水稻染色体DNA的交变脉冲电泳分析

从水稻完整的细胞核中释放出来的染色体DNA在交变脉冲电泳申表现为一种“240kb单位”的形式。这种单位,经限制性内切酶消化,可产生连续分布的大至1500kb的染色体DNA片段。文章讨论了“240kb单位”作为水稻染色体DNA基本结构单位的可能性。

水稻D_1 snoRNA及其基因的鉴定和功能分析

测定和比较了籼稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．ｓｐ．ｉｎｄｉｃａ）、粳稻（Ｏ．ｓａｔｉｖａＬ．ｓｐ．ｊａｐｏｎｉｃａ）和多年生野生稻（Ｏ．ｒｕｆｉｐｏｇｏｎＷ．Ｇｒｉｆｉｔｈ）ｈｓｐ７０基因第一个内含子中Ｄ１ＤＮＡ以及部分上游序列，并通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交及ｃＤＮＡ序列分析对Ｄ１ＤＮＡ编码的Ｄ１ｓｎｏＲＮＡ进行了实验鉴定。Ｄ１ｓｎｏＲＮＡ属于反义ｓｎｏＲＮＡ家族，它与水稻２５ＳｒＲＮＡ互补序列为１４个核苷酸长。根据理论计算，Ｄ１ｓｎｏＲＮＡ具有指导水稻２５ＳｒＲＮＡ中第８０７位的核糖甲基化功能。Ｄ１ＤＮＡ与Ｃ１ＤＮＡ相隔仅１０５个核苷酸，在内含子中如此短的距离内连续编码两种ｓｎｏＲＮＡ是罕见的，这一结构为研究串联结构的ｓｎｏＲＮＡ转录后加工机制提供了一个良好的研究体系。

SHBV的PCR检测方法的建立及其检测

以新分离的猴Ｂ病毒毒株为材料，建立了一种ＰＣＲ快速鉴定ＳＨＢＶ的方法，并通过对ＰＣＲ产物的限制性酶切分析可与ＨＳＶ－１相区分，并对这一新分离的Ｂ病毒毒株的克隆片段进行了序列分析．

植物核仁小分子RNA及其研究进展

自从６０年代末Ｗｅｉｎｂｅｒｇ等在哺乳动物中发现了第一个核仁小分子ＲＮＡ（ｓｍａｌｎｕｃｌｅｏｌａｒＲＮＡ，ｓｎｏＲＮＡ）Ｕ３以来，这一领域的研究特别是９０年代以来的进展引起了人们的广泛关注。这些富集于核仁区的代谢稳定的ｓｎｏＲＮＡ暗示了它们在核糖体...

水稻Hsp70基因第一个内含子中snoRNA基因簇的保守性及分布特点

对水稻、野生稻和茭白Ｈｓｐ７０基因第一个内含子进行ＰＣＲ分析及部分序列测定，分析结果表明植物Ｈｓｐ７０基因内含子编码多个ｓｎｏＲＮＡ的基因组织具有一定的保守性和分布范围，揭示了植物内含子编码的ｓｎｏＲＮＡ在进化过程中具有比脊椎动物和酵母更加丰富的多样性和移动性．

南方红豆杉种子萌发生物学研究

对南方红豆杉种子的萌发生物学特性进行研究 ,主要结果表明 :(1)种子在自然条件下有很深的休眠特性 ,但种皮透性不是休眠的原因 ;(2 )对新鲜种子进行“暖温 (2 5℃ )层积—低温 (5℃ )层积”,以“36周— 12周”的模式效果最好 ,能促进胚纵向生长和打破种子休眠 ,发芽率达 6 4 .0 %～82 .2 %

原小檗碱类多靶点抗老年性痴呆症药理作用

原小檗碱是一类异喹啉生物碱,具有相同的药效基团。本研究检测了以小檗碱和四氢黄藤素为代表的原小檗碱多靶点抗AD效应及分子作用机制。以人神经母细胞瘤SH-SY5Y为研究对象,利用Western blot检测药物对细胞全长APP和BACE1蛋白水平的影响;ELISA技术检测细胞外可溶性淀粉样前体蛋白α(sAPPα)的分泌;酶活性检测试剂盒检测乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性。结果显示,药物处理细胞24 h后,二者均能显著地抑制BACE1蛋白的表达,并可使sAPPα的分泌显著增加,但未见细胞APP蛋白含量明显变化,同时对该细胞的AchE的活性具有显著的抑制作用。以上结果证明:原小檗碱生物碱药理活性涉及预防和减少Aβ沉积和增强乙酰胆碱对脑胆碱受体的作用,并通过细胞自身的代谢增加具有神经营养作用的sAPPα的分泌。提示此类化合物具有多靶点抗老年痴呆的潜能,通过结构优化改造,将有望获得副作用小的新一代抗AD有效药物。

