916例狂犬病疫苗免疫接种后抗体水平分析

目的：了解不同季节、年龄和性别等因素对疫苗接种效果的影响,为浙南地区狂犬病的防治提供指导.方法：应用ELISA间接法对2005年3月～2006年11月在我中心门诊注射狂犬病疫苗的916例临床患者进行血清抗体检测.结後果：接种疫苗后阳性率达84.8%.各年龄段的血清抗体的水平不同,季节和性别对抗体的血清水平无明显的影响.结论：国产狂犬疫苗5针免疫组具有良好的免疫原性,但是总的阳性率还是偏低,应该加强免疫的剂量和次数,对阴性人群应该再加强免疫,特别是年龄大的人群.同时注意季节因素对疫苗的免疫效果的影响.

温州市2005年不同人群HIV抗体检测结果分析

目的:为了解温州市艾滋病病毒感染状况,为温州市艾滋病的监测和防治工作提供理论依据。方法:收集2005年温州市各疾控系统、医疗单位、中心血站、戒毒所、出入境检验检疫局等单位各血清样本和资料,其中包括性病门诊就诊者、哨点监测、吸毒人员、献血者、卖淫者及部分术前病人等人群的样本血清学检测并进行资料分析。结果:2005年共检测138 572份血清,初筛检出H IV抗体阳性为179例,确证H IV抗体阳性为70例。H IV抗体阳性率高的人群为H IV阳性者的配偶、自愿检测者、性病病人、吸毒者,阳性率分别为7.69%、3.42%、2.83%、2.57%,术前检查者、献血员、劳教人员H IV抗体阳性检出率较低,阳性率分别为0.05%、0.01%、0.10%。70例H IV抗体阳性者中术前检查者、吸毒者、性病病人阳性构成比居前三位,分别为41.43%、21.43%、14.29%,自愿检测者、献血员、劳教人员、H IV阳性者配偶阳性构成比较低,分别为10.00%、7.14%、4.29%、1.43%。结论:温州市H IV感染率在特殊人群中比例较高,虽然一般人群仍处于较低水平但H IV的感染有开始向一般人群扩散的趋势,所以不仅要继续加强监测,同时还应开展健康教育为主的干预,提高我们一般人群自我防范意识,以遏制艾滋病在我市的流行和蔓延。

载体介导的小干扰RNA诱导p53基因的沉默

目的:筛选有效抑制p53基因表达的靶位点,以研究其在哺乳动物细胞中的功能。方法:用Ambion公司的RNA干扰(RNAi)设计软件设计了3段针对野生型p53基因的长度为19nt的反向重复序列,在人工退火条件下形成双链,将其构建到pSilencer3.1-H1neo载体上,与pcDNA3.1-HA-p53(野生型)载体共转染Cos7及293T细胞,用Westernblot检测HA-p53蛋白质的表达;将pCMV-GFP-p53与p53-RNAi或空载体共转入Cos7细胞,于激光扫描共聚焦显微镜下比较GFP-p53的表达;将p53-RNAi和空载体分别转入BEL-7405-p53-RE-luc+细胞,在不同剂量化疗药物阿霉素的作用下,通过活体成像仪观察内源p53的表达;利用G418(neo)筛选获得稳定整合p53-RNAi的H460细胞(p53野生型)株,用流式细胞仪分析正常及p53基因沉默细胞的周期变化。结果:筛选到一个有效的p53基因沉默位点,并在H460细胞中得到p53基因沉默的稳定细胞株。结论:获得了有效的p53基因RNAi位点,为进一步研究p53基因在细胞中的功能提供了有力的工具。

