甘蓝型油菜(Brassica napus L.)花药培养中若干因素对花粉胚状体诱导和植株再生的影响

研究表明,甘蓝型油菜(Brassica napus L.)花粉胚状体的诱导频率与培养材料的基因型、培养基蔗糖浓度、培养基附加成分、培养基状态、温度处理等因素有关。不同基因型材料的花粉胚状体诱导频率明显不同;培养基蔗糖浓度以10％为最佳;B_5培养基附加2,4-D 0.1mg/l和NAA0.1mg/l的培养效果最好;液体浅层静止漂浮培养优于固体培养;变温处理可以提高花粉胚状体诱导频率。本文也报道了五种不同的花粉胚状体类型与植株再生的研究。

甘蓝型油菜(Brassica napus L.)游离小孢子培养诱导胚状体再生植株

本文以甘蓝型冬油菜为料材,对游离小孢子培养诱导胚状体成苗进行了研究。结果表明游离小孢子培养25天就可见到多种类型的胚状体;振荡培养有利于胚状体的生长发育,子叶型胚频率较高;在相同培养条件下,游离小孢子胚状体成苗频率取决于胚状体的类型。本文还对花粉小孢子胚的发生、分化作了较详细的形态学观察。

温度对甘蓝型油菜花粉胚状体的诱导及其类型的影响

为了提高甘蓝型油菜(Brassica napus L.)花粉胚状体的诱导频率,进行了花药接种前的低温处理和接种后的高温处理,试验采用了五种不同温度的分段培养,对比了变温处理的效应。结果表明:不同基因型油菜花药培养,对变温处理的反应有差异;低、高温处理花药,对胚状体的类型有明显的影响;根据胚状体的形状和大小不同可分为五类,它们的再生植株能力不同。变温处理可以提高甘蓝型油菜花粉胚状体诱导频率和正常胚比率。

水稻游离单细胞培养再生植株研究

植物细胞工程的育种方法,首先是使植物单细胞化,在细胞水平上采用物理、化学和生物学的手段,诱发细胞产生突变,并利用植物细胞具有分化、再生植株的全能性,使突变了的细胞再生出植株,从而选择出具有优良农艺性状的突变体植株,进行繁殖、鉴定,培育出优质、高产、高抗性的新品种。国内外学者从甘蔗单细胞培养中产生了300个再生植株,发现了抗倒伏及含糖量高的株系。

变温处理对甘蓝型冬油菜花粉胚状体诱导的影响

据国外报道,油菜花药培养中,胚状体诱导频率除受供体植株的基因型及生理状态、花粉发育时期和培养基成分等因素的影响外,高温处理对提高甘蓝型冬油菜（Brassica napus L.）花粉胚状体诱导频率有显著的效果。据根我们在1987和1988年两年的研究结果,证实了变温处理能提高花粉胚状体诱导频率。材料与方法一、材料供试花药来自本所油菜室甘蓝型油菜育种材料87—20006,88—20023,88—21015,88—21040和88—21044。二、方法取主花序或分枝花序上的长2.5～3.0毫米花蕾,镜检花粉发育时期处于单核靠边或双核初期的花蕾为材料。 1.培养基和培养方法;

慈姑蛋白酶抑制剂基因转化小白菜获抗虫转基因植株

通过根癌农杆菌的介导将慈姑蛋白酶抑制剂基因（ＡＰＩ）导入小白菜（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｃａｍ ｐｅｓｔｒｉｓｓｓｐ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓＬ．）。Ｋａｎａｍ ｙｃｉｎ 筛选浓度为１０～１５ ｍ ｇ·Ｌ－ １，抑制农杆菌生长的抗生素选用Ｃａｒｂｅｎｉｃｉｌｌｉｎ，浓度为３００～５００ ｍ ｇ·Ｌ－ １。小白菜带柄子叶被农杆菌感染后，抗性芽的诱导频率为０．２％ ～２．０％ 。加入适量的ＡｇＮＯ３ 不仅可以抑制过度生长的农杆菌，还可以使抗性芽的诱导频率约提高到５％ 。试验获得转基因植株９７ 株。其中８１ 株ＰＣＲ 检测为阳性。部分转基因植株经ＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ 及ＲＴＰＣＲ 的进一步分子检测分析，证明ＡＰＩ基因已被整合进小白菜植株的基因组中。转基因小白菜的叶片离体饲虫初步试验结果表明：对鳞翅目害虫菜青虫的生长发育有一定的抑制作用，其幼虫摄食转基因植株叶片后，平均体重、体长均分别比对照（摄食非转基因植株叶片）减轻和短小，且约有２７．８％ 的幼虫不能正常羽化，而对照全部正常羽化。