用PCR技术鉴定犬细小病毒弱毒疫苗株

通过分析比较犬细小病毒 (CPV)弱毒疫苗株和强毒株的基因序列 ,设计了 3条引物并组成 2对引物 ,对弱毒疫苗株和强毒株进行了半嵌套式 PCR扩增。第 1轮 PCR扩增的结果为 CPV弱毒疫苗株和强毒株有相同的目的片段(5 85 bp) ;第 2轮 PCR扩增的结果为 CPV强毒株有 375 bp目的片段 ,而 CPV弱毒疫苗株没有 375 bp目的片段。对PCR产物进行电泳和酶切分析 ,结果证明 PCR产物片段大小和酶切位点与设计的产物完全一致。特异性和敏感性测定结果表明 ,该方法是高度特异和敏感的 。

犬细小病毒的PCR诊断试剂盒的研制

目的 建立检测犬细小病毒的PCR诊断试剂盒。方法 通过在犬细小病毒 (CPV)的基因组中设计的特异性寡核苷酸引物 ,利用PCR技术研制犬细小病毒的PCR诊断试剂盒。结果 在特定的反应条件下 ,使用该试剂盒能特异地扩增含有犬细小病毒的样品 ,且能检出痕量 (10ng)的犬细小病毒DNA ,被测粪样只需进行简单煮沸就能进行PCR反应 ,该试剂盒能在常温下保存 1周以上、4℃保存 1年以上。同血凝试验 (HA〕及单克隆抗体ELISA方法比较 ,对 6 6份样品进行检测 ,显示该PCR试剂盒具有特异、灵敏等优点。结论 成功研制了犬细小病毒的PCR诊断试剂盒 。

共轭亚油酸单体诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡及其作用机制的研究

目的:研究2种共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)单体——顺9,反11-CLA(cis 9,trans11-CLA,c9,t11-CLA)和反10,顺12-CLA(trans10,cis12-CLA,t10,c12-CLA)诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡及其作用机制。方法:采用MTT法检测CLA对MCF-7细胞的生长抑制作用,锥虫蓝染色绘制CLA作用后MCF-7细胞的生长曲线;荧光显微镜观察及FCM检测MCF-7细胞的凋亡和细胞周期的改变;RT-PCR和Western印迹法检测MCF-7细胞PPARγ、Bcl-xL和Bcl-xS mRNA以及PPARγ、Bcl-2、Bax和caspase-3的蛋白表达。结果:2种CLA单体均可抑制MCF-7细胞增殖并诱导细胞凋亡,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);RT-PCR和Western印迹法检测结果显示,2种CLA单体均可以提高PPARγ、Bcl-xS mRNA和PPARγ、Bax、caspase-3蛋白的表达,降低Bcl-xL mRNA和Bcl-2蛋白的表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);且2种CLA单体对PPARγ与凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和caspase-3的表达影响呈剂量和时间依赖性及同步相关性。结论:c9,t11-CLA和t10,c12-CLA对乳腺癌MCF-7细胞具有抑制生长和促凋亡的作用,CLA可能作为PPARγ的配体通过激活PPARγ-Bcl-2-caspase-3细胞凋亡信号通路而实现抑制肿瘤细胞生长的作用。

用RNase保护法定量检测鲤鱼组织IGF-ImRNA的表达

建立了定量分析ｍＲＮＡ表达的ＲＮａｓｅ保护法，并用于鲤鱼ＩＧＦ－Ｉ的研究．结果表明鲤鱼ＩＧＦ－ＩｍＲＮＡ在肝组织的丰度为每微克ＤＮＡ含５０．４５×１０－１７ｍｏｌ，在其他组织有少量ＩＧＦ－ＩｍＲＮＡ表达．

共轭亚油酸单体诱导乳腺癌细胞SKBr3凋亡的PPARγ信号通路研究

cis9,trans11-CLA和trans10,cis12-CLA是共轭亚油酸(CLA)二种抑瘤活性最强的主要单体.在以前报道二者诱导乳腺癌细胞凋亡的工作基础上,进一步探讨共轭亚油酸单体诱导乳腺癌细胞SKBr3凋亡的途径及机制.采用RT-PCR和Westernblot等方法,证实了CLA在SKBr3细胞中可显著提高PPARγ的转录及蛋白质表达水平,并发现CLA对PPARγ与凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和caspase3的表达影响呈同步相关性,并表现出时间和剂量依赖性.通过PPARγ抑制剂GW9662实验表明它们之间存在协同关系.首次提出了PPARγ-Bcl-2-Caspase3信号通路的SKBr3细胞凋亡途径,为CLA有望作为PPARγ新型调节剂诱导肿瘤细胞凋亡在临床应用提供实验证据.