2010年-2012年温州地区手足口病原监测结果分析

目的分析温州地区肠道病毒的病原学特征和流行趋势,为手足口病的预防和控制提供依据。方法采集临床诊断为手足口病患者咽拭子和肛拭子,用荧光定量RT-PCR对肠道病毒分型。结果 2010年-2012年共检测3 110例,肠道病毒阳性率为73.31%,EV71、CoxA16和未定型肠道病毒阳性率分别为57.33%、4.86%、11.13%。阳性病例男女性别比为1.74,0岁~4岁儿童阳性数占91.62%,发病较高月份为4月-7月。结论 2010年-2012年温州手足口病患者检出的肠道病毒主要为EV71,其感染率高于CoxA16,是引起温州重症病例的主要病原体。2012年未定型肠道病毒阳性率高于2010年和2011年,提示对未定型肠道病毒需引起足够重视。0岁~4岁儿童发病率最高,发病高峰期为春末夏初,呈明显季节性。

HIV抗体不确定样本的调查分析

目的分析HIV抗体不确定样本的血清学特征,预测抗体进展情况,探讨不确定样本的应对方案。方法分析104例HIV抗体不确定者的WB条带特点及16例随访病例的初筛结果、病毒载量结果、受检者随访情况、抗体转归情况。结果 WB有12种带型,p24和gp160p24带型最常见。随访成功率为15.4%。13例转阳,首次S/CO>6,病毒载量可检出。3例为阴性,首次S/CO<6。结论 ELISA的S/CO高、硒标阳性且带型含gp160,条带深的样本阳转率高,gp160p24带型者可缩短随访时间,以增加随访率。ELISA的S/CO值、硒标结果、WB带型有助于分析患者的感染状态,预判断抗体转归趋势,对可疑病例重点关注,减少随访期间的二次传播,必要时可增加病毒载量和PCR检测,及早明确诊断。

2018年—2020年温州市外环境中禽流感病毒动态分布情况研究

目的了解2018年—2020年温州市外环境中H5、H7、H9亚型禽流感病毒污染情况,为人感染禽流感的防控提供依据。方法对温州市2018年—2020年共1796份外环境标本采用实时荧光定量聚合酶链反应方法进行流感病毒A型核酸检测,阳性标本进行H5、H7、H9亚型检测,H7阳性标本进行N9检测。结果2018年—2020年温州市外环境中禽流感病毒阳性率分别为24.3%、21.0%、14.7%。检出的病毒型别以H9和其他亚型为主,其次为H5,每年均有H5和H9混合阳性标本,2018年和2019年均检出H7阳性标本,无H7N9阳性标本。不同地区、季节、场所、标本类型禽流感病毒阳性率有差异,城乡活禽市场的阳性率最高,宰杀或摆放禽肉案板表面的擦拭标本阳性率最高。结论温州市外环境中禽流感病毒阳性率较高,型别多样,有感染人的风险,应积极采取综合性防控措施。

3类特殊HIV抗体WB带型病例转归情况研究

目的对3类特殊WB带型的病例转归情况进行分析研究,探讨HIV抗体确证试验在实际工作中存在的问题,为HIV抗体确证试验结果的判断和解释提供借鉴依据。方法对病例进行跟踪随访,结合初筛试验结果、WB条带特点、病毒载量结果、抗体转归情况及流行病学资料进行结合分析。结果 2例初检呈gp160、gp120带型的病例,1例随访仍为gp160、gp120,最终结合病毒载量和流行病学资料判为阳性,1例转为阴性;12例初检呈gp160、p24、p17或gp160、p24带型的病例,10例转阳,2例转阴;4例初检呈无特异性条带的病例,随访转阳。转阳的病例初检样本的病毒载量结果均为阳性,随访阴性的病例初检样本的病毒载量结果均为阴性。结论对于HIV抗体确证试验WB反应不强、刚满足判阳标准时,不能直接出具HIV-1抗体阳性报告,而对于第四代包含抗原检测试剂呈强阳性反应,即使确证试验为阴性,也必须进行随访。这3类样本应慎重对待,不能单纯依赖于HIV抗体检测,需结合病毒载量检测结果和流行病学资料辅助鉴别HIV感染状态。

