膜肌层起源于黏膜下层的肌肉干细胞。

锥兰联合茜素红活细胞染色法观察角膜中央碱烧伤内皮细胞愈合过程

目的:研究角膜碱烧伤内皮细胞的愈合过程。方法:锥兰联合茜素红内皮细胞染色法对角膜中央碱烧伤内皮细胞形态学变化进行观察。结果:伤后20分钟内皮细胞已破坏。72小时,损伤区的周边内皮细胞变形向创面内迁移。第7天后缺损区大部分范围均可见梭形细胞覆盖。结论:兔碱烧伤损伤区内皮细胞的修复由邻近内皮细胞变形,增殖和移行长入创面内完成,修复的内皮细胞具有纤维细胞特征。眼科学报1999;15:218-220。

乙酸纤维膜在印迹细胞法免疫检测干眼病的应用

目的:研究乙酸纤维膜(cellulose acetate membrane,CAM)在眼球结膜印迹细胞检查(Conjunctivalimpression cytology)联合免疫组织化学染色的应用价值。方法:对门诊诊断为干眼病的24例病人,采用乙酸纤维膜、印迹细胞法获取干眼病人球结膜上皮细胞,用抗体TGF-β_1进行免疫组织化学染色,光镜观察。结果:显微镜观察见乙酸纤维膜透明,TGF-β_1染色阳性的球结膜上皮细胞胞膜清晰,胞浆呈棕色,胞核呈兰色。结论:采用乙酸纤维膜印迹细胞检查,操作简单,不损伤结膜,联合免疫组化染色,显微镜下观察细胞清楚,可成为检查眼表疾病的一种简便有效的辅助手段。眼科学报2000;16:264～266。

GSK3抑制剂CHIR99021调控人诱导多能干细胞向运动神经元分化

目的探讨不同浓度糖原合酶激酶-3(GSK3)抑制剂CHIR99021对人诱导多能干细胞(i PSC)诱导分化为运动神经元的影响,分析其促进分化的最适浓度。方法在分化早期加入不同浓度CHIR99021培养i PSC 6 d,并依此将其分为对照组(0μmol/L)及1、2、3、4μmol/L组。分别在诱导分化早期、中期、晚期对各组细胞进行光镜观察和免疫荧光鉴定。结果在分化早、中、晚各期,细胞计数显示CHIR99021浓度越高细胞数量越多。早期,0~3μmol/L组神经干细胞标志物SOX1表达量无差异,4μmol/L组低于其余各组(P均<0.05);中期,0~3μmol/L组运动神经元前体标志物Olig2的表达量随CHIR99021浓度增加而增加(P<0.05),而4μmol/L组则稍低于3μmol/L组(P<0.05);晚期,2~4μmol/L组的细胞成功表达成熟运动神经元标志物胆碱乙酰转移酶(Ch AT),而0~1μmol/L组未表达。结论在神经分化的早期应用一定浓度的CHIR99021可以促进i PSC的细胞增殖,提高分化效率,并最终诱导其成为成熟运动神经元,其中3μmol/L为诱导最佳浓度。

利用CRISPR/Cas9技术对VSX 2绿色荧光报告基因人诱导多能干细胞系的构建

目的构建表达视觉系统同源框2(VSX 2)增强绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因的人诱导多能干细胞系(hiPSCs)。方法根据成簇规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白9(CRISPR/Cas9)技术原理,设计VSX 2的小向导RNA(sgRNA),构建敲除质粒及包含左右同源臂的P2A-eGFP供体质粒;2个质粒经测序鉴定后电转野生BC1-hiPSCs细胞系,采用嘌呤霉素筛选获得单克隆,扩增培养并鉴定。采用PCR和Sanger测序鉴定基因型;采用核型分析法分析报告细胞系核型;采用STR法排除细胞交叉污染;采用免疫荧光法及逆转录PCR法检测报告细胞系的多能干细胞分子标志物的表达;通过体外三胚层形成实验鉴定报告细胞系向三胚层分化的能力;应用3D视网膜类器官诱导技术获得视网膜类器官,并采用免疫荧光染色法评价VSX2蛋白与eGFP的共定位情况。结果电转后通过PCR鉴定和Sanger测序成功筛选到1株含有VSX 2-eGFP报告基因的hiPSC系。核型分析结果显示该报告细胞系核型正常。STR鉴定结果表明,BC1-VSX 2 eGFP-iPSCs无细胞系交叉污染。逆转录PCR检测和免疫荧光染色表明,BC1-VSX 2 eGFP-iPSCs中iPSCs标志物基因和蛋白表达阳性,包括NANOG、OCT4、SOX2、DNMT3B和GDF3 mRNA以及NANOG、OCT4、SSEA4和TRA-1-60蛋白。免疫荧光染色表明,由BC1-VSX 2 eGFP-iPSCs分化的三胚层组织中内胚层标志物甲胎蛋白(AFP)、中胚层标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和外胚层标志物神经细胞特异性微管蛋白(TUJ1)表达均为阳性;eGFP与VSX2共表达于视网膜类器官的神经视网膜。结论成功构建1株表达VSX 2-eGFP报告基因的hiPSCs,该细胞系可实时指示VSX2蛋白的时空表达变化,为视网膜发育、疾病机制研究及治疗方法评价提供有力工具。

