青岛百合高效离体快速繁殖体系的建立

以青岛百合及麝香百合的鳞片和茎尖为试验材料,研究了外植体的放置方式、鳞片的不同部位、不同的激素浓度及活性炭对百合再分化的影响,成功建立了青岛百合的高频再生体系。结果表明两种百合的最佳外植体部位为中层鳞片的基部,放置方式为凸面接触培养基,青岛百合的最适再生培养基为MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L,麝香百合的最佳再生培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L,两种百合的最高再生率均达到100%。

薹菜再生体系的建立

为了建立薹菜再生体系进而为转基因工作做准备,以薹菜无菌苗子叶-子叶柄和下胚轴为外植体,研究了适于薹菜再生的外植体类型,以苗龄、AgNO3的质量浓度和植物生长调节剂组合,建立了薹菜的再生体系。结果表明,5 d苗龄的子叶-子叶柄为最佳外植体材料。筛选出最佳培养基为1/2NH4+浓度的MS+BAP5 mg/L+ZT 2 mg/L+NAA 0.7 mg/L+AgNO37.5 mg/L,子叶-子叶柄再生频率达67.8%。

农杆菌介导的薹菜遗传转化体系研究

以薹菜子叶-子叶柄为外植体,研究了根癌农杆菌介导的遗传转化技术。用含GUS和NPTⅡ基因的农杆菌侵染子叶-子叶柄,获得了具有卡那霉素抗性的再生植株。再生植株经GUS组织染色,证实外源基因转化到植物基因组中。卡那霉素敏感性测定结果表明,当培养基中含卡那霉素(Km)15 mg/L时,非转化再生植株全部白化。转基因抗性芽筛选的适宜的卡那霉素浓度为10 mg/L。

青岛百合包埋-玻璃化法超低温保存技术研究

以青岛百合茎尖为试材,研究了外植体的选择、预培养的蔗糖浓度、预培养时间、包埋预处理方法、PVS2处理时间对百合存活率的影响。结果表明:小鳞茎在4℃冷锻炼培养28d后,剥取2～3mm的茎尖为试验材料,在蔗糖浓度0.4mol/L的MS+100g/L海藻糖+1mg/LABA的培养基上,预培养3d,然后加0.4mol/L蔗糖和2mol/L甘油、3%褐藻酸钠进行包埋预处理,在0℃条件下用PVS2处理60min,投入液氮保存1h,38℃解冻2min、洗涤后转接至恢复培养基上暗培养7d,用TTC检测存活率最高可达到67.5%。