莳菜四倍体的特征及田间耐热性

大于叶、大花瓣、深叶色、叶片长／宽值小、结实率低、种子千粒重高是四倍体莳菜的显著特征。四倍体莳菜的叶绿素含量，最低为二倍体的1．2倍，最高达2．0倍。其作直播菜栽培时，氨基酸总量比二倍体高9．35％，其中，12种氨基酸的平均值高于对照，4种低于对照，有5种氨基酸在所有被测的多倍体株系中均高于对照。夏季田间筛选结果表明，耐热株系约占被筛选的四倍体株系的25．0％，这些株系在夏季高温条件下长势明显优于对照。用它们作鸡毛菜栽培，平均产量相当于二倍体对照的107．5％；作直播菜栽培，单株平均鲜重相当于对照的146．0％；作移栽菜栽培为132．0％。而四倍体的绿叶数比对照少约16．1％。故植株巨型性是耐热四倍体增产的主要因素。不同的四倍体株系在性状上有一些差异，但株系内具有相对的遗传稳定性。

小白菜子叶诱导不定芽再生植株

以小白菜带柄子叶为外植体，通过四种细胞分裂素BA，KT，ZT，2iP的不同浓度及配比，诱导带柄子叶直接产生不定芽。结果表明，单独使用较高浓度的各种细胞分裂素都能诱导不定芽的形成。其中采用两种细胞分裂素降低浓度如BA2mg·L－1和KT1mg·L-1配合使用可以提高不定芽的频率达41．58％。另外增加适当浓度的AgNO34mg·L－1和ABA0．2mg·L-1能促进不定芽的发生达50％。试验发现在含有萘乙酸（NAA），吲哚乙酸（IAA），吲哚丁酸（IBA），生根粉（ABT），土菌消（HMI）这五种生根培养基中，吲哚了酸和土菌消对小白菜幼苗生根最为有利。本试验表明，小白菜离体培养再生植株是通过直接出芽的方式比通过愈伤组织再生芽的方式缩短了生长周期，而且明显提高了再生芽的频率。

应用组织培养诱导白菜和莴苣四倍体

以两个白菜（Brassicacampestris）品种和两个莴苣（Lactucasativa）品种作材料，报道了应用组织培养结合水仙素处理诱导四倍体的结果。研究表明，用含秋水仙素的固体培养基处理带3～4片真叶的再生苗，再从中诱导再生芽的方法效果较好。两个白菜（Brassicacampestris）供试品种莳菜、瓢儿菜和两个莴苣（Lactucasativa）供试品种广东玻璃生菜、山阳一号的最高加倍效率分别达13．33％，6．52％，15．00％和2．94％。各基因型对秋水仙素的敏感性不同，所要求的适宜处理浓度及时间也不同，莳菜以100mg／L处理10～14d为宜，广东玻璃生菜以50mg／L处理10d较好。处理后的再生苗，易同时诱导出二倍体和四倍体再生芽，但未发现倍性嵌合的植株。

抗虫基因及其在植物上的应用

苏云金芽孢杆菌δ－内毒素基因和蛋白酶抑制剂基因是目前在植物抗虫基因工程研究领域广泛应用的两类抗虫基因。本文参考了３０余篇文献，对它们的抗虫机理及应用现状作了评述。

异源三倍体水稻原生质体培养及植株再生

本试验利用二倍体栽培稻(Oryza sativa L.)品种8204,染色体组型为AA,2n=24作为母本,四倍体小粒野生稻(Oryza minuta)染色体组型为BBCC,2n=4x=48作父本杂交,获得异源三倍体杂交种,染色体组型为ABC.F_1根尖检查,染色体数目为2n=3X=36.用该异源三倍体杂交种的幼穗诱导愈伤组织,经长期继代培养进行原生质体游离,获得了再生植株白化苗.试验结果表明,用琼脂糖包埋法可促进原生质体再生愈伤组织.分化培养基用玉米素、激动素和6—卞基嘌呤三种细胞分裂素处理,6—卞基嘌呤表现出促进芽和根的分化的作用.基本培养基N_6比MS更为有效地促进植株再生而得到白化苗.本文旨在利用野生稻资源改良水稻栽培种的性状与培育新品种方法探索一条新的途径并为稻属种间细胞融合提供参考.