不同体细胞来源人诱导多能干细胞向视网膜类器官分化能力的评价

目的评价不同体细胞来源的人诱导多能干细胞(hiPSCs)向3D视网膜类器官分化的能力。方法采用血液细胞重编程获得的hiPSCs系绿色荧光蛋白(GFP)标记的BC1细胞(BC1-GFP)及Gibco、尿液细胞重编程获得的hiPSCs系UE017进行视网膜诱导分化。光学显微镜下记录视网膜形态的发生和发展过程,采用免疫荧光染色法检测获得的视网膜中各种细胞亚类的特异性分子标志物表达情况,对不同细胞系分化视网膜的效率进行分析和比较。结果血液和尿液细胞来源的hiPSCs均可成功诱导分化为3D视网膜类器官,包括神经视网膜和视网膜色素上皮细胞。视网膜类器官能够模拟体内视网膜的发育过程,逐渐分化出所有神经视网膜亚类细胞,包括视网膜神经节细胞、光感受器细胞、无长突细胞、水平细胞、双极细胞和Müller细胞,甚至形成板层状结构。2种体细胞来源的hiPSCs在分化为视网膜类器官的效率上存在差异,血液来源的细胞比尿液来源的细胞分化为视网膜类器官的效率更高。结论血液和尿液体细胞来源的hiPSCs均可诱导出3D视网膜类器官,获得的视网膜类器官中包括所有视网膜细胞亚类,但2种体细胞来源的hiPSCs分化成视网膜类器官的效率不同。

CLCN2基因突变者尿液来源诱导多能干细胞的构建及定向分化神经细胞

目的建立和鉴定CLCN2基因突变患者尿液来源特异诱导多能干细胞(iPSC),并初步探讨其神经分化能力。方法收集临床上1例CLCN2基因突变患者尿液细胞,将表达重编程因子OCT4、SOX2、KLF4和SV40LT的附加型载体通过电转染导入尿液细胞,使其重编程为iPSC,并继续诱导其神经分化。通过Sanger测序、核型鉴定、免疫荧光、逆转录PCR、畸胎瘤实验及定向分化等评价干细胞和神经细胞特性。结果电转后部分尿液细胞发生形态改变,形成边界清楚的致密细胞克隆团;这些克隆状生长的细胞可以连续传代,具有正常核型,含有CLCN2基因无义突变,表达多能干性标记且无外源基因;裸鼠体内形成三胚层畸胎瘤;体外可定向诱导分化为神经干细胞和星形胶质细胞。结论CLCN2基因突变患者尿液细胞可重编程为iPSC,并可体外分化为神经细胞,可为CLCN2基因突变相关疾病的研究提供重要材料。

苯并卟啉衍生物单环酸A光动力杀伤人鼻咽癌细胞株的实验研究

目的：研究苯并卟啉衍生物单环酸A（BPD）光动力杀伤人鼻咽低分化鳞癌CNE2细胞株的作用机理。方法：在体外培养的CNE2细胞株中加入不同浓度的BPD后，用690nm单色光照射仪照射，照光能量分别为1.2J/cm2、2.4J/cm2、4.8J/cm23组。MTT法检测细胞活性。并收集细胞进行电镜检查。结果：在同一光照能量下，不同浓度BPD对CNE2细胞的杀伤作用随BPD剂量的增大而增强，照光能量分别为1.2J/cm2、2.4J/cm2、4.8J/cm23组，其IC50值分别为1958.6ng/ml、506.38ng/ml和343.0ng/ml。电镜检查：BPD晚光组光照15min，细胞体积已比单纯光照射组缩小，整个细胞密度增加，胞质内所有细胞器呈轻度收缩状态；2h，一些细胞胞质出现明显自溶；8h后能见到2种形式的细胞死亡：坏死和细胞凋亡；24h，主要以坏死细胞为主。结论：在同一光照能量下，对CNE2细胞的杀伤作用随BPD剂量的增大而增强，光动力作用引起的肿瘤细胞死亡存在两种时相及方式，在同一条件下出现两种不同的时相及死亡方式，可能与细胞处在不同生长阶段，代谢程度不一，吸收BPD的含量不同有关。

眼内硅油填充术后硅油相关并发症的组织病理及超微结构观察

目的观察眼内硅油填充术后硅油相关并发症的组织病理及超微结构改变,并探讨其发生机制。方法收集中山大学中山眼科中心病理室有眼内硅油填充术史的25例病理标本,其中包括眼球8例,眼内容物1例,视网膜前膜4例,角膜4例及晶状体8例,对其进行组织病理学观察及免疫组化分析,对其中获得的2例新鲜前膜组织行电镜下观察。结果眼内硅油填充术后硅油相关角膜病变以内皮细胞消失(90%)、带状角膜变性(83%)为主;而硅油相关白内障则以上皮细胞纤维化生为主。8例眼球及1例眼内容物组织见到典型硅油相关视网膜病变,即视网膜结构紊乱,增殖膜形成,其内较多大小不一的圆形硅油泡,神经元细胞数量减少。3例硅油存留时间>60个月的眼球,视网膜组织已完全被增殖膜替代,且硅油广泛浸润至角巩缘陈旧创口、小梁、虹膜睫状体、脉络膜、视神经及其鞘膜组织内,提示随着硅油在眼内存留时间的延长,硅油并发症更广泛、严重。2例视网膜前膜光镜下仅见少量硅油,但电镜下可见典型硅油浸润。免疫组化检查结果在硅油浸润部位,可见散在或灶性CD68阳性巨噬细胞;油泡周围的包裹膜部分胶质纤维酸性蛋白阳性、部分波形蛋白阳性,提示硅油可通过巨噬细胞向邻近组织浸润。结论眼内硅油填充术后硅油长期眼内存留可导致眼组织结构和(或)功能异常,应在视网?