沙门菌MFS外排泵耐药性相关基因的研究

目的调查沙门菌9种MFS外排泵耐药性相关基因的分布情况以及沙门菌的耐药情况。方法收集2012年4月-2014年8月温州地区176株沙门菌,用PCR方法检测9种外排泵基因（emr B3、emr B5、emr D1、emr D3、emr K、tet B、floR、yie O、yeb Q）并测序,进行NCBI基因数据库检索,同时测定菌株的MIC值。结果 176株沙门菌中9种MFS外排泵耐药基因均能检出,每株沙门菌中均检测到了2种-8种基因。药敏试验显示176株沙门菌除对左氧氟沙星、加替沙星、阿米卡星、亚胺培南完全敏感外,对其余17种抗生素均产生一定耐药性,所有菌株都呈2种及2种以上抗生素的耐药。结论沙门菌中MFS外排泵耐药性相关基因携带率高,或许是沙门菌高度耐药的一个重要原因。沙门菌呈多重耐药趋势,建议加强对生畜禽类沙门菌的监控和耐药性监测工作,以防止耐药菌株引起的食物中毒和暴发流行。

温州地区艾滋病感染者和病人合并感染乙肝、丙肝、梅毒等疾病的研究

目的:研究艾滋病感染者和病人(HIV/AIDS)合并感染乙型病毒性肝炎(HBV)、丙型病毒性肝炎(HCV)、梅毒(TP)的流行现状及其特点,为HIV/AIDS的防控和治疗提供科学依据。方法:选取2008年-2010年期间在温州实验室确认阳性的艾滋病感染者和病人的标本共678例,采用ELISA法,分别对标本进行乙肝表面抗原、丙肝抗体、梅毒抗体项目检测。结果:其中,合并感染乙肝的有102例(15.04%),感染丙肝84例(12.38%),感染梅毒145例(21.38%);同时感染乙肝、丙肝的有13例(1.91%),感染乙肝、梅毒有31例(4.57%),感染丙肝、梅毒的有13例(1.91%),同时感染乙肝、丙肝、梅毒的2例(0.29%)。结论:1、HIV感染者中HBV感染率略高于普通人群;HIV与HCV合并感染率显著高于普通人群,但低于国内外报道的HIV/HCV的30%以上;HIV与TP合并感染的比例显著高于普通人群以及其他地区艾滋病患者。2、合并感染的总体趋势有所控制。

四代酶联免疫试剂和硒标快速试剂用于HIV抗体补充试验的比较

目的通过对比分析艾滋病病毒(HIV)抗体筛查阳性结果与蛋白印迹试验(WB)结果,评价2种HIV抗体筛查试剂的检测性能。方法对2012-2016年送到确证实验室的标本,用四代酶联免疫吸附试验(ELISA)伯乐(简称酶标)和雅培硒标(简称硒标)测定,同时对于一阴一阳或双阳性的标本进行WB确证实验。结果总标本数3 557份,酶标阳性2 947份(82.9%),阴性610份(17.1%);硒标阳性2 838份(79.8%),阴性719份(20.2%);初筛双阴性565份,2 992份进行确证实验,确证阳性2 710份(90.6%),阴性131份(4.4%),不确定151份(5.0%)。两种HIV初筛试剂酶标阳性率比硒标高(x^2=10.994,P<0.05),差异有统计学意义。排除不确定标本,三种方法阳性率的差异无统计学意义(x^2=10.031,P>0.05)。酶标、硒标阳性符合率分别为99.74%、99.96%;酶标、硒标的阴性符合率分别为84.5%、95.0%。确证阳性组S/CO值(13.5)明显高于阴性组(2.95)("2=2 841,P=0.000),差异有统计学意义。用受试者特征曲线(ROC曲线)确定伯乐试剂特定阈值为8。结论两种初筛试剂检测性能良好,对于高浓度的标本,两者的检测结果比较一致,与确证试验的阳性符合率也升高;但对于低浓度或特殊标本,与确证试验阳性符合率相对较低,仍是检测的难点和重点。同时建议对于四代伯乐初筛阳性,确证阴性的标本,应进行随访。