萝卜叶绿体类囊体膜蛋白质与雄性不育

采用双向电泳技术比较了萝卜7416A、64A 两个不育系及其保持系三个不同发育时期(幼苗期,肉质根膨大期和开花期)的叶绿体类囊体膜蛋白的差异。结果表明:(1)不育系与保持系在单向 SDS—PAGE 中,多肽带数目相同,仅个别条带染色深浅有别;而双向电脉中则可见有明显差异。(2)双向电泳图谱上,两个不育系与相应保持系在三个发育时期中,其2(?)～32kd 处均出现明显差异;(3)在幼苗期和肉质根膨大期的差异表现在分子量较大的28～67kd 之间的多肽,其 pI 太多在6～7之间;而在开花期则多在分子量较小的22～32kd 的多肽上表现差异,pI 在5～6之间。讨论了上述差异与雄性不育的关系。

C1 SnoRNA，水稻中一种新的核仁小分子RNA

通过计算机分析国际分子生物学数据库和ｃＤＮＡ序列分析等方法，在水稻（Ｏｒｙｚａｓａｔｉｖａ）中发现了一种新的核仁小分子ＲＮＡ：Ｃ１ＳｎｏＲＮＡ．该ＲＮＡ具有ｂｏｘＣ，ｂｏｘＤ和末端碱基配对区等典型的核仁小分子ＲＮＡ结构特征；并有１４个核苷酸与水稻１８ｓｒＲＮＡ中一段保守序列互补．推测Ｃ１ＳｎｏＲＮＡ可能在１８ｓｒＲＮＡ甲基化过程中起重要作用．编码Ｃ１ＳｎｏＲＮＡ的基因位于水稻Ｈｓｐ７０基因的第一个内含子中．这是在水稻中发现的第一个由基因内含子编码的ＳｎｏＲＮＡ．

半嵌套式PCR技术区别检测犬细小病毒疫苗株和强毒株的研究

犬细小病毒病是由犬细小病毒(Canineparvovirus,CPV)引起的一种多发于幼犬的致死性传染病,主要表现为出血性肠炎和心肌炎[1].在自然条件下本病多呈散发,而在养犬比较集中的地方则常群发[2].

mTOR信号通路及其与阿尔茨海默病的关系

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白mTOR是一个进化上十分保守的蛋白激酶,属于PIKK超家族。在细胞内mTOR存在两种功能不同的复合体mTORC1和mTORC2。mTOR主要通过接受上游信号分子Rheb、TSC1/TSC2的调控来整合细胞内外信号,其下游效应器是4E-BP和p70S6K,通过影响特定mRNA的翻译调节细胞的生长和增殖。在神经系统方面,神经元的发育、突触可塑性的调节、学习和记忆的形成都依赖于适当的mTOR通路的活化。新近的研究显示,神经退行性疾病阿尔茨海默病患者表现mTOR通路的异常,在双转基因鼠中,APP和PS1表达与mTOR/P70S6K下调关联,并影响精神状态评分。mTOR信号通路生理功能和调节机制的研究对了解AD的发病机理和寻找药物靶点具有重要意义。

PCR方法检测犬细小病毒生长动态及与其它方法的比较

将可疑犬细小病毒 ( CPV)粪样分别接种于 FK81、MDCK、BHK2 1、Vero细胞及鸡胚成纤维细胞中 ,用 PCR、HA、EL ISA三种方法检测在上面 5种细胞中 CPV的生长动态 ,结果表明 :PCR方法能在第 1、2、3代 FK81细胞中检出 CPV的生长 ,而 HA、EL ISA则只在第 3代 FK81细胞中才能检出 CPV的生长 ;PCR方法能在 MDCK、BHK2 1、Vero细胞及鸡胚成纤维细胞中检出 CPV的生长 ,而 HA、EL ISA则均不能。因此 ,PCR方法可作为培养细胞中检测病毒生长动态的一种灵敏、快速的方法。

水稻Hsp70基因的第一个内含子编码2种核仁小分子RNA

90年代以来,一系列由内含子编码的核仁小分子RNA(snoRNA)的发现,是分子生物学的一个重大进展。它不仅为阐明真核生物核糖体RNA复杂的加工体系和机制开辟了道路,而且对于全面地认识真核生物基因的结构和组织以及基因表达调控的新机制都具有重要的意义。

Z7 snoRNA:酿酒酵母中一种新的核仁小分子RNA

通过计算机分析国际分子生物学数据库和分子杂交等方法,在酿酒酵母(Saccharomvces cerevisiae)中发现了一种新的核仁小分子RNA:Z7 snoRNA。该snoRNA具有boxC和boxD等结构元素,并有14个核苷酸与18S rRNA中的一段保守序列互补,属于典型的以核酸序列指导大分子rRNA甲基化的snoRNA类型。Z7 snoRNA指导酿酒酵母18S rRNA中第578位的尿嘧啶核苷酸的核糖甲基化,Z7snoRNA长88个核苷酸,富集于核仁区,由位于酿酒酵母13号染色体上的一个独立基因编码。