人类白细胞抗原新等位基因A*2636的确认

背景:目前中华骨髓库主要采用分辨率较高的聚合酶链反应-寡核苷酸探针分型反向杂交荧光微珠法检测人类白细胞抗原HLA-A、B、DRB1,该方法在提高分辨率的同时,有些检测结果难以一次性确定,可采用DNA测序技术确认。目的:识别和确认一个人类白细胞抗原新等位基因。设计、时间及地点:以DNA为观察对象的开放性实验。常规初检聚合酶链反应-寡核苷酸探针分型反向杂交荧光微珠法于2007-11在河南省红十字血液中心中华骨髓库河南分库人类白细胞抗原组织配型实验室完成,测序实验于2008-02在戴诺生物技术(北京)有限公司人类白细胞抗原实验室完成。材料:中国造血干细胞捐献者初检结果可疑为新基因的重采血样5mL。方法:采用聚合酶链反应-寡核苷酸探针分型反向杂交荧光微珠法进行常规人类白细胞抗原分型,发现A位点反应格局异常,提示有2个无法解释的假阳性探针反应(10FP、88FP)和1个假阴性探针反应(58FN)、不能正常判读给出确切结果时,采用DNA测序技术测定人类白细胞抗原A位点外显子2,3,4(Exon2,3,4)的核苷酸序列,并与已知相近等位基因进行序列对比分析。主要观察指标:测序结果与已知人类白细胞抗原等位基因序列的比较分析。结果:聚合酶链反应-寡核苷酸探针分型反向杂交荧光微珠法基因分析结果显示,受检者人类白细胞抗原基因分型为A*02xx,26xx(10FP、88FP58FN),B*15(75),55xx,DRB1 08xx,11xx,A位点反应格局异常,提示有2个无法解释假阳性反应*(10FP、88FP),有1个假阴性探针反应(58FN),不能指定为任何人类白细胞抗原A位点等位基因。对本例人类白细胞抗原A基因第2,3,4外显子双向之直接测序结果分析显示:A*02010101,A*260101292S/C。分析测序结果峰图,292位置应为C,分析软件提示该基因改变在A26new一侧。该序列与人类白细胞抗原A*260101进行比对,同源性99%,在第2外显子区域292位碱基发生了G→C,74位的密码子GAC>CAC最终导致了氨基酸的改变,即天冬氨酸(Asp)→组氨酸(His)。结论:该序列为A位点的一个新等位基因,已在GenBank注册(注册号EU785343),并于2008-04被WHO-HLA因子命名委员会正式命名为A2636.(HWS10005530)。

酶标仪微板速率法检测ALT参数的优化

目的：探讨酶标仪微板法检测ALT参数的选择。方法：采用动力学。结果：ALT的标本量为50μl，基质液为200μl；基质液温度为33C，酶标仪温度为30C；延迟时间为120s，测定时间120-360s；校正因数为1500；初始吸光度值下限值为0．686；板内和板问变异系数为1．85％、3．37％CPT得分100％。结论：该方法实现ALT自动化检测。

全血储存期间K^+、Na^+和Cl^-浓度的变化

目的测定库存全血在储存期间K+、Na+和Cl-离子浓度的变化,为临床输血提供参考数据,探讨在临床大量输血及对心肾功能不全患者输血时,输血治疗的安全有效性。方法全血4袋(200 ml/袋,CPDA保养液)在采集2 h内将其每一袋均分成5袋(40 ml/袋),在库存0、1、3、7、10、14、21、28、35 d后的9个时间点,在无菌条件下每次取出2 ml作血浆K+、Na+和Cl-离子浓度测定。结果血液在库存3 d后其血浆K+离子浓度达(6.84±1.48)mmol/L,3周时达(19.70±3.27)mmol/L,而Na+和Cl-离子浓度未见明显改变(P>0.05)。结论库存全血K+离子浓度随存放时间延长而升高,而Na+和Cl-离子浓度无明显改变。在临床大量输血及对心肾功能不全患者输血治疗时,应考虑输注成分血或新鲜血液,避免使用储存时间较长的全血。

库存时间对冷冻鲜血浆胆碱酯酶活性影响

目的 :探讨不同库存时间新鲜冰冻血浆中胆碱酯酶活性的变化情况 ,指导临床治疗有机农药中毒时 ,合理选择使用不同库存时间的新鲜冰冻血浆。方法 :按《输血技术操作规程》留取新鲜冰冻血浆标本 ,分为 5组 ,分别于当日、库存 3、6、9、12个月测定其胆碱酯酶活性。结果 :库存 6个月之内新鲜冰冻血浆中胆碱酯酶活性无显著降低 ,而库存 6个月之后新鲜冰冻血浆中胆碱酯酶活性降低较为显著。结论 :治疗急性有机农药中毒的病人 ,应选择库存 6个月 ,最好是 3个月之内的新鲜冰冻血浆。