儿童手足口病病毒隐性感染情况研究

目的了解温州地区儿童HFMD病毒隐性感染状况、组成及分布,为HFMD防控和发病强度预测提供科学依据。方法研究对象为温州地区0-6岁散居儿童和幼托机构儿童。采集肛拭子标本,提取病毒RNA后利用实时荧光RI-PCR检测人肠道病毒(HEV)、肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A16(CoxA16)的隐性感染情况。检测结果进行统计学分析。结果 2012年共收集395份标本,检测阳性EV、EV71、CoxA16分别为51例(12.9%)、27例(6.83%)、16例(4.05%),其它肠道病毒阳性标本8例(2.02%)。年龄分组中,2~岁和3~岁,感染率最高,各年龄组感染率比较,差异有统计学意义(x^2=14.965,P=0.005);在HFMD流行季节的隐性感染率要高于非流行季节,肠道病毒EV(x^2=9.683,P=0.002)和EV71(x^2=7.389,P=0.007)差异有统计学意义;对幼托儿童有HFMD暴发班级和正常班级的非感染儿童检测发现,与感染密切接触的儿童携带病毒要高于正常班级的儿童。结论手足口病病毒在儿童隐性感染率较高,特别是疾病的流行季节EV71和CA16的隐性感染要远高于非流行季节。

基于5’UTR-VP4-VP2区测序鉴定手足口病肠道病毒

目前肠道病毒(Enterovirus,EV)分子分型主要基于VP1区,此区不仅可以分型还能区分亚型,但不同型别的肠道病毒在VP1区的核苷酸变异很大,需要使用多对引物或高简并度的简并引物进行巢式PCR才能定型,实验过程繁琐。本研究发现肠道病毒5’UTR-VP4-VP2区两端序列高度保守能利用通用引物进行扩增、中间序列差异大于10%能区分不同型别。本研究建立并验证5’UTR-VP4-VP2区测序鉴定手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)临床标本中肠道病毒的方法。根据ICTV公布的人肠道病毒104个型别的核苷酸全序列,在肠道病毒5’UTR-VP4-VP2区设计引物(EV543F/EV1197R)。收集702份肠道病毒核酸检测阳性的手足口病临床标本,用EV543F/EV1197R引物扩增5’UTR-VP4-VP2区基因并测序,BLAST比对定型;对407份标本同时进行RTPCR分型检测。在702份标本中鉴定出15个型别679份肠道病毒,阳性率为96.7%;407份RT-PCR分型结果和本法比较,结果显示EV-A71、CV-A16和CV-A10两法一致性很好(Kappa值0.966~0.970),本法CV-A6阳性率(38.82%)优于RT-PCR分型(34.40%),Mcnemar卡方P值=0.003。肠道病毒5’UTR-VP4-VP2区测序法具有较好的敏感性和简便、快速的特点,可用于手足口病肠道病毒感染的实验室诊断和相关研究。

温州地区沙门菌的耐药情况研究

目的调查温州地区沙门菌的耐药情况,为沙门菌的防治工作及临床合理用药提供参考。方法收集2012年4月-2014年12月温州地区200株沙门菌,用琼脂二倍稀释法来测定沙门菌MIC值。结果 200株沙门菌除对左氧氟沙星、加替沙星、阿米卡星、亚胺培南完全敏感外,对其余17种抗生素均有一定耐药性,所有菌株都对2种及2种以上抗生素耐药。200株沙门菌共有39种耐药谱。3种来源菌株有8种相同的耐药谱。分离于患者和食品污染物监测样品的沙门菌株呈现更多种药物的耐药性,对5种以上药物的耐药比例分别为57.1%和50.0%,明显高于从业人员(22.5%)。结论温州市沙门菌呈多重耐药趋势,应从动物和人类两方面引导抗生素的合理使用,建立从源头治理到最终消费人群科学的筛选控制体系。加强对沙门菌的监控和耐药性监测工作,有利于指导沙门菌病的防治,提高对疫情的应急能力。