油菜灌浆成熟过程中物质代谢研究

本试验的目的是:通过分析甘兰型油菜灌浆过程中物质代谢的情况,探索其积累、变化的规律,为油菜在高产栽培中提高含油率及品质育种中培育低芥酸新品种提供参考。

大蒜(Allium sativum L.)球状体形态发生中的细胞组织学研究(英文)

大蒜叶片外植体在含有500mg／L水解酪蛋白、1000mg／L酵母提取物和2mg／L2，4－D的MS培养基上，产生可分离的球状体。球状体在含有2mg／LKT和0．5mg／LIAA的MS培养基上幼苗诱导率约91．7％。培养基中5％的蔗糖浓度可促进球状体的产生。本文对球状体作了形态解剖描述。球状体可在大蒜快速繁殖技术上加以应用。

十字花科植物基因技术研究进展及存在问题

本文从转化受体、转化方法、最高转化率、导入外源基因及转基因植株获得情况等方面介绍了十字花科植物基因工程研究进展，提出了存在的问题。

油菜原生质体培养研究进展

从原生质体的分离纯化、原生质体培养基成分、原生质体培养方法及原生质体应用前景等方面介绍了油菜原生质体培养近１０年的研究进展，并提出了存在的问题．

3种生长调节物质对生菜不定芽直接再生的影响

应用“３１１—Ｂ”回归最优设计研究ＡｇＮＯ３、ＡＢＡ、ＡＳＡ对生菜离体培养不定芽直接再生的影响。结果表明，ＡｇＮＯ３是良好的乙烯抑制剂，与ＡＢＡ配合使用可明显抑制愈伤产生，大大促进不定芽的直接再生；而ＡＳＡ未曾抑制愈伤产生，不是乙烯抑制剂。

单双低油菜原生质体培养高效成株体系的研究

以甘蓝型单低和双低油菜为材料，对原生质体培养及植株再生进行了研究。结果表明：低温预处理无菌苗可提高原生质体活力。不同下胚轴部位对原生质体的得率及分裂频率均有影响。用琼脂糖包埋法，在不含ＮＨ４ＮＯ３及ＫＮＯ３，而加有丝氨酸和谷氨酰胺的Ｋｍ８Ｐ培养基上培养原生质体获得了高频率再生愈伤组织。在Ｍ＋ＢＡ１ｍｇ／Ｌ分化培养基上两周后得到芽的分化，转至ＭＳ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋生根粉０．１ｍｇ／Ｌ的培养基上诱导生根，得到生长良好的完整植株。

ABT和土菌消在作物组织培养中对再生苗生根的影响

植物生长调节剂在培养壮苗、提高移栽成活率、延长保存时间等方面都取得了很好的应用效果。ABT增产灵和土菌消(化学名称为3—羟基—5—甲基异噁唑,简称HMI)是两种新型的植物生长调节剂,在适宜的浓度下对多种作物的生长有促进作用。如提高发芽率,加速幼苗生长。

水稻胚性及非胚性愈伤组织的鉴别

在植物组织培养中,再生植株有两条途径:一是胚胎发生型(胚状体);二是器官发生型。目前水稻胚胎发生型的研究和应用正引起人们的关注。与器官发生型相比,胚胎发生植株再生率高,遗传变异小,可作为细胞工程中快速繁殖的重要手段。另外,人工种子的生产和原生质体培养也必须通过这一途径。为研究胚胎发生的途径,势必对胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织进行早期识别。本试验采用解剖镜和扫描电镜观察、摄影等实验手段对这两类愈伤组织作了外部形态上的比较,同时用细胞学方法比较胚性细胞和非胚性细胞之间内部超微结构上的差异,并用生化测定的方法进行了蛋白电泳分析。为愈伤组织的形态发生提供了一些理论依据。

琼脂糖包埋法在油菜原生质体培养中的应用

70年代以来,芸苔属作物的原生质体培养进展很快,现已从油菜、甘蓝、芥菜、白菜及埃塞俄比亚芥获得再生植株,目前在油菜上的研究是选择生理状态良好的下胚轴作起始材料,配合适宜的培养基,促使原生质体早期分裂和快速生长,便可减轻或避免褐化,提高植板率和再生率。