致犊牛脑炎E.coli S9922生物学特性及对不同环境消毒剂抵抗力的测定

致犊牛脑炎大肠杆菌S9922是从7日龄以内死亡犊牛大脑中分离出的一株肠外致病性大肠杆菌Extrain?testinal pathogenic Escherichia coli(ExPEC),引发犊牛的脑炎及腹泻。为研究E.coliS9922的生物学特性以及对外界消毒剂的抵抗作用,试验对E.coli S9922进行了生化鉴定、血清学鉴定、溶血性试验、药敏试验和LD50的测定,同时测定了E.coli S9922对环境消毒剂稀戊二醛溶液、二氯异氰尿酸钠粉剂、苯扎溴铵溶液和聚维酮碘溶液的抵抗力。结果表明,E.coli S9922 V-P试验为阴性,吲哚试验为阳性,能发酵甘露醇、木糖、葡萄糖、鼠李糖、麦芽糖,且均能产酸不产气;在牛大肠杆菌27种常见血清型中,并未检测到E.coli S9922的血清型;在5%的兔血和5%绵羊鲜血平板上未见溶血圈;E.coli S9922对氯霉素、四环素、庆大霉素、环丙沙星、氨苄青霉素、卡那霉素,左氧氟沙星、头孢噻肟、青霉素耐药,对多粘菌素b和大观霉素不耐药,且具有多重耐药特性;LD50计算结果为107.238mg/kg,表明E.coli S9922是一株强毒株;在高浓度的消毒剂作用下,均能杀灭该菌,而在低浓度消毒剂作用下,稀戊二醛溶液和苯扎溴铵溶液比聚维酮碘溶液和二氯异氰尿酸钠的消毒效果好。研究结果可为肠外致病性大肠杆菌的研究提供试验数据以及对畜舍内环境消毒提供理论指导。

牛源致脑炎大肠杆菌FimD、PilN蛋白的生物信息学分析和优势B细胞表位预测

为了筛选出牛源致脑炎大肠杆菌S9922 FimD、PilN蛋白的优势B细胞表位,本试验采用生物信息学分析工具ProtParam、TMHMM、NetPhos、DNASTAR软件、SOPMA、SWISS-MODEL、BepiPred、Immunomedicine Group等对FimD、PilN蛋白进行理化性质、跨膜区、信号肽、糖基化位点、磷酸化位点、二级结构、三级结构和B细胞表位预测,并进行综合分析,最终得出优势B细胞表位。结果显示,FimD、PilN蛋白都为亲水、稳定蛋白,无规则卷曲在二级结构中所占比例最高;FimD蛋白共有48个磷酸化位点,不存在跨膜区和信号肽;PilN蛋白共有85个磷酸化位点,PilN蛋白在1~50位氨基酸上可能出现跨膜区,26~27位氨基酸上出现信号肽;多种参数综合分析最终得到潜在的优势B细胞表位,FimD蛋白:7~18、144~152、307~315、365~373;PilN蛋白:77~86、138~149、516~524。通过对FimD、PilN蛋白进行综合分析,最终得出潜在的优势B细胞表位,为牛源致脑炎大肠杆菌多表位疫苗的进一步研究提供参考依据。

牛源致脑炎大肠杆菌多表位抗原的制备及免疫效果的初步评价

目的 为了初步评价基于FimD、PilN和PilV蛋白优势表位设计的重组蛋白免疫保护效果。方法 将FimD、PilN和PilV蛋白的优势B细胞表位串联,构建原核表达载体,然后在BL21(DE3)大肠杆菌中进行原核表达及纯化;用弗氏佐剂与重组蛋白充分混匀后免疫小鼠,收集血清,利用间接ELISA方法检测抗体效价,并进行抗原性的检测;三免后进行攻毒保护实验并对小鼠肝脏、脑和脾脏载菌量进行测定。结果 重组蛋白主要以包涵体形式表达。Western-blot结果显示出现一条特异性条带,与预期的重组蛋白大小相符,表明成功制备出多表位抗原。重组蛋白免疫小鼠后血清特异性抗体效价高达1:204 800。试验组小鼠攻毒后存活率为66%,对照组小鼠肝脏、脑和脾脏载菌量均显著高于试验组。结论 重组蛋白具有良好的抗原性和一定的免疫保护作用,具有研发牛源致脑炎大肠杆菌多表位疫苗的潜在价值。

效能建设视野下深化网格化监管的路径探析——工商所监管模式转型的实践与探索

行政效能。即行政组织实现行政管理目标的程度，其高低程度取决于行政能力、行政效率、行政效果等要素．是行政能力及实施能力后取得的行政效率与行政效果的总和。行政效能作为现代政府公共行政的核心价值，正逐步成为政府部门实施和评估行政行为的重要导向和依据。近年来，上海市工商局闸北分局把网格化监管作为工商所模式转型和效能建设的重要载体，开展了积极的创新实践，并从行政能力、行政效率、行政效果等行政效能的维度对网格化监管的深化路径进行了探索。

跨国公司知识产权滥用及对其规制

近年来，从美国的“特别301评估报告”到中国欧盟商会的《欧盟企业在中国建议书》，欧美国家反复要求我国加强知识产权保护力度；而与此同时，在《专利法》修改进程中，中国企业要求限制跨国企业知识产权滥用的呼声也日渐高涨。这是中外知识产权的博弈，也是知识产权保护的辨证衡平问题。

致犊牛脑炎大肠杆菌Flic3和FimD蛋白的生物信息学分析及克隆表达

为了对致犊牛脑炎大肠杆菌S9922的Flic3、FimD蛋白进行生物信息学分析,并进行诱导表达,试验利用在线分析软件对Flic3、FimD蛋白进行生物信息学分析,利用PCR技术扩增Flic3和FimD基因,构建重组质粒pET32a-Flic3和pET32a-FimD,转化BL21(DE3)大肠杆菌感受态进行原核表达,并进行SDS-PAGE分析和Western-blot检测。结果表明:Flic3蛋白的原子组成为C_(1381)H_(2284)N_(412)O_(496)S_(5),理论等电点为5.08,含有2个糖基化位点,α-螺旋、β-转角、β-片层和无规则卷曲分别占48.24%、6.39%、18.85%、26.52%,有13个可能的抗原表位。FimD蛋白的原子组成为C_(1828)H_(2798)N_(510)O_(588)S_(9),理论等电点为6.16,含有8个糖基化位点,α-螺旋、β-转角、β-片层和无规则卷曲分别占6.54%、5.50%、32.94%、56.02%,有15个潜在的抗原表位。Flic3和FimD蛋白都是亲水、稳定蛋白,都不含跨膜区和信号肽。SDS-PAGE分析结果显示,重组蛋白Flic3大小为51 ku,重组蛋白FimD大小为59 ku,皆以包涵体形式表达。Western-blot检测后目的条带与预期一致,具有良好的免疫原性。说明Flic3和FimD蛋白原核表达成功,可用于制备致犊牛脑炎大肠杆菌疫苗。

用奉献守护世博——上海世博会志愿服务日志(选登)

4月28日我们准备好了上午10时,分局54名志愿者代表齐聚一堂,为即将开幕的上海世博会誓师出征。＂在岗位上争当标兵,在社会上争当楷模,在弘扬世博文明、确保世博平安中争当先锋,为世博做贡献!＂在分局王磊局长的带领下,大家代表分局200多名干部进行了庄严的宣誓。