温州市HIV抗体检测结果分析

目的：了解2007年温州地区HIV人群感染特点及HIV流行现状,为艾滋病的监测、调查和控制等相关工作提供依据。方法：应用ELISA法对温州地区送检标本年龄和性别等资料详尽的1376例样本进行HIV抗体检测,HIV抗体初筛阳性样本重新用免疫印迹法进行确证实验。结果：该1376例样本中20-29年龄组送检人群数最大,其次为30-39年龄组,但30-39和40-49年龄组的阳性率高于20-29年龄组。男性检测数略多于女性,但阳性率无显著性差异。人群分类中检测数构成比较大的人群分别为自愿检测、其他羁押人员和性病门诊,构成比分别为49.57%、15.26%、13.81%。阳性构成比较高的分别为术前检测、自愿检测、吸毒者检测,构成比分别为31.82%、21.42%、11.69%。结论：感染人群有年长化趋势,HIV感染从高危人群向一般人群过渡,HIV感染情况令人堪忧,防治形势严峻,应加强对青少年的生活方式教育及性安全知识的普及,加大宣传力度和人群筛查范围。

利用logistic回归模型对艾滋病病毒抗体不确定者转归分析

目的利用logistic回归模型,分析艾滋病病毒(HIV)抗体不确定者的初筛、免疫印迹试验(WB)条带结果和其随访阳转的关系,提高对转归的预判断。方法收集2012—2016年HIV抗体不确定者酶标、硒标结果、WB条带结果,用受试者工作特征(ROC)曲线确定酶联伯乐试剂阈值,用logistic回归筛选WB条带的危险因素并建立预测模型。结果 79份不确定标本中,首次2种初筛结果都阳性与最终随访确证阳性符合率高达96.29%。ROC曲线确定伯乐试剂的特定阈值为8,S/CO>8提示随访转归阳性概率大。最常见的带型分别为p24、gp160+p24和gp160+gp120+p24;其中p24带型随访阴性的比例最高,占77.27%,gp160+p24有或无其他条带随访阳性概率较大。运用logistic回归模型筛选出gp160、p24、p17三个有意义的因素。结论初筛酶标、硒标检测结果双阳性,S/CO>8,gp160+p24有或无其他条带,随访结果为阳性概率较大。联合初筛结果、带型情况可较为客观、准确地预测HIV不确定患者转归结果。

温州地区手足口病流行特征及病原分析

目的分析温州地区2008—2013年手足口病流行特征和病原谱。方法分析温州地区近六年手足口发病特征和病原的构成谱,并对分离到的21株EV71危重症手足口病病毒的VP1（891bp）基因进行测序,利用MEGA 5.1进化树软件构建系统进化树。结果温州地区手足口病71.46%由EV71型引起,重症病例高达94.12%;发病年龄集中在0~5岁,1~3岁的EV71阳性病例占75.38%;以龙湾区、鹿城区、瓯海区和瑞安市阳性率最高。而Cox A16型以洞头县最高,平阳县次之。发病时间主要集中在5—7月,但2012年12月、2013年1月和2009年11—12月出现发病小高峰。VP1基因进化分析,EV71流行毒株为C4a亚型,与中国大陆近年来流行株高度同源。结论温州地区近六年手足口病病原以EV71型为主,基因分型为C4a亚型。

2016年—2019年温州市手足口病病原谱分析

目的了解温州市手足口病的病原谱构成,为温州地区手足口病的防控工作提供参考。方法通过温州市手足口病实验室监测网络,收集2016年—2019年核酸检测结果为肠道通用阳性的手足口病临床标本,通过RT-PCR扩增肠道病毒5′UTR-VP4-VP2区基因并测序,经序列比对完成肠道病毒型别的鉴定,未成功分型标本再采用荧光定量RT-PCR方法检测EV-A71、CV-A16、CV-A6和CV-A10。结果在1549份标本中成功分型1543份,共检出17个肠道病毒型别,构成比前5名为CV-A6(51.8%)、CV-A16(29.3%)、EV-A71(8.4%)、CV-A10(4.9%)和CV-A4(1.4%),2016年—2019年病原谱构成比前2名均是CV-A6和CV-A16。结论2016年—2019年温州市手足口病的病原谱较广,但每年的优势型别均为CV-A6,其次为CV-A16。

温州地区引起重症手足口病EV71的分子流行病学研究

目的:通过对温州地区引起重症手足口病EV71型的分子流行学研究,监测基因的变异,为科学防治手足口病工作提供依据。方法:对生物标本提取病毒RNA,检测阳性标本进行病毒分离得到毒株,对EV71型VP1片段、全基因组进行测序和分析。结果:临床诊断重症病例核酸检测阳性中,EV71阳性占所有手足口病阳性的比例为81.10%。从中分离到毒株,证实均为EV71 C4亚型。结论:温州全市手足口病疫情的防控形势非常严峻,主要以2周～3周岁儿童为主,5月-7月高发。温州的重症手足口病主要由EV71导致,为C4亚型。重症和死亡病例,可能与EV71病毒5'UTR的空间结构变异有一定的相关性。

温州市基因扩增实验室生物安全风险评估

目的了解并分析温州市基因扩增实验室设立单位的生物安全风险,为进一步落实实验室生物安全管理要求和措施提供依据。方法编制“基因扩增(PCR)实验室生物安全风险评估表”,设置3类共60个风险评估指标,总分值为100分。组织市级专家对全市56家基因扩增实验室设立单位进行生物安全风险评估,并对评估结果进行统计分析。结果基因扩增实验室设立单位组织管理和实验内务管理工作完成较好,而设施设备管理、消毒灭菌、人员管理、危险材料(样本)管理和应急处置等方面的工作较为薄弱。生物安全低风险33家,中风险18家,高风险4家,极高风险1家;县级公立医疗机构、其他机构生物安全风险较高。结论各实验室设立单位应该关注实验室生物安全管理,采取风险管理措施,减少和避免实验室生物安全事故的发生,提升实验室生物安全管理水平。

温州市2019年新诊断HIV-1感染者的病毒基因型分析

目的分析温州市2019年新诊断HIV-1感染者的病毒基因型,揭示亚型分布特点及流行趋势。方法采集232例HIV-1感染者血浆样本,采用巢式PCR扩增pol区基因,于Los Alamos HIV database下载参考序列,构建系统进化树确定基因亚型,利用HIV Blast工具进行同源性分析。结果获得199例感染者的pol区基因序列,以异性性传播(61.3%,122/199)为主,其次是同性性传播(23.1%,46/199)。同性性传播感染者以19~49岁(78.3%,36/46)的青壮年为主,多为无配偶。共检出8种基因亚型,以CRF07_BC(47.2%,94/199)和CRF01_AE(29.1%,58/199)为主;其次是CRF08_BC(6.5%,13/199)、C(6.0%,12/199)、B(4.5%,9/199)、CRF85_BC(2.5%,5/199)、CRF55_01B(1.5%,3/199)和CRF59_01B(0.5%,1/199)。检出2种独特重组型(URFs),分别是URF(CRF01_AE/BC)(1.0%,2/199)和URF(B/C)(1.0%,2/199)。发现20个传播簇,总成簇比例为20.6%(41/199),CRF07_BC、CRF01_AE和CRF08_BC的传播簇分别为6个、8个和2个;C、CRF55_01B、B和URF(CRF01_AE/BC)的传播簇均为1个。结论温州市2019年新诊断HIV-1感染者病毒基因亚型多样,以CRF07_BC和CRF01_AE为主,C亚型占比偏高,成簇率约20%。应加强对HIV-1亚型和传播簇的监测,掌握动态变化趋势。